烟草花叶病毒在刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞中应用制造技术

本发明专利技术公开了烟草花叶病毒在刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞中应用。在该用途中，烟草花叶病毒可以促进巨噬细胞向M1型极化，使其具有杀伤作用，为肿瘤免疫治疗提供治疗方案。为肿瘤免疫治疗提供治疗方案。为肿瘤免疫治疗提供治疗方案。

【技术实现步骤摘要】
烟草花叶病毒在刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞中应用


[0001]本专利技术涉及免疫治疗
更具体地，涉及烟草花叶病毒在刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞中应用。

技术介绍

[0002]近年来，癌症的免疫疗法成为了治疗癌症的新型高效手段，例如使用靶向细胞程序性死亡配体/受体的抗体来治疗黑色素瘤的免疫检查点疗法，使用嵌合抗原受体T细胞治疗急性淋巴细胞白血病的过继细胞疗法等。然而，由于实体瘤的成纤维化作用，导致淋巴细胞和抗体药物难以有效浸润，故当前的免疫疗法对血液癌症的治疗效果较好，而对实体瘤的治疗效果较差。
[0003]巨噬细胞作为肿瘤微环境中最主要的浸润免疫细胞，是影响肿瘤进展的重要介质。巨噬细胞可以极化为不同的表型并发挥不同的功能。替代极化的M2型巨噬细胞通常会分泌可以刺激细胞外基质表达并加速肿瘤血管生成的细胞因子，导致肿瘤生长和转移。而促炎极化的M1型巨噬细胞表现出促炎因子分泌的增强，如肿瘤坏死因子α(TNF
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α)、白介素6(IL
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6)和白介素12(IL
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12)等，从而促进癌细胞坏死和凋亡。此外，M1型巨噬细胞表达高水平的组织相容性复合物及共刺激因子，如CD80和CD86等，可以进一步激活适应性免疫系统对肿瘤细胞进行杀伤。因此将肿瘤内的巨噬细胞从促进肿瘤发展的M2型巨噬细胞极化成为抑制癌症发展的M1型巨噬细胞成为了提高实体肿瘤免疫疗法的关键。
[0004]目前，许多基于哺乳动物病原体或病原微生物的M1型巨噬细胞极化方法已经被用于肿瘤治疗的实验或临床研究。例如，溶瘤病毒、腺病毒、李斯特菌等已被证明可以通过刺激巨噬细胞表面的模式识别受体来促进巨噬细胞M1型极化。溶瘤疱疹病毒已经被美国食品药品监督管理局批准用于治疗黑色素瘤。尽管一般实验或临床上使用的哺乳动物病原体经过设计或减毒处理，但在人体内依旧存在严重的复制感染风险，造成系统性的伤害。目前，尚未有关于烟草花叶病毒和巨噬细胞之间关系的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的一个目的在于提供一种烟草花叶病毒作为刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞的产品的用途。
[0006]本专利技术的另一个目的在于提供一种刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞的方法。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案。
[0008]第一方面，本专利技术提供了烟草花叶病毒在制备产品中应用，所述产品的功能是刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞。也就是说，该烟草花叶病毒可以促进巨噬细胞向M1型极化，使其具有杀伤作用，为肿瘤免疫治疗提供治疗方案。
[0009]进一步的，所述刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞表现为(1)、(2)和/或(3)：
[0010](1)增强M1型巨噬细胞相关基因的转录；
[0011](2)增强炎性因子的分泌；
[0012](3)提高共刺激因子CD86的表达量。
[0013]进一步的，所述炎性因子包括肿瘤坏死因子α(TNF
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α)、白介素6(IL
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6)和白介素12(IL
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12p70)等。所述M1型巨噬细胞相关基因包括Cd86、iNos、Tnfα和Il6等。
[0014]烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus，TMV)是一种仅可以感染烟草及其他茄科植物的植物病毒，对人体无感染风险。烟草花叶病毒具有一维棒状结构，由2130个相同的衣壳蛋白围绕一段手性螺旋的RNA链组装而成，长约300nm，外直径18nm，内部具有4nm宽的孔道。专利技术人发现：烟草花叶病毒内部的RNA链，或者衣壳蛋白的组装体(不含RNA的部分，又称为“病毒样纳米颗粒”)，二者均可通过与巨噬细胞表面的模式识别受体(PRRs)作用去刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞。即将其用于刺激免疫细胞，尤其是巨噬细胞，可以产生促炎极化行为，进而达到肿瘤免疫治疗的目的。在本专利技术中，所述烟草花叶病毒可以包括天然的烟草花叶病毒、自然突变的烟草花叶病毒、基因工程改性的烟草花叶病毒、化学修饰小分子或肽段的烟草花叶病毒、或仅包含衣壳蛋白不包含RNA链的烟草花叶病毒样纳米粒子。
[0015]进一步的，所述巨噬细胞包括巨噬细胞系RAW264.7、巨噬细胞系THP
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1、巨噬细胞系U937、骨髓诱导的巨噬细胞BMDM、外周血来源的单核巨噬细胞PBMC、肿瘤相关巨噬细胞(tumor
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associated macrophages，TAMs)或哺乳动物组织来源的原代巨噬细胞。
[0016]第二方面，本专利技术提供了一种刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞的方法，所述方法包括将烟草花叶病毒加入到巨噬细胞的培养体系中。
[0017]进一步的，所述烟草花叶病毒在培养体系中的浓度为5～100μg/mL。
[0018]进一步的，所述巨噬细胞的培养体系是含10％FBS，1％青霉素和链霉素的DMEM培养基。
[0019]进一步的，所述烟草花叶病毒刺激巨噬细胞的时间为0.5～48h。
[0020]进一步的，所述烟草花叶病毒包括天然的烟草花叶病毒、自然突变的烟草花叶病毒、基因工程改性的烟草花叶病毒、化学修饰小分子或肽段的烟草花叶病毒、或仅包含衣壳蛋白不包含RNA链的烟草花叶病毒样纳米粒子。
[0021]进一步的，所述巨噬细胞包括巨噬细胞系RAW264.7、巨噬细胞系THP
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1、巨噬细胞系U937、骨髓诱导的巨噬细胞BMDM、外周血来源的单核巨噬细胞PBMC、肿瘤相关巨噬细胞(tumor
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associated macrophages，TAMs)或哺乳动物组织来源的原代巨噬细胞。
[0022]本专利技术的有益效果如下：
[0023]使用烟草花叶病毒来刺激巨噬细胞，能有效极化巨噬细胞为M1表型的同时，又避免了哺乳动物病毒的感染风险。
附图说明
[0024]下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细的说明。
[0025]图1示出本专利技术实施例1中烟草花叶病毒的TEM电镜图。
[0026]图2示出本专利技术实施例2中巨噬细胞RAW 264.7经过烟草花叶病毒处理后的CD86蛋白阳性细胞百分数。
[0027]图3示出本专利技术实施例3中巨噬细胞RAW 264.7经过烟草花叶病毒处理后的CD86蛋白免疫荧光染色；白色：CD86；标尺：20μm。
[0028]图4示出本专利技术实施例4中巨噬细胞RAW 264.7经过烟草花叶病毒处理后，上清液
中的炎性细胞因子(TNF
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α、IL
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6、IL
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12p70)含量变化。
[0029]图5示出本专利技术实施例5中巨噬细胞RAW 264.7经过烟草花叶病毒处理后，其Cd86、iNos、Tnfα和Il6基因的转录水平变化。
[0030]图6示出本专利技术实施例6中巨噬细胞BMDM经过烟草花叶病毒处理后的CD86蛋白阳性细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.烟草花叶病毒在制备产品中应用，其特征在于，所述产品的功能是刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞表现为(1)、(2)和/或(3)：(1)增强M1型巨噬细胞相关基因的转录；(2)增强炎性因子的分泌；(3)提高共刺激因子CD86的表达量。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述炎性因子包括肿瘤坏死因子α、白介素6和白介素12；优选的，所述M1型巨噬细胞相关基因包括Cd86、iNos、Tnfα和Il6。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述烟草花叶病毒包括天然的烟草花叶病毒、自然突变的烟草花叶病毒、基因工程改性的烟草花叶病毒、化学修饰小分子或肽段的烟草花叶病毒、或仅包含衣壳蛋白不包含RNA链的烟草花叶病毒样纳米粒子。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述巨噬细胞包括巨噬细胞系RAW264.7、巨噬细胞系THP
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1、巨噬细胞系U937、骨髓诱导的巨噬细胞BMDM、外周血来源的单核巨噬细胞PBMC、肿瘤相关巨...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛忠伟，区锦钊，田野，
申请(专利权)人：中国科学院理化技术研究所，
类型：发明
国别省市：