IL2激动剂制造技术

本发明专利技术涉及白介素

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】IL2激动剂


[0001]本专利技术涉及白介素
‑
2(IL2)的变体。特别地，本专利技术涉及包含人IL2的突变蛋白或人IL2的功能性变体的突变蛋白的多肽，其中人IL2或其功能性变体被替换，使得对βγIL2受体复合物(IL2Rβγ)的亲和力增强。在一个实施方案中，人IL2或其功能性变体还被替换使得对αβγIL2受体复合物(IL2Rαβγ)的亲和力降低。在一个实施方案中，该多肽活化效应T细胞优先于调节性T细胞。本专利技术还涉及编码本专利技术的多肽的多核苷酸，包含所述多核苷酸的宿主细胞，包含所述多肽、多核苷酸或宿主细胞的药物组合物，使用所述多肽、多核苷酸、宿主细胞或药物组合物进行治疗的治疗性或预防性方法，以及包含所述多肽、多核苷酸、宿主细胞或药物组合物的药物制剂。

技术介绍

[0002]免疫系统在癌症、自身免疫、变态反应以及病原体相关疾病中发挥重要作用。T细胞和自然杀伤(natural killer，NK)细胞是抗肿瘤免疫应答的重要介导物。CD8
+
T细胞和NK细胞可直接裂解肿瘤细胞。在另一方面，CD4
+
T细胞可介导不同的免疫亚群(包括CD8
+
T细胞和NK细胞)向肿瘤的流入。CD4
+
T细胞能够许可树突细胞(dendritic cell，DC)引发抗肿瘤CD8
+
T细胞应答，并且可通过IFNγ介导的MHC上调和生长抑制而直接作用于肿瘤细胞。可通过疫苗接种或通过T细胞的过继转移来诱导CD8
+
以及CD4
+
肿瘤特异性T细胞应答。
[0003]细胞因子在免疫中发挥重要作用。例如，白介素
‑
2(IL2)是强效免疫刺激物，活化免疫系统的多种细胞，包括T细胞、B细胞、单核细胞和NK细胞。已知IL2支持T细胞和NK细胞的分化、增殖、存活和效应子功能(Blattman，J.N.et al.Nat.Med.9，540
‑
7(2003))，并且已在晚期恶性黑素瘤的治疗中使用了数十年(Maas，R.A.，Dullens，H.F.&Den Otter，W.Cancer Immunol.Immunother.36，141
‑
8(1993))。因此，免疫治疗例如T细胞疫苗或者(初始或T细胞受体转基因或嵌合抗原受体转基因的)T细胞或NK细胞的过继转移可受益于细胞因子(如IL2)的同时施用。然而，重组IL2的一个缺点是其血浆半衰期短，这使得需要频繁注射大量细胞因子。这导致严重的副作用，例如血管渗漏综合征(vascular leak syndrome，VLS)(Rosenberg，S.A.et al.N.Eng1.J.Med.316，889
‑
97(1987))。IL2的第二个缺点是其刺激调节性T细胞(T
reg
细胞)的固有能力。T
reg
细胞与癌症患者的存活降低相关，因为它们可抑制抗肿瘤效应T细胞和NK细胞的功能(Nishikawa，H.&Sakaguchi.Curr.Opin.Immunol.27，1
‑
7(2014))。T
reg
细胞活化可加剧免疫抑制，从而潜在地损害预期的治疗响应。IL2通过IL2受体发出信号，该受体以高亲和力和中间亲和力(intermediate
‑
affinity)形式存在。高亲和力IL2受体(IL2Rαβγ)由CD25(IL2Rα)、CD122(IL2Rβ)和CD132(IL2Rγ)组成，并在T
reg
细胞以及活化的CD4
+
和CD8
+
T细胞上表达。中间亲和力受体(IL2Rβγ)缺乏CD25，并且普遍在初始T细胞和记忆T细胞以及NK细胞上。作为结果，IL2优先刺激表达CD25的T
reg
细胞(Todd，J.A.et al.PLoS Med.13，e1002139(2016))以及活化的CD4
+
和CD8
+
T细胞，并且需要高剂量的IL2来活化初始T细胞和记忆T细胞以及NK细胞。尝试以使IL2失去对表达CD25的细胞的偏好的这样的方式来改变IL2，从而相对提高初始T细胞和记忆T细胞以及NK细胞的刺激潜力，
显示出提高了其抗肿瘤潜力(Arenas
‑
Ramirez，N.et al.Sci.Transl.Med.8，1
‑
13(2016))。
[0004]需要新策略来提高IL2的有效性，特别是当在免疫治疗特别是在癌症免疫治疗的情况下使用时，例如当与疫苗(特别是癌症疫苗)和其他免疫治疗例如(初始或T细胞受体转基因或嵌合抗原受体转基因的)T细胞和NK细胞的过继转移和/或检查点阻断组合使用时。
[0005]本文描述的是人IL2的变体，其相对于表达高亲和力IL2受体IL2Rαβγ的细胞优先活化表达中间亲和力IL2受体IL2Rβγ的细胞。特别地，本文描述了增强与表达IL2Rβγ的细胞的结合(并由此增强所述细胞的活化)的IL2的适当修饰。这些修饰可以与阻止与表达IL2Rαβγ的细胞有效结合(并因此阻止所述细胞的活化)的修饰组合使用。能够优先于调节性T细胞上的高亲和力IL2受体而选择性活化某些T细胞(例如记忆T细胞、初始T细胞和效应T细胞以及NK细胞)上的中间亲和力IL2受体的IL2变体预期相对于野生型IL2具有改善的治疗指标和降低的毒性特征。具有改善的治疗指标的IL2变体将在需要免疫系统刺激的病症的治疗中，例如在癌症的治疗(作为直接治疗和/或辅助治疗)中具有显著扩大的使用范围。特别地，IL2变体RNA的施用是增强多种基于T细胞和NK细胞的(癌症)免疫治疗的治疗效力的有前景的方法。
[0006]本公开内容提供了新的IL2变体。具体地，描述了IL2的变体，其包含增强IL2Rβγ结合特别是CD122结合的突变(“mutβγ”)，并且任选地还包含影响IL2Rαβγ结合特别是CD25结合的突变(“mutα”)。特别地，本文描述的IL2变体降低T
reg
细胞的扩增并提高效应T细胞和NK细胞刺激，优选IL2Rβγ
+
效应T细胞和NK细胞刺激。与野生型IL2相比，本文所述的IL2变体hAlb
‑
hIL2_A4s8显示出活化T
reg
细胞的能力显著降低以及刺激效应免疫细胞的能力增强，优选IL2Rβγ
+
效应免疫细胞(如CD8
+
T细胞和NK细胞)已经处于较低浓度。在体内，用靶向小鼠的肝以获得全身可用性的编码野生型IL2或编码具有影响IL2Rα结合和IL2Rβ结合二者的突变的选定的IL2变体(hAlb
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hIL2_A4s8)的纳米粒mRNA处理强烈抑制了肿瘤生长，而hIL2_A4s8最有效。hAlb
‑
hIL2主要增加抗原特异性T细胞和T
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.多肽，其包含人白介素
‑
2(IL2)的突变蛋白或人IL2的功能性变体的突变蛋白，其中所述人IL2或其功能性变体在相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号的至少第80位(亮氨酸)、第81位(精氨酸)、第85位(亮氨酸)和第92位(异亮氨酸)被替换，其中所述替换增强对βγIL2受体复合物(IL2Rβγ)的亲和力，并且其中所述人IL2或其功能性变体在相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号的第86位(异亮氨酸)未被替换。2.权利要求1所述的多肽，其中相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号，第80位(亮氨酸)被苯丙氨酸替换，第81位(精氨酸)被谷氨酸替换，第85位(亮氨酸)被缬氨酸替换并且第92位(异亮氨酸)被苯丙氨酸替换。3.权利要求1或2所述的多肽，其中所述人IL2或其功能性变体还在相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号的第74位(谷氨酰胺)被替换。4.权利要求3所述的多肽，其中相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号，第74位(谷氨酰胺)被组氨酸替换。5.多肽，其包含人IL2的突变蛋白或人IL2的功能性变体的突变蛋白，其中所述人IL2或其功能性变体在相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号的至少第80位(亮氨酸)被苯丙氨酸替换，第81位(精氨酸)被谷氨酸替换，第85位(亮氨酸)被缬氨酸替换和第92位(异亮氨酸)被苯丙氨酸替换。6.权利要求5所述的多肽，其中所述人IL2或其功能性变体还在相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号的第74位(谷氨酰胺)被组氨酸替换。7.多肽，其包含人IL2的突变蛋白或人IL2的功能性变体的突变蛋白，其中所述人IL2或其功能性变体在相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号的至少第74位(谷氨酰胺)被组氨酸替换，第80位(亮氨酸)被苯丙氨酸替换，第81位(精氨酸)被谷氨酸替换，第85位(亮氨酸)被缬氨酸替换和第92位(异亮氨酸)被苯丙氨酸替换。8.权利要求5至7中任一项所述的多肽，其中所述替换增强对IL2Rβγ的亲和力。9.权利要求1至8中任一项所述的多肽，其中所述人IL2或其功能性变体还包含降低对αβγIL2受体复合物(IL2Rαβγ)的α亚基的亲和力的一个或更多个氨基酸替换。10.权利要求9所述的多肽，其中所述降低对IL2Rαβγ的α亚基的亲和力的一个或更多个氨基酸替换降低对IL2Rαβγ的亲和力的程度超过降低对IL2Rβγ的亲和力的程度。11.权利要求9或10所述的多肽，其中所述降低对IL2Rαβγ的α亚基的亲和力的一个或更多个氨基酸替换包含所述人IL2或其功能性变体在相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号的第43位(赖氨酸)和第61位(谷氨酸)的替换。12.权利要求11所述的多肽，其中第43位(赖氨酸)被谷氨酸替换并且第61位(谷氨酸)被赖氨酸替换。13.多肽，其包含人IL2的突变蛋白或人IL2的功能性变体的突变蛋白，其中所述人IL2或其功能性变体在相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号的至少第43位(赖氨酸)被谷氨酸替换，第61位(谷氨酸)被赖氨酸替换，第74位(谷氨酰胺)被组氨酸替换，第80位(亮氨酸)被苯丙氨酸替换，第81位(精氨酸)被谷氨酸替换，第85位(亮氨酸)被缬氨酸替换和第92位(异亮氨酸)被苯丙氨酸替换。14.权利要求5至13中任一项所述的多肽，其中所述人IL2或其功能性变体在相对于野生型人IL2并且根据野生型人IL2编号的第86位(异亮氨酸)未被替换。
15.权利要求1至14中任一项所述的多肽，其中所述人IL2具有根据SEQ ID NO：1的氨基酸序列。16.权利要求1至15中任一项所述的多肽，其中与野生型人IL2相比，所述人IL2的突变蛋白或其功能性变体的突变蛋白具有降低的刺激调节性T细胞的能力。17.权利要求1至16中任一项所述的多肽，其中与野生型人IL2相比，所述人IL2的突变蛋白或其功能性变体的突变蛋白具有提高的刺激效应T细胞的能力。18.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：乌尔，
申请(专利权)人：生物技术公司，
类型：发明
国别省市：