一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法技术

本发明专利技术公开了一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法，涉及生物技术领域，针对多能干细胞向造血干细胞分化的难度大，技术成本高等问题，现提出如下方案，包括基底膜提取物、玻连蛋白和细胞培养基。本发明专利技术通过不同培养液基础上产生的培养基中，能够实现在恒温、正常氧气浓度情况下多方main诱导多能干细胞向造血干细胞分化，且利用基底膜提取物和玻连蛋白为干细胞分化提供养分，使得降低分化成本的同时，缩减了添加培养液的工序，进而形成状态强度稳定的造血干细胞，同时本发明专利技术中的化学成分稳定，生物研发成本低，安全性高，分化效率高，能够为生物制药相关领域提供质量稳定良好的细胞，具有较高的商用和药用价值。具有较高的商用和药用价值。具有较高的商用和药用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法。

技术介绍

[0002]多能性干细胞是指能够发育为身体的所有类型的干细胞，但不能发育为胚外组织（还是胎盘），胚胎干细胞是来自于卵裂期之后的囊胚的内细胞团，是多能性干细胞的一种，一般而言，多能性干细胞除了胚胎干细胞，还可以是iPSC（诱导多能性干细胞），专能干细胞（Multipotent stem cell，也有翻译成“多能”干细胞的）是指能发育为一系列体细胞但不具备发育为所有体细胞类型的干细胞。
[0003]造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，是一个异质性的群体，具有长期自我更新的能力和分化成各类成熟血细胞的潜能，它是研究历史最长且最为深入的一类成体干细胞，对研究各类干细胞，包括肿瘤干细胞，具有重要指导意义，而多能干细胞向造血干细胞分化的目的在于通过多能干细胞扩增分化为造血干细胞或修复造血干细胞，以此来治疗血液性疾病，对于医疗科技有重大的意义，而现有的分化扩增手段不仅难度大，成本高，同时分化后的细胞成活率低，细胞强度弱，进而现在提出一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法来解决以上的技术问题。

技术实现思路

[0004]（一）专利技术目的为解决
技术介绍
中存在的技术问题，本专利技术提出一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法，本专利技术通过不同培养液基础上产生的培养基中，能够实现在恒温、正常氧气浓度情况下多方main诱导多能干细胞向造血干细胞分化，且利用基底膜提取物和玻连蛋白为干细胞分化提供养分，使得降低分化成本的同时，缩减了添加培养液的工序，进而形成状态强度稳定的造血干细胞，同时本专利技术中的化学成分稳定，生物研发成本低，安全性高，分化效率高，能够为生物制药相关领域提供质量稳定良好的细胞，具有较高的商用和药用价值。
[0005]（二）技术方案本专利技术提供了一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法，包括基底膜提取物、玻连蛋白和细胞培养基；其中还包括多能干细胞向造血干细胞分化的方法，具体有以下的步骤：S1：制备基底膜提取物；S2：制备玻连蛋白；S3：制备培养基，并将制备的基底膜提取物和玻连蛋白放入培养基中培养S4：处理诱导性多能干细胞，并放入培养基中与基底膜提取物和玻连蛋白一起培养，得到扩增分化后的造血干细胞。
[0006]作为本专利技术一种优选的方案，所述步骤S1中的基底膜提取物制备具体步骤如下：S1：将干细胞进行纯化反应后提取可溶性的基底膜提取物，并将该基底膜提取物进行聚合反应后冷冻，获得凝胶基质；S2：将凝胶基质解冻后稀释在培养基中，进行冷藏处理。
[0007]作为本专利技术一种优选的方案，所述步骤S2中的玻连蛋白制备有如下的制备步骤：将玻连蛋白储存在
‑
80
°
C的环境中，解冻后等分试样，利用PBS试剂稀释后置于培养基中包被室温下孵育。
[0008]作为本专利技术一种优选的方案，所述步骤S3中的培养基制备有如下的步骤：步骤1：将冷藏的补剂取出并解冻，在无菌环境下添加到基础培养基中；步骤2：随后在避免光照的情况下将培养基加热至室温，获得培养基。
[0009]作为本专利技术一种优选的方案，所述补剂为氨基酸、胰岛素或水乳蛋白中的任意一种。
[0010]作为本专利技术一种优选的方案，步骤S4中诱导性多能干细胞的处理步骤如下：步骤1：在水浴中轻轻旋转冷冻管，将诱导性多能干细胞解冻，打开前用70％乙醇或等效消毒剂对冷冻管进行消毒；步骤2用无菌移液管，将冷冻保护剂以及细胞混合物从冷冻管转移到离心管中；步骤3：在室温下，缓慢地逐滴向离心管中适当的培养液，轻轻前后摇动离心管，将细胞离心后，去除并倒掉上清液，并加入添加适量的培养液；步骤4：轻拍离心管，使细胞沉淀脱离，并接种到包被的6孔板中，轻轻摇动板，以使细胞均匀铺展在整个孔中培养。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的上述技术方案具有如下有益的技术效果：综上所述，本专利技术通过不同培养液基础上产生的培养基中，能够实现在恒温、正常氧气浓度情况下多方main诱导多能干细胞向造血干细胞分化，且利用基底膜提取物和玻连蛋白为干细胞分化提供养分，使得降低分化成本的同时，缩减了添加培养液的工序，进而形成状态强度稳定的造血干细胞，同时本专利技术中的化学成分稳定，生物研发成本低，安全性高，分化效率高，能够为生物制药相关领域提供质量稳定良好的细胞，具有较高的商用和药用价值。
附图说明
[0012]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0013]图1为本专利技术的细胞分化数量示意图；图2为本专利技术的细胞分化速度示意图。
[0014]下文的描述本质上仅是示例性的而并非意图限制本公开、应用及用途。在本专利技术中，术语“药学上可接受的”，表示考虑到待治疗的疾病或病症以及相应的施用途径，所指出的材料不具有引起合理谨慎的医师避免将该材料施用于患者的性质。例如，通常要求这种材料基本上是无菌的，在本专利技术中，术语“治疗”是指在伤害或干预之前、期间和/或之后预防、治愈、逆转、减弱、减轻、最小化、抑制、制止和/或停止疾病或病症的一种或多种临床症
状，在本专利技术中，术语“患者”或“对象”是指用药物组合物或根据本文所述的方法治疗的动物，包括哺乳动物，例如，鼠、犬、马、牛、猿或人类，特别是人类。
[0015]本文所引用的各种出版物、专利和公开的专利说明书，其公开内容通过引用整体并入本文，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
具体实施方式
[0016]下文的描述本质上仅是示例性的而并非意图限制本公开、应用及用途。应当理解，在所有这些附图中，相同或相似的附图标记指示相同的或相似的零件及特征。各个附图仅示意性地表示了本公开的实施方式的构思和原理，并不一定示出了本公开各个实施方式的具体尺寸及其比例。在特定的附图中的特定部分可能采用夸张的方式来图示本公开的实施方式的相关细节或结构。
[0017]实施例一：一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法：干细胞中的凝胶基质从肿瘤细胞中纯化处理出可溶性基底膜提取物，基质在20
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40℃环境下聚合，形成重构的基底膜，将凝胶基质解冻后稀释在培养基中，进行冷藏处理，解冻后，使用移液器将基底膜提取物放入培养基中，用DMEM培养基稀释基底膜提取物，稀释比例为1:80，获得ECM凝胶基质；将1:80稀释的ECM凝胶基质加入6孔板的每个孔中，旋转培养板，以使ECM凝胶基质均匀地铺展在板的表面上，并将其存放在2
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8℃的环境中冷藏过夜至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料，其特征在于，包括基底膜提取物、玻连蛋白和细胞培养基；其中还包括多能干细胞向造血干细胞分化的方法，具体有以下的步骤：S1：制备基底膜提取物；S2：制备玻连蛋白；S3：制备培养基，并将制备的基底膜提取物和玻连蛋白放入培养基中培养S4：处理诱导性多能干细胞，并放入培养基中与基底膜提取物和玻连蛋白一起培养，得到扩增分化后的造血干细胞。2.根据权利要求1所述的一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法，其特征在于，所述步骤S1中的基底膜提取物制备具体步骤如下：S1：将干细胞进行纯化反应后提取可溶性的基底膜提取物，并将该基底膜提取物进行聚合反应后冷冻，获得凝胶基质；S2：将凝胶基质解冻后稀释在培养基中，进行冷藏处理。3.根据权利要求1所述的一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法，其特征在于，所述步骤S2中的玻连蛋白制备有如下的制备步骤：将玻连蛋白储存在
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80℃的环境中，解冻后等分试样，利用PBS试剂稀释后置于培养基中包被室温下孵育。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：冷玉娇，刘银笛，李丁，
申请(专利权)人：深圳中旭生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：