沙门氏菌噬菌体尾部受体结合蛋白RBP-55及其在检测沙门氏菌中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种沙门氏菌噬菌体尾部受体结合蛋白RBP

【技术实现步骤摘要】
沙门氏菌噬菌体尾部受体结合蛋白RBP
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55及其在检测沙门氏菌中的应用


[0001]本专利技术涉及食品生物
，具体涉及一种沙门氏菌噬菌体尾部受体结合蛋白RBP
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55及其在检测沙门氏菌中的应用。

技术介绍

[0002]沙门氏菌(Salmonella spp.)是重要的食源性病原体之一，可引起各种临床症状，包括恶心、呕吐、腹痛、腹泻、发烧和头痛，给人类和动物健康造成巨大威胁。沙门氏菌广泛存在于自然界中，普遍存在于人或动物肠道，粪便和肠道内容物为重要污染源，大多数农产品生产过程中会接触到污染物，因而污染沙门氏菌，畜禽肉类、蛋类、乳类食品最易受沙门氏菌污染。根据欧洲食品安全局(European Food Safety Authority，EFSA)指出，由沙门氏菌导致的疾病中，主要来源为鸡蛋和蛋制品，其次是奶酪、家禽以及猪肉，另外，食源性致病菌通过蔬菜感染疾病的事例在不断增加，其中包含沙门氏菌病。因此，沙门氏菌的检测在预防和控制方面尤为重要。
[0003]具有准确性、快速性、灵敏度高的新型微生物检测手段也是检测食品质量的重中之重。目前对食品中沙门氏菌的检测主要有传统基于培养的方法和快速检测方法，传统培养法虽然准确度高，但是过程繁琐耗时长，其中需要前处理富集细菌。快速检测方法大体分为两种：
[0004]1)第一种是基于分子生物学的检测方法，最具代表性的一种技术为聚合酶链式反应(PCR)。
[0005]2)另一种是基于免疫学的检测方法，主要是依赖抗原和抗体的特异反应展开检测，常见的一种检测技术为酶联免疫吸附法(ELISA)，具备特异、敏感的优势，但是高亲和力的抗体难以获得。普通方法达到富集增菌的同时也会大大增加检测时间。
[0006]噬菌体侵染细菌，完成其生命周期的第一步是特异性识别并结合细菌表面受体，其主要识别的细菌表面受体为脂多糖和细菌表面蛋白上特定的残基，噬菌体颗粒中承担这一重要功能的蛋白被称为受体结合蛋白(Receptor Binding Proteins，简称RBPs)，存在于噬菌体尾纤维或者尾刺的末端。由于受体结合蛋白介导的宿主识别是高度特异性的。将受体结合蛋白用作检测探针有以下优点：易于大量获得；RBPs具有模块化的性质，可将受体结合区分离，改造优化，可将具有不同宿主范围的RBPs融合表达，扩大宿主范围；与易发生重组和突变的完整噬菌体粒子相反，克隆原性在生产过程中保持不变，性质稳定，更适于商业化。因此，可以利用RBPs作为分子识别元件进行宿主菌的特异性检测技术研究。
[0007]目前噬菌体已经被广泛应用于食源性致病菌的快速检测方面，荧光标记法作为化学发光试剂常用的一种，其主要是使用化学键产生共价结合或者通过吸附力附着到宿主细胞的基团上，进而产生一定光强，检测宿主细菌的数量。物理发光法常借助量子点材料建立检测方法，微小纳米颗粒的半导体材料量子点具备较大的发光能力，作为一种荧光探针，量子产量及稳定发光是其主要的优势。
[0008]综上所示，噬菌体受体结合蛋白的特征使得其有望成为一种廉价且功能齐全的探针，具有在快速、准确检测食源性病原菌的应用潜力。

技术实现思路

[0009]本专利技术针对现有技术的缺陷，提供了一种沙门氏菌噬菌体尾部受体结合蛋白RBP
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55及其在检测沙门氏菌中的应用。
[0010]为实现上述目的，本专利技术所设计一种沙门氏菌噬菌体受体结合蛋白RBP
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55，其氨基酸序列为SED ID No.1。
[0011]编码上述沙门氏菌噬菌体受体结合蛋白RBP
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55的基因orf 55，其核苷酸序列如SED ID No.2。
[0012]上述噬菌体受体结合蛋白RBP
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55来自鼠伤寒沙门氏菌噬菌体(Salmonella Typhimurium bacteriophage)STP55，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2022085。
[0013]其中，鼠伤寒沙门氏菌噬菌体(Salmonella Typhimurium bacteriophage)STP55保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2022085，保藏日期为2022年1月18日，地址：中国武汉武汉大学；其中，该鼠伤寒沙门氏菌噬菌体在申请号为202011210849.3，专利技术名称为一株能同时裂解沙门氏菌和大肠杆菌的噬菌体STP55及应用的中国专利技术专利公开。
[0014]本专利技术还提供了一种重组表达载体pET28b
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orf 55，所述重组表达载体pET28b
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orf 55为含有上述述的基因orf 55的表达载体，其中，所述表达载体为原核细胞表达载体pET28b(+)。
[0015]本专利技术还提供了一种含有上述重组表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞为大肠杆菌T7E。
[0016]本专利技术还提供了一种上述噬菌体受体结合蛋白RBP
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55在特异性检测沙门氏菌中的应用。
[0017]本专利技术还提供了一种上述噬菌体受体结合蛋白RBP
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55在制备沙门氏菌快速荧光检测试剂盒中的应用。
[0018]本专利技术还提供了一种利用上述细胞制备噬菌体受体结合蛋白RBP
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55的方法，包括以下步骤：
[0019](1)将重组表达载体pET28b
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orf 55的大肠杆菌感受态细胞T7E培养，用异丙基硫代半乳糖苷诱导后继续培养离心，沉淀用磷酸盐缓冲液PBS重悬，即为悬浮菌液；
[0020](2)对悬浮菌液进行菌体破碎，离心收集上清，经镍柱亲和层析纯化分离，得到重组的噬菌体受体结合蛋白RBP
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55。
[0021]本专利技术还提供了一种沙门氏菌噬菌体受体结合蛋白
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量子点偶联物RBP
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55
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QDs的制备方法，包括以下步骤：
[0022]1)将水溶性羧基量子点进行活化，得到活化的水溶性羧基量子点QDs；
[0023]2)将上述制备的噬菌体受体结合蛋白RBP
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55与活化的水溶性羧基量子点进行偶联，得到含有噬菌体受体结合蛋白
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量子点偶联物RBP
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55
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QDs的BBS缓冲液，且含有噬菌体受体结合蛋白
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量子点偶联物RBP
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55
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QDs的BBS缓冲液中，BBS的摩尔浓度为10mmol/L，
[0024]噬菌体受体结合蛋白
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量子点偶联物RBP
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55
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QDs的摩尔浓度为1μmol/L。
[0025]作为优选方案，所述步骤1)中，水溶性羧基量子点的活化方法如下：
[0026]1)将羧酸修饰的量子点经超声分散充分混匀后，得到分散量子点，
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种沙门氏菌噬菌体受体结合蛋白RBP
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55，其氨基酸序列为SED ID No.1。2.一种编码权利要求1所述沙门氏菌噬菌体受体结合蛋白RBP
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55的基因orf 55，其核苷酸序列如SED ID No.2。3.一种重组表达载体pET28b
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orf 55，其特征在于：所述重组表达载体pET28b
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orf 55为含有权利要求2所述的基因orf 55的表达载体，其中，所述表达载体为原核细胞表达载体pET28b(+)。4.含有权利要求3所述重组表达载体的宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞为大肠杆菌T7E。5.一种权利要求1所述噬菌体受体结合蛋白RBP
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55在特异性检测沙门氏菌中的应用。6.一种权利要求1所述噬菌体受体结合蛋白RBP
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55在制备沙门氏菌快速荧光检测试剂盒中的应用。7.利用权利要求4所述细胞制备噬菌体受体结合蛋白RBP
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55的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将重组表达载体pET28b
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orf 55的大肠杆菌感受态细胞T7E培养，用异丙基硫代半乳糖苷诱导后继续培养离心，沉淀用磷酸盐缓冲液PBS重悬，即为悬浮菌液；(2)对悬浮菌液进行菌体破碎，离心收集上清，经镍柱亲和层析纯化分离，得到重组的噬菌体受体结合蛋白RBP
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55。8.一种沙门氏菌噬菌体受体结合蛋白
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量子点偶联物RBP
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55
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Q...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小红，丁一峰，王佳，朱文娟，邵彦春，黄晨曦，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：