一种碱性蛋白酶突变体AprBpM及其应用制造技术

本发明专利技术属于酶工程及微生物工程领域，具体涉及一种碱性蛋白酶突变体AprBpM及其应用。首先，本发明专利技术以碱性蛋白酶AprBp为出发模板，通过增加二硫键和点突变获得突变体AprBpM，本发明专利技术获得的碱性蛋白酶突变体AprBpM在70℃热处理5分钟后的酶活保留率是AprBp的3.52倍；其次，通过优化启动子和信号肽实现突变体AprBpM在枯草芽孢杆菌高效表达，在高密度发酵培养条件下最高酶活达到65230U/mL；最后，通过突变体AprBpM水解废弃虾蟹壳制备多肽应用于农业种植领域。植领域。植领域。

【技术实现步骤摘要】
一种碱性蛋白酶突变体AprBpM及其应用


[0001]本专利技术属于酶工程及微生物工程领域，具体涉及一种碱性蛋白酶突变体AprBpM及其应用。

技术介绍

[0002]多肽作为一种新型生物刺激素能够促进植物生长、提高植物抗逆，在绿色农业种植发挥重要作用。目前氨基酸多肽制备方法主要分为化学法和酶法。相比于化学法，酶法具有反应条件温和，产物结构完好，绿色无污染等优势，因此酶法是目前最最推崇的方法。
[0003]蛋白酶能够水解蛋白原料制备氨基酸多肽，蛋白酶根据反应条件可以分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。在前期的研究中（专利公开号CN111893126A）我们对来自芽孢杆菌Bacillus patagoniensis的碱性蛋白酶（简称AprBp）进行重组表达和特性表征。碱性蛋白酶AprBp对许多蛋白原料（鱼粉、鸡肉粉、大豆蛋白粉等）具有良好的水解能力。但是较差的热稳定性以及较低的表达量限制了AprBp的产业化应用，因此需要定向的提升AprBp的热稳定性以及表达量，从而为其进一步应用奠定基础。在本专利技术中，首先以碱性蛋白酶AprBp为出发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种碱性蛋白酶突变体AprBpM，其特征在于，所述碱性蛋白酶突变体AprBpM的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的碱性蛋白酶突变体AprBpM，其特征在于，编码所述氨基酸的序列为多聚核苷酸序列，多聚核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种重组表达载体pHY
‑
P
cry
‑
SP
Bs1
‑
aprbpm，其特征在于，包含权利要求1所述的碱性蛋白酶突变体AprBpM的编码基因aprbpm、启动子P
cry
和信号肽SP
Bs1
；所述启动子P
cry
和信号肽SP
Bs1
的序列分别如SEQ ID NO.61和SEQ ID NO.62所示。4.一种重组菌，其特征在于，包含权利要求3所述的重组表达载体pHY
‑
P
cry
‑
SP
Bs1
‑
aprbpm；所述重组菌为重组表达载体转化菌株得到的。5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于，所述菌株为枯草芽孢杆菌。6.根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建荣，祝木金，陈微，王平，余思，钟斌，曹革，
申请(专利权)人：深圳润康生态环境股份有限公司，
类型：发明
国别省市：