靶向CD19的人源化抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供靶向CD19的人源化抗体，以及包含它的多特异性抗体、嵌合受体、抗体偶联物、药物组合物和试剂盒，以及它们在诊断/治疗/预防与CD19表达相关的疾病中的用途。与CD19表达相关的疾病中的用途。与CD19表达相关的疾病中的用途。

【技术实现步骤摘要】
靶向CD19的人源化抗体及其用途


[0001]本专利技术属于免疫治疗领域。更具体地，本专利技术涉及靶向CD19的人源化抗体，及其在预防和/或治疗和/或诊断疾病中的用途。

技术介绍

[0002]CD19是一种由556个氨基酸组成的I型跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，在B淋巴细胞以及滤泡树突状细胞表面表达。CD19与CD21、CD81和CD225形成B细胞受体复合物来调节B细胞的发育、增殖和分化，其中CD19发挥主要的信号传导作用。由于CD19只在正常和恶性B细胞中表达，几乎不在其他组织中表达，并且CD19在B细胞恶性转化过程中不丢失，对于难治性/复发性病例仍有效，使得CD19成为诊断和治疗B细胞恶性肿瘤的有效靶标。目前，靶向CD19的ADC和CAR
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T细胞疗法均已在临床上显示出针对B细胞恶性肿瘤的良好治疗效果。
[0003]本专利技术旨在提供一种靶向CD19的人源化抗体，及其在疾病预防和/或治疗和/或诊断中的用途。

技术实现思路

[0004]在第一个方面，本专利技术提供一种靶向CD19的人源化抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：1所示的CDR
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L1、如SEQ ID NO：2所示的CDR
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L2、如SEQ ID NO：3所示的CDR
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L3，所述重链可变区包含如SEQ ID NO：4所示的CDR
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H1、如SEQ ID NO：5所示的CDR
‑/>H2、如SEQ ID NO：6所示的CDR
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H3，并且所述轻链可变区与SEQ ID NO：10或12所示的氨基酸序列具有至少90％同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO：11或13的氨基酸序列具有至少90％同一性。
[0005]在一个实施方案中，所述CD19人源化抗体包含选自SEQ ID NO：10和12的轻链可变区和选自SEQ ID NO：11和13的重链可变区。
[0006]在一个实施方案中，所述CD19人源化抗体包含选自SEQ ID NO：22和23的接头。
[0007]在一个实施方案中，所述CD19人源化抗体的氨基酸序列选自SEQ ID NO：14
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17。
[0008]本专利技术还提供编码上述CD19人源化抗体的核酸分子。因此，在一个实施方案中，编码所述CD19人源化抗体的核酸分子与选自SEQ ID NO：18
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21的核苷酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％序列同一性，并且其编码的CD19人源化抗体能够特异性结合CD19抗原。优选地，编码所述CD19人源化抗体的核酸分子选自SEQ ID NO：18
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21。
[0009]在另一个方面，本专利技术还提供一种多特异性抗体(优选双特异性抗体或三特异性抗体)，其包含如上所述的CD19人源化抗体和一个或多个与其他抗原特异性结合的第二抗体或其抗原结合部分。
[0010]在一个实施方案中，第二抗体或其抗原结合部分可以具有任何抗体或抗体片段形式，例如全长抗体、Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv、scFv
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scFv、微抗体、双抗体或sdAb。
[0011]本专利技术还提供包含编码上述CD19人源化抗体或多特异性抗体的核酸分子的载体，以及表达所述CD19人源化抗体或多特异性抗体的宿主细胞。
[0012]在另一个方面，本专利技术还提供一种嵌合抗原受体，其包含本专利技术所述的CD19人源化抗体、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。优选地，所述嵌合抗原受体还包含一个或多个共刺激结构域。在一个实施方案中，本专利技术的嵌合抗原受体还可以包含靶向其他肿瘤抗原的第二抗体或其抗原结合部分。
[0013]本专利技术还提供编码如上所定义的靶向CD19的嵌合抗原受体的核酸分子，以及包含所述核酸分子的载体。
[0014]本专利技术还提供包含如上所定义的靶向CD19的嵌合抗原受体的细胞，优选免疫细胞，例如T细胞、NK细胞、NKT细胞、巨噬细胞、树突细胞。
[0015]在另一个方面，本专利技术还提供一种抗体偶联物，其包含本专利技术所定义的CD19人源化抗体和第二功能性结构，其中所述第二功能性结构选自Fc、放射性同位素、延长半衰期的结构部分、可检测标记物和药物。
[0016]在一个实施方案中，所述延长半衰期的结构部分选自：所述延长半衰期的结构部分选自白蛋白的结合结构、转铁蛋白的结合结构、聚乙二醇分子、重组聚乙二醇分子、人血清白蛋白、人血清白蛋白的片段和结合人血清白蛋白的白多肽(包括抗体)。在一个实施方案中，可检测标记物选自荧光团、化学发光化合物、生物发光化合物、酶、抗生素抗性基因和造影剂。在一个实施方案中，所述药物选自细胞毒素和免疫调节剂。
[0017]在另一个方面，本专利技术还提供一种检测试剂盒，其包含本专利技术所述的人源化抗体、多特异性抗体、抗体偶联物、嵌合抗原受体或工程化免疫细胞。
[0018]在另一个方面，本专利技术还提供一种药物组合物，其包含本专利技术所述的人源化抗体、嵌合抗原受体、多特异性抗体、抗体偶联物或工程化免疫细胞，和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
[0019]在另一个方面，本专利技术还提供一种治疗和/或预防和/或诊断与CD19表达相关的疾病的方法，包括向受试者施用如上所述的人源化抗体、嵌合抗原受体、多特异性抗体、抗体偶联物或药物组合物。
[0020]专利技术详述
[0021]除非另有说明，否则本文中所使用的所有科学技术术语的含义与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所了解的相同。
[0022]CD19人源化抗体
[0023]如本文所用，术语“抗体”具有本领域技术人员所理解的最广泛的含义，并且包括单克隆抗体(包含完整抗体)、多克隆抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、和能够表现期望的生物活性的携带一个或多个CDR序列的抗体片段或合成多肽。本专利技术所述抗体可为任何种类(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA等)或亚类(例如IgG1、IgG2、IgG2a、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2等)。
[0024]通常，完整抗体包括通过二硫键连接在一起的两条重链和两条轻链，每条轻链通过二硫键被连至各自的重链，呈“Y”形结构。每条重链包含重链可变区(VH)和重链恒定区，其中重链可变区包含三个互补决定区(CDR)：CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
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H3，重链恒定区包含三个恒定结构域：CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区，其中轻链可变
区包含三个CDR：CDR
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L1、CDR
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L2和CDR
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L3，轻链恒定区包含一个恒定结构域CL。在重链/轻链可变区中，CDR被更保守的框架区(FR)隔开。重链/轻链的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向CD19的人源化抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：1所示的CDR
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L1、如SEQ ID NO：2所示的CDR
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L2、如SEQ ID NO：3所示的CDR
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L3，所述重链可变区包含如SEQ ID NO：4所示的CDR
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H1、如SEQ ID NO：5所示的CDR
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H2、如SEQ ID NO：6所示的CDR
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H3，并且所述轻链可变区与SEQ ID NO：10或12所示的氨基酸序列具有至少90％同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO：11或13的氨基酸序列具有至少90％同一性。2.权利要求1所述的人源化抗体，其包含选自SEQ ID NO：10和12所示的轻链可变区和选自SEQ ID NO：11和13的重链可变区。3.权利要求1所述的人源化抗体，其包含选自SEQ ID NO：22和23的接头。4.权利要求1所述的人源化抗体，其中所述人源化抗体的氨基酸序列选自SEQ ID NO：14
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17。5.一种核酸分子，其编码权利要求1
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4任一项所述的人源化抗体。6.一种多特异性抗体，其包含权利要求1
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4任一项所述的人源化抗体和一个或多个与其他抗原特异性结合的第二抗体或其抗原结合部分。7.权利要求5所述的多特异性抗体，其中所述第二抗体或其抗原结合部分选自全长抗体、Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv、scFv
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scFv、微抗体、双抗体或sdAb。8.一种载体，其包含编码权利要求1
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4任一项所述的人源化抗体或权利要求6或7所述的多特异性抗体的核酸分子。9.一种宿主细胞，其表达权利要求1
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4任一项所述的人源化抗体或权利要求6或7所述的多特异性抗体。10.一种嵌合抗原受体，其包含权利要求1
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4任一项所述的人源化抗体或权利要求6或7所述的多特异性抗体、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。11.权利要求9所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域源自TCRα链、TCRβ链、TCRγ链、TCRδ链、CD3ζ亚基、CD3ε亚基、CD3γ亚基、CD3δ亚基、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD28、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137或CD154。12.权利要求9所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号传导结构域选自FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的胞内区。13.权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：周亚丽，姜小燕，陈功，任江涛，贺小宏，王延宾，韩露，
申请(专利权)人：南京北恒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：