脑胶质瘤巨噬细胞类配体的体系构建制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种脑胶质瘤巨噬细胞类配体的体系构建，包括以下步骤：收取肿瘤组织样本，并剪去肿瘤包膜和坏死出血组织；冲洗组织；接着将组织剪至0.5

【技术实现步骤摘要】
型干扰素、白细胞介素4、人表皮生长因子和人碱性成纤维细胞生长因子。
[0010]进一步，所述培养体系还包括胰岛素非必需氨基酸。
[0011]进一步，所述培养体系中，B
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27添加剂的浓度为0.5wt％
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3wt％，2
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羧乙基盐酸磷化氢的浓度为1
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5mmol/L，L
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丙氨酰
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L
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谷氨酰胺的浓度为2
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5mmol/L，非必需氨基酸的浓度为1wt％
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5wt％，胰岛素
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转铁蛋白
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硒
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丙酮酸钠添加剂的浓度为1wt％
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5wt％，人表皮生长因子的浓度为5
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20ng/mL，人碱性成纤维细胞生长因子的浓度为5
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20ng/mL，巨噬细胞集落刺激因子的浓度为5
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20ng/mL，Ⅱ型干扰素的浓度为10
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50ng/mL，白细胞介素4的浓度为10r/>‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.脑胶质瘤巨噬细胞类配体的体系构建，其特征在于，包括以下步骤：新鲜手术切除的脑胶质瘤组织置于组织保存液中，并在4℃下立即送往实验室，必须立即对组织进行处理，随即在培养皿中用显微剪剪去肿瘤包膜和坏死出血组织；随后用DPBS冲洗组织三次，接着将组织剪至0.5
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1mm3大小；随后转移至离心管中用培养基重悬组织后离心，吸弃上清；向离心所得沉淀中加入红细胞裂解液并混合均匀裂解，再次离心，吸弃上清液并用所述培养液重悬后离心，重复三次；吸取上清液，再用培养基重悬组织后接种到的Transwell小室上，再将小室于37℃、5％二氧化碳培养箱中培养；每隔2～3天更换一次新的培养基，将Transwell小室转移后加入培养体系，继续培养；所述培养体系包括以下组分：不含酚红神经基础的液体培养基、已除去维生素A的B
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27添加剂、2
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羧乙基盐酸磷化氢、L
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丙氨酰
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L
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谷氨酰胺、胰岛素
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转铁蛋白
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硒
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丙酮酸钠添加剂、巨噬细胞集落刺激因子、Ⅱ型干扰素、白细胞介素4、人表皮生长因子和人碱性成纤维细胞生长因子。2.根据权利要求1所述的体系构建，其特征在于，所述培养体系还包括胰岛素非必需氨基酸。3.根据权利要求2所述的体系构建，其特征在于，所述培养体系中，B
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27添加剂的浓度为0.5wt％
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3wt％，2
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羧乙基盐酸磷化氢的浓度为1
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5mmol/L，L
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丙氨酰
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L
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谷氨酰胺的浓度为2
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5mmol/L，非必需氨基酸的浓度为1wt％
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5wt％，胰岛素
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转铁蛋白
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硒
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丙酮酸钠添加剂的浓度为1wt％
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5wt％，人表皮生长因子的浓度为5
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20ng/mL，人碱性成纤维细胞生长因子的浓度为5
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20ng/mL，巨噬细胞集落刺激因子的浓度为5
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘庆，时雨，平轶芳，刘宇奇，颜泽萱，卞修武，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：