一种单核细胞来源的巨噬细胞的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种单核细胞来源的巨噬细胞的制备方法，首先在无菌条件下抽取肘静脉血，接着对血液进行肝素钠抗凝剂处理，同时对血液进行稀释；在无菌离心管中加入一定剂量的淋巴细胞分离液，然后用尖吸管将稀释血液轻轻铺在淋巴细胞分离液之上；淋巴细胞分离液与血液之比为1:2，注意两者之间要形成清晰界面；本发明专利技术操作简便，结果稳定，且不需要特殊的设备条件，为研究巨噬细胞的生物学功能奠定了基础；从而建立了一种简单、经济、稳定的诱导单核细胞分化为巨噬细胞的方法，为以后巨噬细胞研究提供很好的模型。GM

【技术实现步骤摘要】
一种单核细胞来源的巨噬细胞的制备方法


[0001]本专利技术涉及医疗
，具体是一种单核细胞来源的巨噬细胞的制备方法。

技术介绍

[0002]肺巨噬细胞是一种位于组织内的白细胞，源自单核细胞，它广泛分布于肺间质内，存在于细支气管的气道周围和肺泡间隔内角，有的巨噬细胞游走进入肺泡腔内，称为肺泡巨噬细胞，体积较单核细胞大，呈多形性，表面有伪足，细胞核大且不规则，胞楽内有数量不等的溶酶体及吞噬小体，从单核细胞经粒细胞巨噬细胞集落刺激因子等细胞因子调控剌激分化形成到其调亡可经历个月的生存时间，这种特性也为维持肺组织结构稳定和肺内无菌环境起到了重要作用，由于COPD患者的巨噬细胞，主要通过支气管肺泡灌洗法或者手术切除肺组织后获得，而患者本身肺功能较差，通过获取的数量少，同时患者手术切除肺组织通常是因为合并有其他肺部疾病如肺癌等，对患者的研究有影响，因而患者不易获得。有研究显示AM和MDM巨噬颗粒能力相似，提示MDM模型可以反映的吞噬反应，同时该研究也指出在患者细胞分化过程中，巨噬细胞巨噬能力出现缺陷，MDM是作为研究COPD其潜在机制的重要细胞模型等本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单核细胞来源的巨噬细胞的制备方法，其特征在于，其制备方法步骤如下：首先在无菌条件下抽取肘静脉血，接着对血液进行肝素钠抗凝剂处理，同时对血液进行稀释；在无菌离心管中加入一定剂量的淋巴细胞分离液，然后用尖吸管将稀释血液轻轻铺在淋巴细胞分离液之上，淋巴细胞分离液与血液之比为1:2，注意两者之间要形成清晰界面，进行两千转二十分钟离心；离心完成后离心血液按密度梯度形成四层：最上层为稀释的血浆层、中间为单个核细胞层，呈白膜状、粒细胞层、红细胞层；此时用尖吸管小心吸取白膜层至另一离心管中进行第一次PBS洗涤，接着进行一千转十分钟离心，得到分离的单个核细胞，同时进行第二次PBS洗涤；将细胞重悬于完全培养基中，通过台盼蓝染色检测细胞活性，如活细胞数达到95％以上则继续下一步；调整细胞密度，接...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁丽娟，米友军，
申请(专利权)人：甘肃中医药大学，
类型：发明
国别省市：