一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂及应用制造技术

本发明专利技术涉及核酸检测试剂技术领域，且公开了一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂及应用，包括核酸外切酶、缓冲液、氯化钾、氯化镁、恒温聚合酶、荧光染料、乙酸镁、探针、甘油、甜菜碱、甲酰胺、一对引物和逆转录酶，所述核酸外切酶的含量为16ng/μL

【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂及应用


[0001]本专利技术涉及核酸检测试剂
，具体为一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂及应用。

技术介绍

[0002]核酸可分为脱氧核糖核酸(dna)和核糖核酸(rna)，是所有生命形式的基本要素。dna携带遗传信息并负责编码蛋白质的基本单元氨基酸。rna在基因的编码、解码、调节和表达中起到重要的作用。因此，核酸已作为重要的生物标志物应用于生物研究和医学诊断。核酸扩增技术为病原微生物的检测、生物材料的追溯与鉴真(如肉类)，以及其他基因检测提供了重要的理论基础。
[0003]人疱疹病毒一般采用PCR
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荧光探针法进行检测，在扩增过程中需要昂贵的仪器，同时仪器需要具备精细的温度控制程序和加热模板，从而实现在很高的温度下DNA模板链的变性，在较低的温度下退火利用引物延伸模板；体系中需要耐受高温的聚合酶；在PCR循环中，每个循环的退火时间都很短，这就要求引物必须快速找到模板上的同源匹配区段，以实现延伸，这就要求PCR有过量的PCR引物，而过量的引物会与模板错配，引发错误扩增或产生引物二聚体。
[0004]而RAA技术是重组酶介导等温核酸扩增技术的简称，是一种利用重组酶、单链结合蛋白、DNA聚合酶在等温条件下(最佳温度37℃)进行核酸扩增的技术。具体原理为：重组酶、单链结合蛋白、引物形成复合体扫描双链DNA，在与引物同源的序列处使双链DNA解旋，单链结合蛋白(SSB)防止单链DNA复性，在能量和dNTP存在的情况下，由DNA聚合酶完成链的延伸，5
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20分钟就可实现仪器扩增，为此，提出一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂及应用。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂及应用，具备操作简单，在常温下可以实现核酸的快速扩增，不需要改变温度，便于使用等的优点，解决了上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]本专利技术提供如下技术方案：一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂，包括核酸外切酶、缓冲液、氯化钾、氯化镁、恒温聚合酶、荧光染料、乙酸镁、探针、甘油、甜菜碱、甲酰胺、一对引物和逆转录酶，所述核酸外切酶的含量为16ng/μL
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20ng/μL，缓冲液的体积含量为6％到8％，氯化钾0
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200mM，氯化镁5mM
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100mM，恒温聚合酶的含量为16ng/μL
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20ng/μL，乙酸镁的含量为11mM
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15mM，甲酰胺的体积百分含量为0.1％
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0.5％，甜菜碱0
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5ng/μL，甘油0.5ng/μL
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5ng/μL。
[0007]优选的，所述核酸外切酶为Taq酶，所述缓冲液为冰醋酸。
[0008]优选的，所述恒温聚合酶为HSV
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2诱导的DNA聚合酶。
[0009]优选的，所述试剂的PH值为弱碱性，该试剂的PH值为7.1
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7.3。
[0010]优选的，所述荧光染料为SYBR Safa染料、SYBR Gold染料和SYBR Green中的至少一种。
[0011]优选的，所述探针为寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基因和一个淬灭荧光基因。
[0012]优选的，该试剂可用于普通核酸扩增以及多重扩增。
[0013]优选的，将试剂中的荧光基因和淬灭基因进行分离，利用荧光监测系统采集分离过程中产生荧光信号；
[0014]将所述荧光信号输入到预设处理域中进行逐级放大，直到所述处理域中的荧光信号大于预设规格为止，获取标准荧光信号；
[0015]当所述标准荧光信号的数量不为1时，基于生成时间顺序，为每一所述标准荧光信号进行命名；
[0016]同时，基于每一所述荧光信号转换为标准荧光信号过程中的放大等级，获取每一级对应的放大增益，建立荧光信号增益对应列表；
[0017]其中，第一级对应的增益为预设增益，剩余级对应的增益为上一级增益的一半；
[0018]在预设空间中绘制每一所述标准荧光信号，获取每一标准荧光信号对应的空间形态；
[0019]提取空间形态与标准形态一致的第一荧光信号，并分别获取每一所述第一标准荧光信号对应的荧光度；
[0020]建立时间轴，将所述第一标准荧光信号输入到所述时间轴上分别记录每一第一标准荧光信号在每一单位时间的衰减量，建立衰减列表；
[0021]在所述荧光信号增益对应列表中获取所述第一标准荧光信号对应的第一增益；
[0022]根据所述第一增益和所述衰减列表，获取每一第一荧光信号在预设时间节点对应的实际荧光度；
[0023]基于所述实际荧光度判断待检DNA样本的属性。
[0024]优选的，判断待检DNA样本的属性之后，包括：
[0025]获取每一DNA样本对应的属性，建立属性对应列表；
[0026]在所述属性对应列表中提取属性为阳性的第一DNA样本；
[0027]当所述第一DNA样本的数量为1时，确定所述第一DNA样本的属性为纯阳性；
[0028]反之，利用预设基因引子分别在每一所述第一DNA样本中获取目标基因点，记录每一所述第一DNA样本中目标基因点对应的数量；
[0029]提取目标基因点数量为1的第二DNA样本，确定所述第二DNA样本的属性为纯阳性；
[0030]获取剩余DNA样本利用对应的目标基因点的数量建立相应数量的基因存放列；
[0031]以所述目标基因点为起点，以预设螺旋顺序为路径分别获取所述剩余DNA样本中的基因链，并放置在对应的基因存放列中；
[0032]将同一所述剩余DNA样本对应的基因存放列视为基因存放组；
[0033]将所述基因存放组输入到预设对比域中，获取与剩余基因存放组相似度为0的第三DNA样本，确定所述第三DNA样本的属性为纯阳性；
[0034]获取不属于第三DNA样本的未归类样本，视为第四DNA样本，确定所述第四DNA样本的受到污染属性为假阳性，传输到指定终端进行显示。
[0035]优选的，获取所述第四DNA样本，生成重新检测指令；
[0036]基于所述重写检测指令获取所述第四DNA样本对应的源样本进行重新检测；
[0037]根据检测结果，为所述第四DNA样本匹配相应的属性。
[0038]与现有技术对比，本专利技术具备以下有益效果：
[0039]1、该基于多酶恒温核酸快速扩增试剂及应用，该试剂可以在常温下进行使用，且该试剂在使用时反应温度保持不变，不需要工作人员反复改变试剂的反应温度，简化了该试剂使用步骤，能够提高工作人员的工作效率，且该试剂降低了对扩增模板核酸纯度的要求，提高了该试剂的实用性。
[0040]2、该基于多酶恒温核酸快速扩增试剂及应用，通过探针和核酸外切酶的设置，核酸外切酶可以把探针本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂，包括核酸外切酶、缓冲液、氯化钾、氯化镁、恒温聚合酶、荧光染料、乙酸镁、探针、甘油、甜菜碱、甲酰胺、一对引物和逆转录酶，其特征在于：所述核酸外切酶的含量为16ng/μL
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20ng/μL，缓冲液的体积含量为6％到8％，氯化钾0
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200mM，氯化镁5mM
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100mM，恒温聚合酶的含量为16ng/μL
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20ng/μL，乙酸镁的含量为11mM
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15mM，甲酰胺的体积百分含量为0.1％
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0.5％，甜菜碱0
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5ng/μL，甘油0.5ng/μL
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5ng/μL。2.根据权利要求1所述的一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂，其特征在于：所述核酸外切酶为Taq酶，所述缓冲液为冰醋酸。3.根据权利要求1所述的一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂，其特征在于：所述恒温聚合酶为HSV
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2诱导的DNA聚合酶。4.根据权利要求1所述的一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂，其特征在于：所述试剂的PH值为弱碱性，该试剂的PH值为7.1
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7.3。5.根据权利要求1所述的一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂，其特征在于：所述荧光染料为SYBR Safa染料、SYBR Gold染料和SYBR Green中的至少一种。6.根据权利要求1所述的一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂，其特征在于：所述探针为寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基因和一个淬灭荧光基因。7.根据权利要求1
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6一种基于多酶恒温核酸快速扩增试剂的应用，其特征在于：该试剂可用于普通核酸扩增；该试剂可用于多重扩增。8.如权利要求7所述的一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂的应用，其特征在于，还包括：将试剂中的荧光基因和淬灭基因进行分离，利用荧光监测系统采集分离过程中产生荧光信号；将所述荧光信号输入到预设处理域中进行逐级放大，直到所述处理域中的荧光信号大于预设规格为止，获取标准荧光信号；当所述标准荧光信号的数量不为1时，基于...

【专利技术属性】
技术研发人员：滕丽琼，邱英华，薛梦蝶，
申请(专利权)人：南宁壮博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：