【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含颗粒和mRNA的药物组合物及其制备和储存的方法
[0001]本公开内容总体上涉及这样的领域：包含颗粒(特别是脂质纳米粒(lipid nanoparticle，LNP))和mRNA的药物组合物、用于制备和储存这样的药物组合物的方法以及药物组合物在治疗中的用途。
技术介绍
[0002]使用重组核酸(例如DNA或RNA)以将外来遗传信息递送到靶细胞中是公知的。使用RNA的优点包括瞬时表达和非转化特征。RNA不需要进入细胞核以进行表达，并且此外RNA不会整合至宿主基因组中，从而消除多种风险例如肿瘤发生。
[0003]重组核酸可以以裸形式施用于有此需要的对象；然而，通常使用药物组合物施用重组核酸。例如，RNA可通过所谓的纳米粒制剂进行递送，所述纳米粒制剂包含RNA和纳米粒形成载剂，例如，阳离子脂质(例如永久性带电荷的阳离子脂质)、阳离子脂质与一种或更多种另外的脂质的混合物、或阳离子聚合物。这样的纳米粒制剂的命运受多样的关键因素(例如，纳米粒的尺寸和尺寸分布；等)控制。例如，在2018年的FDA“Liposome Drug Products Guidance”中，这些因素被称为应进行分析和说明的特定属性。当前纳米粒制剂的临床应用的局限性可能在于缺乏均质、纯且良好表征的纳米粒制剂。
[0004]与其他RNA纳米粒产品相比，包含可电离脂质的LNP在靶向和效力方面可显示出优势。然而，获得如常规药物使用所需的足够保质期是具有挑战性的。例如，在适用于包含永久性带电荷阳离子脂质的类似基于脂质的纳米粒制剂的条件下，包含可电...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于制备药物组合物的方法，其包括以下步骤：(I)制备包含脂质纳米粒(LNP)的制剂，其中所述LNP包含阳离子可电离脂质和mRNA，并且其中以下中一者或更多者适用：(i)步骤(I)不包括添加NaCl和/或KCl；(ii)所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
；(iii)所述制剂基本上不含柠檬酸阴离子；(iv)所述制剂基本上不含无机磷酸阴离子；以及(II)将所述制剂冷冻至约
‑
10℃或低于
‑
10℃，从而获得冷冻形式的所述药物组合物。2.权利要求1所述的方法，其还包括步骤(III)将所述冷冻制剂冷冻干燥，从而获得冷冻干燥形式的所述药物组合物。3.权利要求1或2所述的方法，其中所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
。4.权利要求1或2所述的方法，其中所述制剂基本上不含柠檬酸阴离子。5.权利要求1或2所述的方法，其中所述制剂基本上不含无机磷酸阴离子。6.权利要求1或2所述的方法，其中所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
，并且所述制剂基本上不含柠檬酸阴离子。7.权利要求1或2所述的方法，其中所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
，并且所述制剂基本上不含无机磷酸阴离子。8.权利要求1或2所述的方法，其中所述制剂基本上不含柠檬酸阴离子且基本上不含无机磷酸阴离子。9.权利要求1或2所述的方法，其中所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
，并且所述制剂基本上不含柠檬酸阴离子且基本上不含无机磷酸阴离子。10.权利要求1至9中任一项所述的方法，其中步骤(I)不包括添加NaCl。11.权利要求1至9中任一项所述的方法，其中步骤(I)不包括添加KCl。12.权利要求1至9中任一项所述的方法，其中步骤(I)不包括添加NaCl和KCl。13.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含缓冲剂体系和/或冷冻保护剂。14.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含缓冲剂体系，并且所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
。15.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含冷冻保护剂，并且所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
。16.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
，并且所述制剂包含缓冲剂体系和冷冻保护剂。17.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含缓冲剂体系并且基本上不含柠檬酸阴离子。18.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含冷冻保护剂并且基本上不含柠檬酸阴离子。19.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂基本上不含柠檬酸阴离子，并且包含缓冲剂体系和冷冻保护剂。20.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含缓冲剂体系并且基本上不
含无机磷酸阴离子。21.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含冷冻保护剂并且基本上不含无机磷酸阴离子。22.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂基本上不含无机磷酸阴离子，并且包含缓冲剂体系和冷冻保护剂。23.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含缓冲剂体系，并且基本上不含柠檬酸阴离子且基本上不含无机磷酸阴离子。24.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含冷冻保护剂，并且基本上不含柠檬酸阴离子且基本上不含无机磷酸阴离子。25.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂基本上不含柠檬酸阴离子且基本上不含无机磷酸阴离子，并且包含缓冲剂体系和冷冻保护剂。26.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含缓冲剂体系，所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
，并且所述制剂基本上不含柠檬酸阴离子和/或基本上不含无机磷酸阴离子。27.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含冷冻保护剂，所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
，并且所述制剂基本上不含柠檬酸阴离子和/或基本上不含无机磷酸阴离子。28.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述制剂包含缓冲剂体系和冷冻保护剂，所述制剂的pH低于所述阳离子可电离脂质的pK
a
，并且所述制剂基本上不含柠檬酸阴离子和/或基本上不含无机磷酸阴离子。29.权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述制剂的pH为至多6.5，优选至多6.0。30.权利要求13至29中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂体系包含水和缓冲物质。31.权利要求13至30中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂体系包含HEPES、组氨酸、Tris和乙酸中任一者作为缓冲物质。32.权利要求13至31中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂体系包含HEPES、组氨酸和Tris中任一者作为缓冲物质。33.权利要求13至32中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂体系包含HEPES作为缓冲物质。34.权利要求13至33中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂在所述制剂中的浓度为至多50mM，优选至多40mM，更优选至多20mM。35.权利要求13至34中任一项所述的方法，其中所述冷冻保护剂包含一种或更多种碳水化合物。36.权利要求13至35中任一项所述的方法，其中所述冷冻保护剂包含蔗糖、海藻糖、葡萄糖、或其组合。37.权利要求13至36中任一项所述的方法，其中所述冷冻保护剂包含蔗糖和/或海藻糖。38.权利要求13至37中任一项所述的方法，其中所述冷冻保护剂在所述制剂中的浓度为至少1％w/v。39.权利要求13至38中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂体系包含HEPES作为缓冲物
质，并且所述冷冻保护剂包含蔗糖和/或海藻糖。40.权利要求1至39中任一项所述的方法，其中所述制剂还包含泊洛沙姆。41.权利要求33或39所述的方法，其中所述制剂不包含泊洛沙姆。42.权利要求1至41中任一项所述的方法，其中所述阳离子可电离脂质包含含有至少一个能够在生理条件下被质子化的氮原子的头基。43.权利要求1至42中任一项所述的方法，其中所述阳离子可电离脂质具有式(I)结构：或其可药用盐、互变异构体、前药或立体异构体，其中：L1或L2中一者是
‑
O(C＝O)
‑
、
‑
(C＝O)O
‑
、
‑
C(＝O)
‑
、
‑
O
‑
、
‑
S(O)
x
‑
、
‑
S
‑
S
‑
、
‑
C(＝O)S
‑
、SC(＝O)
‑
、
‑
NR
a
C(＝O)
‑
、
‑
C(＝O)NR
a
‑
、NR
a
C(＝O)NR
a
‑
、
‑
OC(＝O)NR
a
‑
或
‑
NR
a
C(＝O)O
‑
，并且L1或L2中另一者是
–
O(C＝O)
‑
、
‑
(C＝O)O
‑
、
‑
C(＝O)
‑
、
‑
O
‑
、
‑
S(O)
x
‑
、
‑
S
‑
S
‑
、
‑
C(＝O)S
‑
、SC(＝O)
‑
、
‑
NR
a
C(＝O)
‑
、
‑
C(＝O)NR
a
‑
、NR
a
C(＝O)NR
a
‑
、
‑
OC(＝O)NR
a
‑
或
‑
NR
a
C(＝O)O
‑
或者直接键；G1和G2各自独立地是未经取代的C1‑
C
12
亚烷基或C2‑
C
12
亚烯基；G3是C1‑
C
24
亚烷基、C2‑
C
24
亚烯基、C3‑
C8亚环烷基、C3‑
C8亚环烯基；R
a
是H或C1‑
C
12
烷基；R1和R2各自独立地是C6‑
C
24
烷基或C6‑
C
24
烯基；R3是H、OR5、CN、
‑
C(＝O)OR4、
‑
OC(＝O)R4或
–
NR5C(＝O)R4；R4是C1‑
C
12
烷基；R5是H或C1‑
C6烷基；并且x是0、1或2。44.权利要求1至43中任一项所述的方法，其中所述阳离子可电离脂质选自以下结构I
‑
1至I
‑
36：
45.权利要求1至42中任一项所述的方法，其中所述阳离子可电离脂质选自以下结构A至F：
46.权利要求1至42中任一项所述的方法，其中所述阳离子可电离脂质选自N,N
‑
二甲基
‑
2,3
‑
二油烯基氧基丙胺(DODMA)、1,2
‑
二油酰基
‑3‑
二甲基铵
‑
丙烷(DODAP)、三十七烷
‑
6,9,28,31
‑
四烯
‑
19
‑
基
‑4‑
(二甲基氨基)丁酸酯(DLin
‑
MC3
‑
DMA)和4
‑
((二((9Z,12Z)
‑
十八碳
‑
9,12
‑
二烯
‑1‑
基)氨基)氧基)
‑
N,N
‑
二甲基
‑4‑
氧代丁烷
‑1‑
胺(DPL
‑
14)。47.权利要求1至46中任一项所述的方法，其中所述LNP还包含一种或更多种另外的脂质，优选地选自聚合物缀合的脂质、中性脂质、类固醇、及其组合。48.权利要求1至47中任一项所述的方法，其中所述LNP包含所述阳离子可电离脂质、聚合物缀合的脂质、中性脂质和类固醇。49.权利要求47或48所述的方法，其中所述聚合物缀合的脂质包含聚乙二醇化脂质。50.权利要求49所述的方法，其中所述聚乙二醇化脂质具有以下结构：或其可药用盐、互变异构体或立体异构体，其中：R
12
和R
13
各自独立地是直链或支链、饱和或不饱和的包含10至30个碳原子的烷基链，其中所述烷基链任选地间插有一个或更多个酯键；并且w具有30至60的平均值。51.权利要求47或48所述的方法，其中所述聚合物缀合的脂质包含聚肌氨酸
‑
脂质缀合物或者聚肌氨酸与类脂质物质的缀合物。52.权利要求51所述的方法，其中所述聚肌氨酸
‑
脂质缀合物或者聚肌氨酸与类脂质物质的缀合物是选自以下的成员：聚肌氨酸
‑
二酰基甘油缀合物、聚肌氨酸
‑
二烷氧基丙基缀合物、聚肌氨酸
‑
磷脂缀合物、聚肌氨酸
‑
神经酰胺缀合物、及其混合物。53.权利要求47至52中任一项所述的方法，其中所述中性脂质是磷脂，优选地选自磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸或鞘磷脂。54.权利要求53所述的方法，其中所述磷脂选自二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)、双十五烷酰基磷脂酰胆碱、二月桂酰基磷脂酰胆碱、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、二花生酰基磷脂酰胆碱(DAPC)、二山萮炔
酰基磷脂酰胆碱(DBPC)、双二十三烷酰基磷脂酰胆碱(DTPC)、双二十四酰基磷脂酰胆碱(DLPC)、棕榈酰基油酰基
‑
磷脂酰胆碱(POPC)、1,2
‑
二
‑
O
‑
十八碳烯基
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸胆碱(18:0二醚PC)、1
‑
油酰基
‑2‑
胆甾醇基半琥珀酰基
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸胆碱(OChemsPC)、1
‑
十六烷基
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸胆碱(C16LysoPC)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二硬脂酰基
‑
磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰基
‑
磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰基
‑
磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二月桂酰基
‑
磷脂酰乙醇胺(DLPE)和二植烷酰基
‑
磷脂酰乙醇胺(DPyPE)。55.权利要求47至54中任一项所述的方法，其中所述类固醇包含固醇，例如胆固醇。56.权利要求1至55中任一项所述的方法，其中所述制剂还包含螯合剂。57.权利要求56所述的方法，其中所述螯合剂在所述制剂中的浓度为至多20mM，优选至多10mM，更优选至多5mM。58.权利要求56或57所述的方法，其中所述螯合剂是EDTA。59.权利要求1至55中任一项所述的方法，其中所述制剂不包含螯合剂。60.权利要求1至59中任一项所述的方法，其中所述阳离子可电离脂质与mRNA之比为2:1至12:1。61.权利要求1至60中任一项所述的方法，其中所述mRNA包封在所述LNP之内或者与所述LNP缔合。62.权利要求1至61中任一项所述的方法，其中所述mRNA包含替代尿苷的经修饰核苷。63.权利要求62所述的方法，其中所述经修饰核苷选自假尿苷(ψ)、N1
‑
甲基
‑
假尿苷(m1ψ)和5
‑
甲基
‑
尿苷(m5U)。64.权利要求1至63中任一项所述的方法，其中所述mRNA包含5
’
帽。65.权利要求1至64中任一项所述的方法，其中所述mRNA包含5
’
UTR。66.权利要求1至65中任一项所述的方法，其中所述mRNA包含3
’
UTR。67.权利要求1至66中任一项所述的方法，其中所述mRNA包含poly
‑
A序列。68.权利要求67所述的方法，其中所述poly
‑
A序列包含至少100个核苷酸。69.权利要求1至68中任一项所述的方法，其中所述mRNA编码一种或更多种多肽。70.权利要求69所述的方法，其中所述一种或更多种多肽包含用于在对象中诱导针对抗原的免疫应答的表位。71.权利要求69或70所述的方法，其中所述mRNA编码包含SARS
‑
CoV
‑
2S蛋白、其免疫原性变体、或者所述SARS
‑
CoV
‑
2S蛋白或所述其免疫原性变体的免疫原性片段的氨基酸序列。72.权利要求1至71中任一项所述的方法，其中将所述制剂冷冻至温度为约
‑
30℃至约
‑
10℃，例如约
‑
25℃至约
‑
15℃或约
‑
25℃至约
‑
20℃，或冷冻至温度为约
‑
20℃。73.权利要求2至72中任一项所述的方法，其中将所述冷冻制剂冷冻干燥，直至所述药物组合物基本上不含包含在所述冷冻制剂中的水。74.权利要求73所述的方法，其中将所述冷冻制剂冷冻干燥，直至所述药物组合物包含少于1.0重量％的水。75.权利要求1至74中任一项所述的方法，其中步骤(I)包括(a)制备包含水和缓冲体系的mRNA溶液；(b)制备包含所述阳离子可电离脂质和如果存在的话一种或更多种另外的脂质的乙醇溶液；以及(c)将(a)中制备的mRNA溶液与(b)中制备的乙醇溶液混合，从而制备所述包含LNP的制剂。
76.权利要求1至74中任一项所述的方法，其中步骤(I)包括(a
’
)制备所述阳离子可电离脂质和如果存在的话一种或更多种另外的脂质在水相中的脂质体或胶体制备物；和(b
’
)制备包含水和缓冲体系的mRNA溶液；以及(c
’
)将(a
’
)中制备的脂质体或胶体制备物与(b
’
)中制备的mRNA溶液混合。77.权利要求75或76所述的方法，其中步骤(I)在步骤(c)或(c
’
)之后还包括一个或更多个选自稀释和过滤例如切向流过滤的步骤。78.储存药物组合物的方法，其包括根据权利要求1至77中任一项所述的方法制备药物组合物，并将所述药物组合物储存在约
‑
30℃至约
‑
10℃，例如约
‑
25℃至约
‑
15℃或约
‑
25℃至约
‑
20℃的温度下，或储存在约
‑
20℃的温度下。79.权利要求78所述的方法，其中将所述药物组合物储存至少3个月，优选至少12个月，更优选至少24个月，更优选至少36个月。80.冷冻的药物组合物，其可通过权利要求1至79中任一项所述的方法制备。81.权利要求80所述的药物组合物，其中在将所述冷冻的药物组合物解冻之后，LNP的尺寸(Z
平均值
)为约50nm至约500nm。82.权利要求80或81所述的药物组合物，其中在将所述冷冻的药物组合物解冻之后，LNP的尺寸(Z
平均值
)和/或尺寸分布和/或多分散性指数(PDI)等于冷冻之前LNP的尺寸(Z
平均值
)和/或尺寸分布和/或PDI。83.冷冻干燥的药物组合物，其可通过权利要求2至79中任一项所述的方法制备。84.权利要求83所述的药物组合物，其中在将所述冷冻干燥的药物组合物重构之后LNP的尺寸...
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