SAFit2、培养基在促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化中的应用制造技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体涉及SAFit2、培养基在促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化中的应用。本发明专利技术提供SAFit2在促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元高效分化中的应用。本发明专利技术所述SAFit2能够促进人源诱导型多能干细胞高效分化为多巴胺能神经元。巴胺能神经元。巴胺能神经元。

【技术实现步骤摘要】
SAFit2、培养基在促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化中的应用


[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体涉及SAFit2、培养基在促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化中的应用。

技术介绍

[0002]现阶段针对人的神经精神类疾病的研究方法有限，主要原因是难以获得正常人及患者的神经细胞样品，仅极少数研究来源于患者尸检的神经细胞。但是，由于物种进化水平的差异，动物与人之间无保守性的基因缺陷无法建立对应的动物模型，且动物模型不能理想地反应人疾病的症状和病理变化本质，导致大多动物实验中有治疗效果的药物在临床前试验中因药物不良的安全性和有效性而以失败告终。因此，寻找合适的人源化的细胞模型一直是医药科学领域的关注的重点和解决的难点。
[0003]国际上的几个研究团队已成功建立人类胚胎干细胞(hESC，human embryonic stem cells)向多巴胺能神经元分化的方案。使用此方案于人诱导型多能干细胞(human inducedpluripotency stem cells，hiPSC)向多巴胺能神经元分化，仅获得1.5～33％的TH(酪氨酸羟化酶)阳性的多巴胺能神经元。与hESC相似，hiPSC经诱导后可获得个体特异性的三个胚层的多种细胞类型，但细胞来源充分且无伦理学障碍，具有更为好的应用前景。因此，迫切需要开发有效的策略使hiPSC高效且快速分化为多巴胺能神经元。SAFit2影响多巴胺神经元分化至今国内外未见相关报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供SAFit2、培养基在促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化中的应用。本专利技术所述SAFit2能够促进hiPSC高效分化为多巴胺能神经元。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术提供了SAFit2在促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化中的应用。
[0007]本专利技术提供了一种促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化的组合物，所述组合物包括SAFit2。
[0008]本专利技术一种促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化的培养基，所述培养基包括含SAFit2的DAP分化培养基和含SAFit2的DAN分化培养基。
[0009]优选的，所述括含SAFit2的DAP分化培养基和含SAFit2的DAN分化培养基中SAFit2的浓度分别为0.01～10μM。
[0010]优选的，所述含SAFit2的DAP分化培养基以DMEM/F
‑
12培养基和神经基础培养基为基本培养基，还包括N2补充剂、不含维生素A的B27补充剂、抗坏血酸、盐酸多索啡、SB431542、嘌呤吗啡胺和CHIR99021。
[0011]优选的，所述N2补充剂的添加体积为基本培养基体积的1％，不含维生素A的B27补
充剂的添加体积为基本培养基体积的2％；所述含SAFit2的DAP分化培养基中抗坏血酸的浓度为1～1000mM，盐酸多索啡的浓度为0.1～10μM，SB431542的浓度为0.1～20μM，嘌呤吗啡胺的浓度为3～4μM，CHIR99021的浓度为0.8～1.6μM。
[0012]优选的，所述含SAFit2的DAN分化培养基以神经基础培养基为基本培养基，还包括B27补充剂、脑源性神经营养因子、胶质细胞系源性神经营养因子、转化生长因子β3、抗坏血酸、db
‑
cAMP和DAPT。
[0013]优选的，所述B27补充剂的添加体积为基本培养基体积的2％；所述含SAFit2的DAN分化培养基中脑源性神经营养因子的浓度为5～50ng/mL，胶质细胞系源性神经营养因子的浓度为5～50ng/mL，转化生长因子β3的浓度为0.1～5ng/mL，抗坏血酸的浓度为1～1000mM，db
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cAMP的浓度为0.1～5mM和DAPT的浓度为0.1～10μM。
[0014]本专利技术提供了上述技术方案所述培养基在促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化的应用。
[0015]本专利技术提供了一种促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化的方法，包括以下步骤：
[0016]将人源诱导型多能干细胞接种于含SAFit2的DAP分化培养基中分化培养，得多巴胺能神经元祖细胞；
[0017]将所述神经元祖细胞接种于含SAFit2的DAN分化培养基中分化培养，得多巴胺能神经元。
[0018]有益效果：
[0019]本专利技术提供SAFit2在促进人源诱导型多能干细胞(hiPSC)向多巴胺能神经元高效分化中的应用。SAFit2为FKBP5(FK506结合蛋白5重组蛋白)的高选择性抑制剂，而FKBP5是多个蛋白的分子伴侣，参与多条细胞信号通路以调节细胞发育和功能，同时FKBP5与葡萄糖摄取的PKB(蛋白激酶B)的底物AS160(Akt丝氨酸/苏氨酸激酶160)相关联，调节糖代谢和能量代谢。FKBP5与核内转录因子IKKα(核因子κB抑制物激酶α)、IKKε(核因子κB抑制物激酶ε)、MAPK(MAP激酶)等结合，调节细胞的增殖、存活、分化过程。FKBP5可与CDK(周期蛋白依赖性激酶)1/4/9/11a等相互作用，异构化Tau(微管相关蛋白)并促进微管聚合，参与细胞骨架形成和微管的折叠，在调节神经细胞结构和功能方面发挥着重要作用。本专利技术实施例结果表明：添加SAFit2的培养基能够显著提高TH(酪氨酸羟化酶)阳性细胞比例及提高TH基因和蛋白的表达水平。由此可见，本专利技术所述SAFit2能够用于促进hiPSC向多巴胺能神经元高效分化。
[0020]另外，本专利技术提供了促进hiPSC向多巴胺能神经元高效分化的培养基，其中，嘌呤吗啡胺能够作为SHH信号通路的激活剂，CHIR99021能够作为GSK3B通路抑制剂，这两个通路在胚胎时期协同作用促进中脑多巴胺能神经元发育。N2补充剂、不含维生素A的B27补充剂、B27补充剂、脑源性神经营养因子、胶质细胞系源性神经营养因子、转化生长因子β3为神经生长提供营养，抗坏血酸、db
‑
cAMP和DAPT等可发挥促进细胞分化，抑制细胞增殖作用。
[0021]通过将各个组分和用量的调控下，进一步保证促进hiPSC向多巴胺能神经元分化的速度，具有高效的优势。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0023]图1为DAP分化培养基中嘌呤吗啡胺(PM)浓度的优化；
[0024]图2为DAP分化培养基中CHIR9901(CH)浓度的优化；
[0025]图3为hiPSC分别在含有SAFit2的DAP分化培养基和不含SAFit2的DAP分化培养基中分化培养，在分化培养第1～11天的情况，其中标尺为50μm，D1、D3、D5、D7、D11分别为分化后第1天、第3天、第5天、第7天、第11天；
[0026]图4为hiPSC分别在含有SA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.SAFit2在促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化中的应用。2.一种促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化的组合物，其特征在于，所述组合物包括SAFit2。3.一种促进人源诱导型多能干细胞向多巴胺能神经元分化的培养基，其特征在于，所述培养基包括含SAFit2的DAP分化培养基和含SAFit2的DAN分化培养基。4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述含SAFit2的DAP分化培养基和含SAFit2的DAN分化培养基中SAFit2的浓度分别为0.01～10μM。5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于，所述含SAFit2的DAP分化培养基以DMEM/F
‑
12培养基和神经基础培养基为基本培养基，还包括N2补充剂、不含维生素A的B27补充剂、抗坏血酸、盐酸多索啡、SB431542、嘌呤吗啡胺和CHIR99021。6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述N2补充剂的添加体积为基本培养基体积的1％，不含维生素A的B27补充剂的添加体积为基本培养基体积的2％；所述含SAFit2的DAP分化培养基中抗坏血酸的浓度为1～1000mM，盐酸多索啡的浓度为0.1～10μM，SB431542的浓度为0.1～20μM，嘌呤吗啡胺的浓度为3～4μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：李红，李锦，吴宁，李斐，卢关伊，方婷，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：