一种FcRn抗原结合蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种FcRn抗原结合蛋白及其制备方法和应用。本发明专利技术通过杂交瘤技术得到了一系列对人FcRn

【技术实现步骤摘要】
一种FcRn抗原结合蛋白及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种FcRn抗原结合蛋白及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]免疫系统(immune system)是生物体抵抗外来病原、维持自身健康的重要防御性体系，主要由免疫器官、免疫细胞和免疫活性物质组成。免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)作为一种重要的免疫活性物质，其结构是由两条相同的轻链和两条相同的重链通过链间二硫键连接而成的，分为决定抗原结合特异性的可变区(variable region)和发挥免疫效应的恒定区(constant region)。免疫球蛋白根据恒定区结构不同可以分为五类，即IgG、IgA、IgM、IgE和IgD。
[0003]免疫球蛋白G(IgG)是初乳中含量最丰富的免疫球蛋白成分，母源IgG向乳中分泌和被新生动物摄取均需要通过胞转作用穿越上皮细胞屏障，这个过程需要一种具有转运功能的受体即新生儿Fc受体(neonatal Fc receptor，FcRn)的参与。其首先发现于新生的大鼠胃肠细胞，被认为与吸收母体乳液中的抗体有关。然后在人的胎盘细胞中发现，被认为与母体IgG通过胎盘屏障进入胎儿循环有关。后来在成人的多种组织中发现，这些组织包括肺，肝，肾，肠相关的表皮细胞和内皮细胞。
[0004]FcRn是由大小两个亚基组成的异源二聚体，大亚基分子量为45
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53kD，称为α链，小亚基是β2微球蛋白(β2m)，分子量为14kD，称为β链，两条链以非共价键的形式结合在一起。β2微球蛋白对于FcRn功能有重要的作用，α链必须和β2微球蛋白装配后才能发挥转运作用。α链与MHCⅠ类分子一样，具有α1、α2和α3共3个胞外功能区、1个跨膜区和1个胞浆尾区。跨膜区、细胞外功能区与MHCⅠ类分子相应区域同源性很高，但胞浆尾区同源性较低。由44个氨基酸残基组成的胞浆尾区，可能含有介导胞内途径的信号。在成年个体，FcRn的主要作用是通过与IgG的结合，帮助其通过细胞转运并保护IgG在细胞内转运过程中不被溶酶体降解，从而延长IgG分子在生物体内的半衰期。
[0005]在多种自身免疫性疾病中，自身抗体的产生是其发病和病情进展的主要原因之一。这些自身免疫性疾病包括：免疫中性粒细胞减少症，自身免疫性脑炎，自身免疫性贫血，重症肌无力，多发性硬化，类风湿性关节炎，狼疮，特发性血小板减少性紫癜(ITP)，狼疮性肾炎和膜性肾病等。
[0006]因此，在正常生理条件下，FcRn具有延长IgG分子半衰期的作用，在许多自身免疫性疾病中，FcRn同时延长了致病性的自身免疫性抗体(IgG)的半衰期，起到了加重疾病的作用。如果减弱FcRn的这种作用，可以起到加速致病性自身抗体代谢，从而减轻这些自身免疫性疾病的症状和延缓进展，达到治疗效果。通过FcRn特异性的单抗，结合并阻断FcRn与IgG的结合，是实现上述目的的有效方法之一。
[0007]专利CN201580029793.2提供了一种分离的抗FcRn抗体或其片段，可与IgG非竞争性地结合FcRn，以减少血清致病性自身抗体水平，并且因此可以用于治疗自身免疫疾病。专
利CN201680008485.6也提供了一种对人类新生儿Fc受体(FcRn)具有高结合亲和力的抗体，可用于例如促进受试者中自身抗体的清除，抑制受试者中的抗原呈递，阻断受试者中免疫应答例如阻断基于免疫复合体的免疫应答激活，以及治疗受试者中的免疫性疾病(例如自身免疫疾病)。
[0008]但现有技术中针对FcRn的抗体较少，因此，亟需提供一种新的高亲和力的FcRn特异性单抗，用于阻断FcRn与IgG分子的结合，从而用于多种自身免疫性疾病的治疗。

技术实现思路

[0009]针对上述不足，本专利技术提供了一种新的FcRn抗原结合蛋白及其制备方法和应用。本专利技术采用杂交瘤技术，得到了一系列新的具有生物学功能的FcRn抗原结合蛋白，所述的FcRn抗原结合蛋白对人FcRn
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ECD具有较好的亲和力及结合活性，能够阻断FcRn与IgG分子的结合，同时在体内可以加速IgG的代谢。本专利技术所述的FcRn抗原结合蛋白可用于治疗多种自身免疫性疾病，为自身免疫性疾病的治疗提供了一种新的思路。
[0010]为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
[0011]一方面，本专利技术提供了一种FcRn抗原结合蛋白。
[0012]具体地，所述的FcRn抗原结合蛋白包含以下互补决定区：
[0013](1)包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区1HCDR1；
[0014](2)包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区2HCDR2；
[0015](3)包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区3HCDR3；
[0016](4)包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区1LCDR1；
[0017](5)包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区2LCDR2；
[0018](6)包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区3LCDR3；
[0019]优选地，所述变体序列为与其来源的CDR相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的CDR序列；所述的置换为保守置换。
[0020]进一步具体地，所述的FcRn抗原结合蛋白包含：
[0021](1)、包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区VH；和/或包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
[0022]或者(2)、与(1)中的VH相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的VH；和/或，与(1)中的VL相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的VL；
[0023]或者(3)、与(1)中的VH相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意
组合的VH；和/或，与(1)中的VL相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合的VL；所述的置换是保守置换。
[0024]进一步具体地，所述的FcRn抗原结合蛋白还包含人的IgG4恒定区和人的kappa链恒定区，所述的人的IgG4恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示，所述的人的kappa链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。
[0025]进一步具体地，所述的FcRn抗原结合蛋白的VH与人的IgG4恒定区连接形成重链，所述的FcRn抗原结合蛋白的VL与人的kappa链恒定区连接形成轻链。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种FcRn抗原结合蛋白，其特征在于：所述的抗原结合蛋白包含以下互补决定区：(1)包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区1HCDR1；(2)包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区2HCDR2；(3)包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区3HCDR3；(4)包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区1LCDR1；(5)包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区2LCDR2；(6)包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区3LCDR3；所述变体序列为与其来源的CDR相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的CDR序列；所述的置换为保守置换。2.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于：所述的抗原结合蛋白包含：(1)、包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区VH；和/或包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；或者(2)、与(1)中的VH相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的VH；和/或，与(1)中的VL相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的VL；或者(3)、与(1)中的VH相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合的VH；和/或，与(1)中的VL相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合的VL；所述的置换是保守置换。3.根据权利要求2所述的抗原结合蛋白，其特征在于：所述的抗原结合蛋白还包含人的IgG4恒定区和人的kappa链恒定区，所述的人的IgG4恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示，所述的人的kappa链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；所述的FcRn抗原结合蛋白的VH与人的IgG4恒定区连接形成重链，所述的FcRn抗原结合蛋白的VL与人的kappa链恒定区连接形成轻链。4.根据权利要求3所述的抗原结合蛋白，其特征在于：所述的抗原结合蛋白包含：(1)包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的重链HC；和/或包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的轻链LC；或者(2)重链和轻链，其中，与(1)中的重链和轻链相比，所述重链具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性；和/或，所述轻链具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。5.一种FcRn抗原结合蛋白的突变体，其特征在于：所述的突变体包含突变的人IgG4恒定区，所述的突变的人IgG4恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。6.根据权利要求5所述的突变体，其特征在于：所述的突变体包含：如SEQ ID NO:11所示的HC，和/或如SEQ ID NO:10所示的LC。7.一种人源化FcRn抗原结合蛋白，其特征在于：所述的人源化FcRn抗原结合蛋白包含：(1)、包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的重链可变区VH；和/或包含SEQ ID NO:25
所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；或者(2)、与(1)中的VH相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少9...

【专利技术属性】
技术研发人员：娄竞，靳征，吕云英，孟萍，欧艳梅，谢写，黄姗姗，曲啸，苗双双，杨前勇，曲和之，陈建鹤，
申请(专利权)人：沈阳三生制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：