与LRP5蛋白结合的抗体及使用方法技术

本文提供了特异性结合LRP5的抗体及其使用方法。用方法。用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与LRP5蛋白结合的抗体及使用方法
[0001]关于联邦资助研究的声明
[0002]无。
[0003]相关申请的引用
[0004]本申请要求2019年8月14日提交的美国临时申请62/886,913的优先权日的权益，该美国临时申请的内容通过引用以其整体并入本文。
[0005]联合研究协议各方的名称
[0006]无。
[0007]背景
[0008]Wnt信号传导在多种细胞过程(诸如细胞命运决定、增殖、存活、极性和迁移)的调节中具有关键作用1。由于Wnt信号传导途径中改变的表达或突变而引起的扰动与胚胎发育缺陷以及多种病理诸如癌症和骨质疏松症有关2‑4。Wnt信号导致典型和非典型信号传导途径的活化
1,5
。非典型途径活化不涉及细胞核或转录的信号分子，而是活化调节细胞骨架和钙库(calcium store)的细胞质信号。该途径主要在调节细胞极性或迁移中起作用。典型途径主要通过调节β
‑
联蛋白的细胞质水平来控制转录活性。在非刺激条件下，β
‑
联蛋白与由Axin、APC、CK1和GSK3b组成的破坏复合物缔合，这导致对β
‑
联蛋白的磷酸化、泛素化和蛋白酶体降解。Wnt信号传导使该复合物去稳定化，导致“游离”β
‑
联蛋白在胞质溶胶中积累，移位至细胞核，并作为TCF/LEF介导的转录的共活化物起作用。Wnt与七跨膜域受体的卷曲受体(frizzled)家族以及LRP5或LRP6结合，导致典型信号传导途径的启动6‑8。
>[0009]LRP5和LRP6是功能冗余的单次通过跨膜受体，它们共有约70％的同源性。Wnt配体与Fz和LRP5/6的结合导致破坏复合物和散乱蛋白(Dishvelled，Dsh/Dvl)的募集以及LRP5/6的位于细胞内结构域中的PPPSPxS基序的磷酸化9。这种磷酸化由GSK3b和CK1介导，这进而导致GSK3b活性减弱，抑制β
‑
联蛋白磷酸化和随后的蛋白酶体降解，并增强TCF/LEF介导的转录活性。LRP5在胚胎发育期间和成人组织中广泛表达。LRP5中的突变与骨量疾病相关，并且几种具有LRP5敲除或突变的小鼠模型表现出骨发育中的改变
10
。
[0010]已显示LRP5的表达在人类恶性组织和人类癌细胞系(诸如骨肉瘤)中升高，并显示这样的细胞系中的Wnt信号传导随着显性阴性LRP5的过表达而减弱
11
‑
13
。此外，LRP5似乎在调节细胞侵袭能力和细胞运动性方面也具有重要作用
14
‑
16
。虽然研究已显示LRP6在转导Wnt信号方面比LRP5更有效，但最近的遗传学实验已显示，一些Wnt配体需要两种受体都存在才能产生典型信号(17)。由于LRPS在调节Wnt信号传导方面的重要性及其在几种人类疾病中已确定的作用，LRPS正成为治疗性药物开发的越来越重要的靶。有关LRP5及其在Wnt信号传导和多种疾病发病机制中的作用的重要生物学仍有待发现，并且合成抗体的深度工具箱将有助于系统地揭示这些作用，并还将提供另外的靶向疗法。
[0011]Wnt信号传导导致典型和非典型信号传导途径的活化。非典型途径活化不参与细胞核或转录而是活化调节细胞骨架和钙水平的细胞质信号的信号分子。该途径主要在调节细胞极性或迁移中起作用。
[0012]典型途径主要通过调节β
‑
联蛋白的细胞质水平来控制转录活性。在未刺激的条件
下，β
‑
联蛋白与破坏复合物(包含Axin、APC、CD1和GSKβ)缔合，导致β
‑
联蛋白的磷酸化、泛素化和蛋白酶体降解。当Wnt与7次跨膜受体卷曲受体(FDZ)结合并与共受体低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP5或LRP6)结合时，Wnt信号传导活化。这种信号传导使破坏复合物去稳定化，部分通过将散乱蛋白(disheveled，Dsh/Dvl)吸引到质膜上，导致β
‑
联蛋白的积累，然后β
‑
联蛋白行进到细胞核并活化TCF/LEF介导的转录。
[0013]以下描述的本专利技术通过利用最新技术水平的抗体噬菌体展示文库和技术，鉴定出一组新的靶向LRP5细胞外表位的合成抗体。
[0014]概述
[0015]在一种实施方案中，本文提供了特异性结合LRP5的抗体，该抗体包含轻链可变区和/或重链可变区，重链可变区包含互补决定区CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
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H3，轻链可变区包含互补决定区CDR
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L1、CDR
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L2和CDR
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L3，并且所述CDR的氨基酸序列包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：抗LRP5抗体LRP5
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A7、LRP5
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A9、LRP5
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C5、LRP5
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C12、LRP5
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D9、LRP5
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E5、LRP5
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G2、LRP5
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G9、LRP5
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G10、LRP5
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G11、LRP5
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H3、LRP5
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H5、LRP5
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H9、LRP5
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R3O_D3、LRP5
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R3_E8、LRP5
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R3O_G6的CDR序列集。在一种实施方案中，所述CDR的氨基酸序列包含选自如以下列出的序列的序列或由选自如以下列出的序列的序列组成：CDR
‑
H1选自由以下组成的组：LSYYYM、ISYSYI、LSYSSM、ISSYSI、ISYSYI、IYSYSI、LSYYYM、FSSSSI、LYYYYI、LSYSSI、IYSYYI、LLYYSSM和FSSSSI；CDR
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H2选自由以下组成的组：SIYPYYGYTY、SSSYYGYTY、SISSSYGYTY、SIYSSYGSTS、SIYSSYGYTY、SIYPYSSYTS、SIYSSYGYTY、SIYPSYGYTY、SISPYYGYTS、SISSSYGSTS、SIYSYYGYTY、SISSSYGYTY、SISSSYGYTY SISSYYGYTS和YISPYYGYTS；CDR
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H3选自由以下组成的组：HGAM、TVRGSKKPYFSGWAM、SSYYSSVSSSVYAL、TVRGSKKPYFSGWAM、HYSYFFYAM、YAVYFPGYYWGM、WSHVSGHYSGM、WGAYHSSGYGM、GGSGVSHYGSVYYSWWAL、AAPYYGYYYSYAM、SGYGWYAM、GYWAI、SYPAM、SWAM、YWAL、GWGSPASAGYYGL、SSYYSSVSSSVYAL、TVRGSKKPYFSGWAM和TVRGSKKPYF本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗体，所述抗体特异性结合LRP5，所述抗体包含轻链可变区和/或重链可变区，所述重链可变区包含互补决定区CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
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H3，所述轻链可变区包含互补决定区CDR
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L1、CDR
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L2和CDR
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L3，其中所述CDR的氨基酸序列包含选自以下的CDR序列或由选自以下的CDR序列组成：抗LRP5抗体LRP5
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A7、LRP5
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A9、LRP5
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C5、LRP5
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C12、LRP5
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D9、LRP5
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E5、LRP5
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G2、LRP5
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G9、LRP5
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G10、LRP5
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G11、LRP5
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H3、LRP5
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H5、LRP5
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H9、LRP5
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R3O_D3、LRP5
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R3_E8、LRP5
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R3O_G6的CDR序列集。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述CDR的氨基酸序列包含选自如以下列出的序列的序列或由选自如以下列出的序列的序列组成：CDR
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H1选自由以下组成的组：LSYYYM、ISYSYI、LSYSSM、ISSYSI、ISYSYI、IYSYSI、LSYYYM、FSSSSI、LYYYYI、LSYSSI、IYSYYI、LLYYSSM和FSSSSI；CDR
‑
H2选自由以下组成的组：SIYPYYGYTY、SSSYYGYTY、SISSSYGYTY、SIYSSYGSTS、SIYSSYGYTY、SIYPYSSYTS、SIYSSYGYTY、SIYPSYGYTY、SISPYYGYTS、SISSSYGSTS、SIYSYYGYTY、SISSSYGYTY、SISSSYGYTY SISSYYGYTS和YISPYYGYTS；CDR
‑
H3选自由以下组成的组：HGAM、TVRGSKKPYFSGWAM、SSYYSSVSSSVYAL、TVRGSKKPYFSGWAM、HYSYFFYAM、YAVYFPGYYWGM、WSHVSGHYSGM、WGAYHSSGYGM、GGSGVSHYGSVYYSWWAL、AAPYYGYYYSYAM、SGYGWYAM、GYWAI、SYPAM、SWAM、YWAL、GWGSPASAGYYGL、SSYYSSVSSSVYAL、TVRGSKKPYFSGWAM和TVRGSKKPYFSGWAM；CDR
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L1是SVSSA；CDR
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L2是SASSLYS；和CDR
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L3选自由以下组成的组：AWGWGLF、VHYSPYSLI、YQYSGLI、FSHVSLI、ASYSPI、YHYYYLF、ASYAPI、SSSSPI、SSYSLI、GVSLI、YWFLI、PVGHYGYPI、SSYSPI、YWAYYSPI、VSYYPLI、SSYSLI和VHYSPYSLI。3.根据权利要求2所述的抗体，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含：i)如表2中列出的重链氨基酸序列；ii)与如表2中列出的重链氨基酸序列具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列是如表1中列出的CDR序列集，或iii)i)的保守取代的氨基酸序列，其中所述CDR序列是如表中列出的CDR序列集。4.根据权利要求2至3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含：i)如表2中列出的轻链氨基酸序列，ii)与如表2中列出的轻链氨基酸序列具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列是如表1中列出的CDR序列集，或iii)i)的保守取代的氨基酸序列，其中所述CDR序列是如表1中列出的CDR序列集。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述CDR序列是选自表1中鉴定的抗体的全CDR序列集。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述抗体与LRP6交叉反应。7.根据权利要求1所述的抗体，其中所述CDR序列包含选自表1中鉴定的抗体的轻链CDR
序列集或重链CDR序列集。8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体特异性结合LRP5。9.根据权利要求8所述的抗体，其中所述CDR序列是选自抗体LRP5
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A7、LRP5
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A9、LRP5
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C5、LRP5
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C12、LRP5
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D9、LRP5
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E5、LRP5
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G2、LRP5
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G9、LRP5
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G10、LRP5
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G11、LRP5
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H3、LRP5
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H5、LRP5
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H9、LRP5
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R3O_D3、LRP5
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R3_E8、LRP5
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R3O_G6的抗体的CDR序列集。10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体，所述抗体阻断Wnt配体与LRP5的Wnt3a结合位点的结合。11.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体，所述抗体阻断Wnt配体与LRP5的非Wnt3a结合位点的结合。12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。13.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体。14.根据权利要求1至13中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单链抗体。15.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体，其中所述抗体是选自以下的抗体结合片段：Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、scFv、dsFv、ds
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scFv，其二聚体、纳米抗体、微型抗体、双抗体及多聚体。16.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体。17.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体，其中所述抗体是还与FZD受体结合的双特异性抗体。18.根据权利要求1至17中任一项所述的抗体，所述抗体包含非天然糖基化模式。19.根据权利要求1至17中任一项所述的抗体，所述抗体包含半胱氨酸取代或添加，例如在恒定区或框架区中。20.一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含权利要求1至17中任一项所述的抗体和可检测的标记物或细胞毒性剂。21.根据权利要求20所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物包含选自以下的细胞毒性剂：美登素生物碱、澳瑞他汀、多拉司他汀、tubulysin、念珠藻素、吡咯并苯二氮卓类(PBD)二聚体、吲哚并苯二氮卓类二聚体、α
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鹅膏蕈碱、trichothene、SN
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38、倍癌霉素、CC1065、卡奇霉素、烯二炔抗生素、紫杉烷、多柔比星衍生物、蒽环类和它们的立体异构体、azanofide、电子等排体、类似物或衍生物。22.一种核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1至17中任一项所述的抗体。23.根据权利要求22所述的核酸分子，其中所述CDR序列中的一种或更多种由表2中的核酸编码。24.根据权利要求22所述的核酸分子，其中所述抗体包含由核酸编码的重链可变区，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：萨奇德夫，
申请(专利权)人：莫德麦博治疗公司，
类型：发明
国别省市：