替莫唑胺中N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺的残留量测定制造技术

本发明专利技术涉及替莫唑胺中N

【技术实现步骤摘要】
替莫唑胺中N
‑
亚硝基二甲胺和N
‑
亚硝基二乙胺的残留量测定

：
[0001]本专利技术涉及一种化学药物中杂质成分的分析和检测方法，特别涉及一种抗肿瘤药物替莫唑胺中杂质成分N
‑
亚硝基二甲胺(NDMA)和N
‑
亚硝基二乙胺(NDEA)的含量测定方法。

技术介绍
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[0002]替莫唑胺(temozolomide，TMZ)是一个1999年上市的口服抗肿瘤药物，化学名为：3，4
‑
二氢
‑3‑
甲基
‑4‑
氧代咪唑并[5，1
‑
d]‑
1，2，3，5
‑
四嗪
‑8‑
酰胺。分子量为194.15，适应症为多形性胶质细胞瘤和退行性星型细胞瘤等神经胶质细胞瘤的二线治疗。
[0003]替莫唑胺在合成路线如下：
[0004][0005]反应式中，以4
‑
氨基
‑5‑
氨基甲酰基咪唑(AIC)为原料，经重氮化反应生成4
‑
重氮基
‑5‑
氨基甲酰基咪唑内鎓盐(DIC)，再与异氰酸甲酯环合生成替莫唑胺。
[0006]在上述合成路线中，终产物替莫唑胺中可能存在的杂质为AIC和DIC。另外合成过程还可能产生以下结构的杂质化合物：
[0007][0008]替莫唑胺酸(TZA)和3,4
‑
二氢
‑4‑
氧代咪唑并[5,1
‑<br/>d]‑
1,2,3,5
‑
四嗪(AHX)，以及N
‑
亚硝基二甲胺(NDMA)和N
‑
亚硝基二乙胺(NDEA)。
[0009]为保证替莫唑胺原料药产品质量，有必要对替莫唑胺原料药中含有的所有杂质成分进行检测，但现有技术没有对成分N
‑
亚硝基二甲胺(NDMA)和N
‑
亚硝基二乙胺(NDEA)在检测方法，本专利技术对此进行了开发研究。

技术实现思路
：
[0010]本专利技术提供了一种液相
‑
质谱联用仪(LC
‑
MS/MS)测定替莫唑胺中杂质N
‑
亚硝基二甲胺(NDMA)和N
‑
亚硝基二乙胺(NDEA)的残留量的方法，本方法在开发过程中比较了不同梯度对替莫唑胺中杂质NDMA和NDEA残留量测定的影响，后续将对该分析方法进行方法学验证，确定该测定方法在指定的测定系统下可以用于替莫唑胺中NDMA和NDEA的测定，保证基因毒性杂质检测数据的准确性，可以用于产品的质量研究。
[0011]本专利技术提供一种测定替莫唑胺中杂质N
‑
亚硝基二甲胺(NDMA)和N
‑
亚硝基二乙胺
(NDEA)的残留量的方法，所述方法，步骤如下：
[0012]步骤1，对照品溶液的配制：
[0013]取NDMA对照品约10
‑
15mg，精密称定，置于10ml量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀作为NDMA对照品储备液；
[0014]取NDEA对照品约15
‑
20mg，精密称定，置10ml量瓶中,用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀；再精密量取上述溶液2ml，置10ml量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀作为NDEA对照品储备液；
[0015]分别精密量取NDMA对照品储备液和NDEA对照品储备液各1ml，置100ml量瓶中，用水稀释，定容至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释，定容至刻度，摇匀；再精密量取上述溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释，定容至刻度，摇匀作为标准限度对照品溶液；
[0016]步骤2，供试品溶液的配置：
[0017]取替莫唑胺供试品约40
‑
60mg，精密称定，置10ml量瓶中，用水溶解，定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
[0018]步骤3，测定法：
[0019]分别取标准限度对照品溶液、供试品溶液注入高效液相
‑
质谱联用仪，记录色图谱，按外标法以峰面积计算供试品中N
‑
亚硝基二甲胺(NDMA)和N
‑
亚硝基二乙胺(NDEA)的残留量。
[0020]其中，N
‑
亚硝基二甲胺(NDMA)和N
‑
亚硝基二乙胺(NDEA)的残留量(Residual)的计算方法如下：
[0021][0022]Astd：6针标准限度对照品溶液中待测物峰面积均值；
[0023]As：供试品溶液中待测物峰面积；
[0024]Cstd：标准限度对照品溶液的浓度(ng/ml)；
[0025]Cs：供试品溶液的浓度(mg/ml)。
[0026]其中，色谱条件如下：
[0027]液相色谱系统：Thermo Vanquish UHPLC；色谱柱：Agilent ZORBAX PLUS C18(100mm*3.0mm*1.8μm)；流速为0.4
‑
0.6ml/min；进样量为35
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45μl；柱温为30
‑
40℃；流动相：有机相:甲醇；水相:超纯水；梯度洗脱程序见表1：
[0028]表1：梯度洗脱表
[0029]时间(min)水相(％)有机相(％)09553955840608.195511955
[0030]质谱系统：Thermo TSQ ALTIS质谱仪；离子源：APCI源；扫描方式：SRM正离子模式；采集时间：1.5～3min：NDMA，6.5～9min：NDEA；放电电流：4μA；鞘气：45Arb；辅助气：5Arb；尾
吹气：0Arb；离子源温度：275℃；接口温度：300℃；化合物母离子，碎片离子和化合物参数见表2：
[0031]表2：离子模式、母离子、子离子、碰撞电压等参数
[0032]化合物离子模式母离子(m/z)子离子(m/z)碰撞电压(V)备注NDMA正离子755810定性离子NDMA正离子754413定量离子NDEA正离子1034717定量离子NDEA正离子1032913定性离子NDEA正离子103759定性离子
[0033]优选的，本专利技术的制备方法，步骤如下：
[0034]步骤1，对照品溶液的配制：
[0035]取NDMA对照品约12.5mg，精密称定，置于10ml量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀作为NDMA对照品储备液；
[0036]取NDEA对照品约17.5mg，精密称定，置10ml量瓶中,用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀；再精密量取上述溶液2ml，置10ml量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀作为NDEA对照品储备液；
[0037]分别精密量取NDMA对照品储备液和NDEA对照品储备液各1ml，置100ml量瓶中，用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种替莫唑胺中N
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亚硝基二甲胺和N
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亚硝基二乙胺的残留量测定方法，其特征在于，所述方法步骤如下：步骤1，对照品溶液的配制：取NDMA对照品约10
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15mg，精密称定，置于10ml量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀作为NDMA对照品储备液；取NDEA对照品约15
‑
20mg，精密称定，置10ml量瓶中,用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀；再精密量取上述溶液2ml，置10ml量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀作为NDEA对照品储备液；分别精密量取NDMA对照品储备液和NDEA对照品储备液各1ml，置100ml量瓶中，用水稀释，定容至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释，定容至刻度，摇匀；再精密量取上述溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释，定容至刻度，摇匀作为标准限度对照品溶液；步骤2，供试品溶液的配置：取替莫唑胺供试品约40
‑
60mg，精密称定，置10ml量瓶中，用水溶解，定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；步骤3，测定法：分别取标准限度对照品溶液、供试品溶液注入高效液相
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质谱联用仪，记录色图谱，按外标法以峰面积计算供试品中N
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亚硝基二甲胺(NDMA)和N
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亚硝基二乙胺(NDEA)的残留量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，N
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亚硝基二甲胺(NDMA)和N
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亚硝基二乙胺(NDEA)的残留量的计算方法如下：Astd：6针标准限度对照品溶液中待测物峰面积均值；As：供试品溶液中待测物峰面积；Cstd：标准限度对照品溶液的浓度(ng/ml)；Cs：供试品溶液的浓度(mg/ml)。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，色谱条件如下：液相色谱系统：Thermo Vanquish UHP...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔凯丽，丁爱忠，蒋慧敏，成芳，
申请(专利权)人：江苏天士力帝益药业有限公司，
类型：发明
国别省市：