一种无血清培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种无血清培养基及其制备方法和应用。所述无血清培养基由添加成份和基础培养基组成，所述添加成份包括营养因子、生长因子、辅助因子和抑制细胞凋亡因子中的至少一种。本发明专利技术提供的无血清培养基所有成分明确，无动物来源，对人体无毒副作用；该无血清培养基可较好维持毛囊细胞、皮肤角质细胞的活性，存活率达90％左右，增殖能力极佳；本发明专利技术的无血清培养基可提供人体毛囊体外生长所需的所有物质，可维持离体毛囊活性一周以上，可维持干细胞再生来源毛囊的活性长达140天以上；采用本发明专利技术的无血清培养基培养的毛囊在移植后，可直接生长，避免毛囊进入休止期。休止期。休止期。

【技术实现步骤摘要】
一种无血清培养基及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种无血清培养基及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]目前，在社会压力及不良生活方式的双重作用下，导致脱发群体不断壮大，并呈现年轻化趋势。脱发虽然不会严重影响人的生理健康，但是对个人形象、自尊、情感健康都带来了极大的威胁，从而影响人们的工作和生活。植发手术是解决脱发问题的主要技术手段，植发手术中的毛发与供发部位的毛发性质、生长规律完全一致，并且安全无排异性，无不良反应，种植结束后的毛发密度可接近正常密度，外观真实自然，是目前脱发患者的最佳选择。但是针对供体区没有足够发源的患者，该方法也无能为力。干细胞是人体及各种组织的初始来源，干细胞具有自我更新和不断增殖的能力，以及多向分化的潜能，因此通过干细胞体外培养毛囊再生毛囊也是解决脱发问题的潜在方向，目前也有多项基于干细胞再生毛囊的研究。
[0003]但是，无论植发手术还是干细胞再生毛囊都存在一个共有的问题，即随着体外培养时间的增长，离体毛囊活性逐渐丧失或退化。在植发手术过程中，毛囊离体时间约为4
‑
6小时，离体过程中因为环境和温度改变，以及营养物质的缺乏，导致毛囊中部分细胞发生凋亡，从而毛囊移植后会进入一段时间的休止期。而干细胞诱导毛囊过程中所产生的毛囊结构，也可能随着环境的改变和营养的缺乏，导致毛囊的退化。因此，维持毛囊长时间体外培养的活性是保证毛囊移植存活率的关键。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种无血清培养基及其制备方法和应用，以解决植发过程中毛囊长时间离体所导致的存活率低、干细胞再生毛囊过程中毛囊退化等问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取以下的技术方案：
[0006]第一方面，本专利技术提供一种无血清培养基，由添加成份和基础培养基组成，所述添加成份包括营养因子、生长因子、辅助因子和抑制细胞凋亡因子中的至少一种。
[0007]进一步的，所述基础培养基为DMEM/F
‑
12培养基和Neurobasal培养基的混合培养基。
[0008]优选的，所述DMEM/F
‑
12培养基和Neurobasal培养基的混合体积比例为1:(0.6～1.4)。
[0009]进一步的，所述营养因子为GlutaMAX培养基添加剂、不含维生素A的B
‑
27补充物、N2补充物或insulin中的至少一种。
[0010]优选的，所述营养因子为GlutaMAX培养基添加剂、不含维生素A的B
‑
27补充物、N2补充物和insulin。
[0011]优选的，GlutaMAX培养基添加剂在无血清培养基中的终浓度为1X，不含维生素A的
B
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27补充物在无血清培养基中的终浓度为0.5X
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1X，N2补充物在无血清培养基中的终浓度为0.5X
‑
1X，insulin在无血清培养基中的终浓度为1
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10μg/mL。
[0012]进一步的，所述生长因子为EGF，其在无血清培养基中的终浓度为5
‑
20ng/mL。
[0013]进一步的，所述辅助因子为hydrocortisone、cholera toxin、triiodothyronine、β巯基乙醇、Normocin、Z
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VAD
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FMK、HA14
‑
1或肌醇中的至少一种。
[0014]优选的，所述辅助因子为hydrocortisone、cholera toxin、triiodothyronine、β巯基乙醇、Normocin、Z
‑
VAD
‑
FMK、HA14
‑
1和肌醇。
[0015]优选的，hydrocortisone在无血清培养基中的终浓度为0.4
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0.5μg/mL，cholera toxin在无血清培养基中的终浓度为0.05
‑
0.15nM，triiodothyronine在无血清培养基中的终浓度为0.5
‑
3nM，β巯基乙醇在无血清培养基中的终浓度为0.05
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0.1mM，Normocin在无血清培养基中的终浓度为50
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200μg/mL，Z
‑
VAD
‑
FMK在无血清培养基中的终浓度为30
‑
60μM，HA14
‑
1在无血清培养基中的终浓度为20
‑
50μM，肌醇在无血清培养基中的终浓度为60
‑
100mg/L。
[0016]进一步的，所述抑制细胞凋亡因子为Y
‑
27632，其在无血清培养基中的终浓度为5
‑
20μM。
[0017]第二方面，本专利技术提供一种无血清培养基的制备方法，按照上述无血清培养基的成份及含量混合均匀。
[0018]第三方面，本专利技术提供一种无血清培养基的应用，将所述无血清培养基用于毛囊体外生长培养、毛囊细胞培养以及毛囊滋养液。
[0019]进一步的，所述毛囊体外生长培养的毛囊为人体毛囊或人体干细胞体外分化形成的毛囊。
[0020]优选的，所述人体毛囊包括但不限于头发毛囊，眉毛毛囊，腿部毛囊以及胸部毛囊。
[0021]优选的，所述人体干细胞包括但不限于皮肤来源的成体干细胞、诱导多功能干细胞或胚胎干细胞。
[0022]本专利技术的有益效果为：
[0023]本专利技术提供的无血清培养基所有成分明确，无动物来源，对人体无毒副作用；该无血清培养基可较好维持毛囊细胞、皮肤角质细胞的活性，存活率达90％左右，增殖能力极佳；本专利技术的无血清培养基可提供人体毛囊体外生长所需的所有物质，可维持离体毛囊活性一周以上，可维持干细胞再生来源毛囊的活性长达140天以上；采用本专利技术的无血清培养基培养的毛囊在移植后，可直接生长，避免毛囊进入休止期。
附图说明
[0024]图1为本专利技术的无血清培养基培养的毛囊干细胞细胞状态图；
[0025]图2为本专利技术的无血清培养基和普通血清培养基分别培养角质细胞Hacat的细胞状态图；
[0026]图3为本专利技术无血清培养基培养角质细胞Hacat的存活率测试图；
[0027]图4为不同的培养基培养来源于毛囊干细胞的毛囊类器官、培养人体来源的毛囊培养图；
[0028]图5为本专利技术无血清培养基培养来源于毛囊干细胞的毛囊类器官或人体来源的体外毛囊的小鼠体内移植生长图。
具体实施方式
[0029]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术的技术方案作进一步清楚、完整地描述。需要说明的是，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无血清培养基，其特征在于，由添加成份和基础培养基组成，所述添加成份包括营养因子、生长因子、辅助因子和抑制细胞凋亡因子中的至少一种。2.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F
‑
12培养基和Neurobasal培养基的混合培养基。3.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述营养因子为GlutaMAX培养基添加剂、不含维生素A的B
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27补充物、N2补充物或insulin中的至少一种。4.根据权利要求3所述的无血清培养基，其特征在于，GlutaMAX培养基添加剂在无血清培养基中的终浓度为0.5X
‑
1X，不含维生素A的B
‑
27补充物在无血清培养基中的终浓度为0.5X
‑
1X，N2补充物在无血清培养基中的终浓度为0.5X
‑
1X，insulin在无血清培养基中的终浓度为1
‑
10μg/mL。5.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述生长因子为EGF，其在无血清培养基中的终浓度为5
‑
20ng/mL。6.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述辅助因子为hydrocortisone、cholera toxin、triiodothyronine、β巯基乙醇、Normocin、Z
‑
VAD
‑
FMK、HA14...

【专利技术属性】
技术研发人员：石俊芳，付廷灵，滕凌，梁庆，李芳芳，黄继英，苏梓坚，吴妙梨，
申请(专利权)人：朗肽生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：