一种成体肺干细胞外泌体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种干细胞外泌体，具体涉及一种成体肺干细胞外泌体及其制备方法和应用，包括如下步骤：S1：将肺干细胞接种并进行培养，至密度达50

【技术实现步骤摘要】
一种成体肺干细胞外泌体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种干细胞外泌体，具体涉及一种成体肺干细胞外泌体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]以慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD，简称慢阻肺)为代表的一系列重大呼吸系统疾病已成为全球第三大死亡原因。其共同病理特征为肺实质和小气道损伤导致慢性气道阻塞、肺部纤维化、呼吸阻力增加和肺功能不全，通常与直接暴露于有害颗粒或气体环境中有关。世界卫生组织预测，仅慢阻肺一项疾病，到2030年将影响全球近4亿人。此类患者会因肺损伤导致肺功能进行性减退，进而严重影响病人的劳动力和生活质量，造成巨大的经济负担。在我国，慢阻肺是导致慢性呼吸衰竭和慢性肺源性心脏病最常见的病因，约占全部病例的80％。
[0003]目前针对此类肺损伤性疾病的治疗方法无法直接阻止其发展，主要在于减轻症状以及改善生活质量。肺移植是终末期的唯一治疗方法，然而，器官移植本身就存在潜在的手术风险，合适的供体肺也十分缺乏，并且移植治疗后患者需要终身服用免疫抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种成体肺干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：将肺干细胞接种于第一培养器皿中进行培养，待细胞生长至密度达50
‑
90％融合时，收集肺干细胞；S2：将步骤S1收集到的肺干细胞于第二培养器皿中进行传代培养，待细胞生长至密度达到60
‑
100％融合时，弃去培养基并洗涤，随后加入外泌体收集液继续进行培养；S3：收集步骤S2培养得到的含有外泌体的收集液并进行过滤；S4：将步骤S3过滤后的收集液与PEG溶液混合后静置过夜，得到外泌体
‑
PEG混合液；S5：将步骤S4得到的外泌体
‑
PEG混合液离心，弃去上清液，经重悬后，得到所述的成体肺干细胞外泌体。2.根据权利要求1所述的一种成体肺干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，步骤S1包括如下一项或多项：(i)培养使用的培养基为肺干细胞培养基；接种密度为0.5
‑
10
×
104个细胞/cm2；(ii)所述的第一培养器皿中预先铺被有滋养层细胞；所述的滋养层细胞的接种密度为0.5
‑5×
104个细胞/cm2；(iii)所述的第一培养器皿中预先铺被有基底胶，所述的基底胶为蛋白浓度不低于1mg/mL的Matrigel Matrix。3.根据权利要求1所述的一种成体肺干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述的收集肺干细胞的步骤为：弃去培养基并用PBS缓冲液洗涤一次，随后按照0.075
‑
0.2mL/cm2加入0.05
‑
0.25％胰酶并在37℃下孵育0.5
‑
15min，重复至少一次，直至肺干细胞全部脱落，终止消化，随后在1100
‑
1200rpm转速下离心3
‑
5min得到肺干细胞沉淀。4.根据权利要求1所述的一种成体肺干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，步骤S2包括如下一项或多项：(i)传代培养使用的培...

【专利技术属性】
技术研发人员：左为，张婷，
申请(专利权)人：苏州吉美瑞生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：