【技术实现步骤摘要】
支气管基底层细胞在制备治疗COPD药物中的应用
[0001]本专利技术涉及再生医学
，具体涉及一种临床级自体支气管基底层细胞的制备工艺及其在治疗慢性阻塞性肺病COPD中的应用。
技术介绍
[0002]肺脏是一个由上皮细胞和其它类型细胞共同构成的复杂器官，发挥着呼吸的重要功能。在执行呼吸任务的过程中，特别是当接触到一些外来的或内在的有害物质时，例如大气污染物、细菌病毒或血液中的毒性物质，肺内的细胞会大量死亡并诱发炎症反应，从而导致大规模的肺部组织损伤。这种大规模的损伤往往会引发各种肺部疾病，如慢性阻塞性肺病(COPD)、支气管扩张(BE)和肺纤维化等。
[0003]慢性阻塞性肺病(简称“慢阻肺”，COPD)是一类慢性气道阻塞性疾病的统称。这是一类发病率和死亡率都较高的疾病。慢阻肺发病学的中心环节是吸烟和其他有害气体或吸入颗粒刺激导致的慢性气道炎症，支气管由于慢性炎症造成粘膜肿胀、上皮细胞坏死、腺体增生、粘液增多、支气管扭曲塌陷，发生肺气肿时肺泡结构破坏、肺弹性降低。慢阻肺的临床表现为：慢性咳嗽、咳痰，严重时出现呼...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种临床级自体支气管基底层细胞的制备方法在制备治疗慢性阻塞性肺病COPD的药物中的应用，其特征在于，所述临床级自体支气管基底层细胞的制备方法包括如下步骤：组织准备：取离体活性支气管刷检组织备用；酶解：对上述组织进行消化处理，终止消化后收集细胞；铺板、扩增培养：取部分经消化处理后的细胞，利用铺被滋养层细胞的培养板对细胞进行铺板培养，收集细胞并利用铺被滋养层细胞的培养板对其进行扩增培养，待细胞长满至培养板表面积的50％
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90％时，进行传代培养；收集细胞：待传代培养细胞长满至培养皿表面积的85％
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95％时，消化并收集贴壁细胞，洗涤即可。2.根据权利要求1所述的应用，其中所述治疗COPD包括改善FEV1，FEV1/FVC，DLCO，MMEF，MVV肺功能指标。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述组织消化液包含99v％的DMEM/F12，1
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20ng/mL的DNA酶，0.1
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4mg/mL蛋白酶XIV和10
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200ng/mL胰酶；所述消化处理的温度为37℃，时间为0.5
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2h。4.根据权利要求1
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3任一项所述的应用，其特征在于，所述终止液包含90v％DMEM和10v％FBS。5.根据权利要求1
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4任一所述的应用，其特征在于，支气管刷检组织来自于至少一个部位。6.根据权利要求1
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5任一所述的应用，其特征在于，对经酶解后的细胞、经铺板培养后的细胞进行冻存；优选在冻存细胞前，进行菌检和支原体检测。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，快速解冻细胞，进行铺板培养和/或扩增培养。8.根据权利要求1
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7任一所述的应用，其特征在于，铺板培养包括以下步骤：取待进行铺板培养的细胞，用培养基重悬并铺于铺被滋养层细胞的培养板中，培养板中加入抗生素；在37℃，CO2浓度为4％
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8％条件下培养，隔天更换培养基，待细胞呈克隆状生长至细胞聚集成团，细胞克隆长大至超过80％的克隆中有40
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100个细胞，且随机观察的5个视野中有3个视野均有A级和B级克隆时，收集细胞。9.根据权利要求1
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8任一项所述的应用，其特征在于，利用铺被滋养层细胞的培养板于37℃进行扩增培养；同时对细胞形态进行观察和检测，随机观察5个视野，A级和B级克隆超过50％；所述铺被有滋养层细胞的培养板中，滋养层细胞铺满培养板面积的50％
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70％。10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述A级克隆轮廓规则圆滑，克隆边界清晰，克隆内细胞排列紧致，大小均一；所述B级克隆轮廓基本规则，克隆边界平滑清晰，克隆内细胞大部分紧致均一，有少量细胞体积稍大，排列略显疏松。11.根据权利要求1
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10任一所述的应用，其特征在于，所述传代培养为n次(n大于1且不大于7)，其中，利用铺被滋养层细胞的培养皿进行n
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1次传代培养，至n
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1次传代培养后细胞
长满至培养皿表面积的50％
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90％；利用铺被基质胶的培养皿进行第n次传代后的铺板培养。12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，在n次传代培养中，每一次传代培养时细胞长满至培养皿表面积的50％
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90％。13.根据权利要求11或12所述的应用，其特征在于，所述传代培养的具体操作为：第一次传代培养，利用铺被滋养层细胞的培养皿对待培养细胞进行培养，待长满至细胞培...
【专利技术属性】
技术研发人员：张婷，
申请(专利权)人：苏州吉美瑞生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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