新冠病毒S蛋白NTD区域的特异性抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种用SARS

【技术实现步骤摘要】
新冠病毒S蛋白NTD区域的特异性抗体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及新冠病毒S蛋白NTD区域的特异性抗体及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]抗体是一种主要由浆细胞分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等外来物的蛋白质，该外来物被称为抗原。抗体和抗原的结合完全依靠非共价键的相互作用，这种特异性的结合机制使得抗体可以捕获外来微生物以及受感染的细胞，进一步诱导其他免疫机制对其进行攻击，或直接中和其目标。抗体及抗体相关产品已经被广泛应用于生命科学与医学等研究领域，基于抗原
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抗体特异性结合而衍生的诸多实验技术奠定了科学研究与临床治疗的重要基础，例如免疫诊断、免疫印迹、酶联免疫吸附、流式细胞分析等等。
[0003]在研究新冠病毒的过程中，抗体是一个非常重要的研究工具，对于患者诊断、病毒分析与研究等都具有重大的价值和意义。自疫情爆发初始，世界各地均开始着手开发新冠病毒特异性的抗体。根据近期的文献报道，世界上多个研究机构均已经开发出特异性识别并结合新冠病毒表面S蛋白的鼠单抗，他本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用SARS
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2的S蛋白NTD区域免疫骆驼科动物所得的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段。2.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段，其特征在于，所述骆驼科动物选自单峰驼、双峰驼、美洲驼、骆马、羊驼和小羊驼。3.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段，其特征在于，所述抗体为纳米抗体，所述抗体活性片段为纳米抗体活性片段；和/或，所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。4.根据权利要求1～3任意一项所述的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段，其特征在于，所述抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段与所述SARS
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2的S蛋白NTD区域结合的kd值在4100nM以下，优选在500nM以下，更优选在120nM以下，更优选在65nM以下，更优选在10nM以下,更优选在6nM以下,更优选在1nM以下。5.根据权利要求1或4所述的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段，其特征在于，编码所述SARS
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2的S蛋白NTD区域的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；优选地，所述SARS
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2的S蛋白NTD区域由包括如下步骤的方法制备而成：将编码所述SARS
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2的S蛋白NTD区域的核苷酸序列与编码跨膜结构的核苷酸序列串联，构建至载体质粒；将所述载体质粒转染至真核细胞系中表达，使SARS
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2的S蛋白NTD区域以跨膜蛋白的形式展现于细胞膜外。6.一种构建抗体文库的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将SARS
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2的S蛋白NTD区域作为抗原免疫骆驼科动物，采集被免疫动物的静脉外周血，分离得到淋巴细胞；(2)提取所述淋巴细胞的总mRNA，反转录为cDNA并进行扩增；(3)将所述扩增得到的DNA插入病毒表达载体、优选为噬菌体表达载体，转化入细菌、优选为大肠杆菌，收集菌落，得抗体文库；优选地，所述步骤(1)中，所述骆驼科动物为羊驼，和/或所述免疫采用皮下注射方式，和/或所述免疫的次数为3～5次，和/或在最后一次免疫之前和之后分别采集被免疫动物的静脉外周血。7.权利要求6所述方法获得的抗体文库，或由所述抗体文库表达产生的多克隆抗体。8.一种构建抗原特异性抗体文库的方法，其特征在于，包括如下步骤：对权利要求7所述抗体文库进行筛选，获得抗原特异性抗体文库；优选地，包括如下步骤：(i)对所述抗体文库进行培养，释放病毒；(ii)将所述病毒与抗原进行孵育，去掉与抗原非特异性结合的病毒，保留与抗原特异性结合的病毒；(iii)用所述与抗原特异性结合的病毒侵染细菌、优选为大肠杆菌，收集菌落，获得抗原特异性抗体文库。9.权利要求8所述方法获得的抗原特异性抗体文库，或由所述抗原特异性抗体文库表达产生的与抗原特异性结合的多克隆抗体。10.一种制备抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段的方法，其特征在于，包括如下步骤：对权利要求7所述抗体文库进行筛选，获得与抗原特异性结合的抗原结合蛋白、抗体或抗体
活性片段；优选地，包括如下步骤：(a)对所述抗体文库进行培养，释放病毒；(b)将所述病毒与抗原进行孵育，去掉与抗原非特异性结合的病毒，保留与抗原特异性结合的病毒；(c)用所述与抗原特异性结合的病毒侵染细菌、优选为大肠杆菌，将被侵染的细菌涂抹至平板培养基培养，挑选单一菌落，可选择地对所述单一菌落进行抗原特异性结合鉴定；更优选地，还包括：(d)提取所述单一菌落的DNA，转化至宿主细胞并表达。11.权利要求10所述方法获得的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段。12.特异性识别和/或结合SARS
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2的S蛋白NTD区域的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段，其特征在于，所述抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段包含至少一个重链可变区；所述重链可变区具有：如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17所示的CDR1；如SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33所示的CDR2；和如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48或SEQ ID NO:49所示的CDR3；优选地，所述抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段包含一个所述重链可变区且缺失轻链。13.特异性识别和/或结合SARS
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2的S蛋白NTD区域的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段，其特征在于，所述抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段包含至少一个重链可变区；所述重链可变区具有：如SEQ ID NO:2所示的CDR1、如SEQ ID NO:18所示的CDR2和如SEQ ID NO:34所示的CDR3；或，SEQ ID NO:3所示的CDR1、如SEQ ID NO:19所示的CDR2和如SEQ ID NO:35所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:4所示的CDR1、如SEQ ID NO:20所示的CDR2和如SEQ ID NO:36所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:5所示的CDR1、如SEQ ID NO:21所示的CDR2和如SEQ ID NO:37所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:6所示的CDR1、如SEQ ID NO:22所示的CDR2和如SEQ ID NO:38所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:7所示的CDR1、如SEQ ID NO:23所示的CDR2和如SEQ ID NO:39所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:8所示的CDR1、如SEQ ID NO:24所示的CDR2和如SEQ ID NO:40所示的
CDR3；或，如SEQ ID NO:9所示的CDR1、如SEQ ID NO:25所示的CDR2和如SEQ ID NO:41所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:10所示的CDR1、如SEQ ID NO:26所示的CDR2和如SEQ ID NO:42所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:11所示的CDR1、如SEQ ID NO:27所示的CDR2和如SEQ ID NO:43所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:12所示的CDR1、如SEQ ID NO:28所示的CDR2和如SEQ ID NO:44所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:13所示的CDR1、如SEQ ID NO:29所示的CDR2和如SEQ ID NO:45所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:14所示的CDR1、如SEQ ID NO:30所示的CDR2和如SEQ ID NO:46所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:15所示的CDR1、如SEQ ID NO:31所示的CDR2和如SEQ ID NO:47所示的CDR3；或，如SEQ ID NO:16所示的CDR1、如SEQ ID NO:32所示的CDR2和如SEQ ID NO:48所示的C...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘剑峰，徐涛，张胜蓝，徐小兰，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：