IL-2组合物及其使用方法技术

提供了包含至少两条单独的多肽链的可活化前蛋白，第一条包含与掩蔽部分融合的IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】IL
‑
2组合物及其使用方法
[0001]对相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e)要求于2019年5月24日提交的美国临时申请号62/852,768的优先权，通过引用将其全部内容并入。
[0003]关于序列表的声明
[0004]与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并在此通过引用并入说明书。包含序列表的文本文件的名称是PRVA_002_01WO_ST25.txt。文本文件约464KB，创建于2020年5月18日，正通过EFS
‑
Web以电子方式提交。
[0005]背景


[0006]本公开涉及包含至少两条独立多肽链的可活化前蛋白，第一条包含与掩蔽部分融合的IL
‑
2，第二条包含与掩蔽部分融合的IL
‑
2结合蛋白，以及相关的药物组合物及其使用方法。
[0007]相关技术说明
[0008]白细胞介素2(IL
‑
2)免疫疗法已被证明可用于治疗癌症(例如恶性黑色素瘤和肾细胞癌)以及慢性感染(例如HIV感染)。
[0009]然而，大多数IL
‑
2疗法都存在某些问题。例如，当前形式的IL
‑
2疗法循环半衰期很短，并且主要扩增免疫抑制性调节T细胞或T
reg
(参见，例如，Arenas
‑
Ramirez等人，Trends in Immunology.36:763<br/>‑
777,2015)。此外，IL
‑
2疗法的作用主要是全身性的，而不是局限于靶组织，导致许多严重的副作用，如呼吸问题、恶心、低血压、食欲不振、意识模糊、严重感染、癫痫发作、过敏反应、心脏问题、肾功能衰竭和血管渗漏综合征。尽管如此，IL
‑
2疗法可以是有效的，并且在本领域中存在克服这些和其他缺点的未满足的需要。
[0010]本公开的实施方案通过提供包含IL
‑
2的可活化前蛋白来解决这些问题以及更多问题，该前蛋白可以在疾病组织例如癌组织或肿瘤内被活化。
[0011]专利技术概述
[0012]本公开的实施方案包括可活化的前蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中第一多肽包含第一掩蔽部分和IL
‑
2蛋白，其中第一掩蔽部分包含第一结合部分和与IL
‑
2蛋白融合的第一接头，其中第二多肽包含第二掩蔽部分和IL
‑
2结合蛋白，其中第二掩蔽部分包含第二结合部分和与IL
‑
2结合蛋白融合的第二接头，其中第一和第二掩蔽部分通过它们各自的第一和第二结合部分结合在一起，任选地作为二聚体，从而掩蔽IL
‑
2蛋白的结合位点，所述结合位点与存在于免疫细胞表面的IL
‑
2Rβ/γc链结合(在体外或体内)，并且其中第一接头或第二接头中的至少一个是可切割接头。
[0013]在一些实施方案中，IL
‑
2蛋白包含、由或基本上由与选自表S1或与SEQ ID NO:1(全长野生型人IL
‑
2)的氨基酸21
‑
153的序列具有至少80、85、90、95、98或100％同一性的氨基酸序列组成，任选包含C145X(X是任何氨基酸)或C145S取代(如SEQ ID NO:1所定义)。在一些实施方案中，IL
‑
2蛋白包含、由或基本上由与SEQ ID NO:2(具有C125S取代的成熟人
IL
‑
2)具有至少80、85、90、95、98或100％同一性的氨基酸序列组成，任选地其中IL
‑
2蛋白保留S125残基(如SEQ ID NO:2所定义)。在一些实施方案中，IL
‑
2蛋白包含一个或多个取代，其选自K35C、R38C、T41C、F42C、E61C和V69C(如SEQ ID NO:2所定义)。在一些实施方案中，IL
‑
2蛋白与IL
‑
2结合蛋白形成二硫键，任选地通过权利要求4中的一种或多种半胱氨酸和IL
‑
2结合蛋白中的一种或多种半胱氨酸。在一些实施方案中，IL
‑
2蛋白在位置69、74或128处包含一个或多个氨基酸取代(如SEQ ID NO:2所定义)，任选地其中所述一个或多个氨基酸取代选自V69A、Q74P和I128T(如SEQ ID NO:2所定义)。在一些实施方案中，IL
‑
2蛋白在R38、F42、Y45、E62、E68和/或L72位置处包含一个或多个氨基酸取代(如SEQIDNO:2所定义)，任选地，其中一个或多个氨基酸取代选自R38A和R38K；F42A、F42G、F42S、F42T、F42Q、F42E、F42N、F42D、F42R、F42K和F42I；Y45A、Y45G、Y45S、Y45T、Y45Q、Y45E、Y45N、Y45D、Y45R和Y45K；E62A和E62L；E68A和E68V；和L72A、L72G、L72S、L72T、L72Q、L72E、L72N、L72D、L72R和L72K，包括其组合，可选地选自F42A、Y45A和L72G的组合；R38K、F42Q、Y45N、E62L和E68V；R38K、F42Q、Y45E和E68V；R38A、F42I、Y45N、E62L和E68V；R38K、F42K、Y45R、E62L和E68V；R38K、F42I、Y45E和E68V；和R38A、F42A、Y45A和E62A。在一些实施方案中，IL
‑
2蛋白包含、由或基本上由与SEQIDNO:3(成熟人IL
‑
2“D10”变体)具有至少80、85、90、95、98或100％同一性的氨基酸序列组成，任选地其中IL
‑
2蛋白保留如SEQ ID NO:3所定义的Q74H、L80F、R81D、L85V、I86V和/或I92F取代中的任何一个或多个。
[0014]在一些实施方案中，IL
‑
2结合蛋白是IL
‑
2Rα蛋白，或特异性结合IL
‑
2蛋白的抗体或其抗原结合片段，任选地双特异性抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，IL
‑
2Rα蛋白包含、由或基本上由与选自表S2的序列或与SEQ ID NO:4(全长野生型人IL
‑
2Rα)的氨基酸22
‑
187的序列具有至少80、85、90、95、98或100％同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，IL
‑
2Rα蛋白包含一个或多个选自如SEQ ID NO:6(人IL
‑
2RαSushi 1到Sushi 2结构域)所定义的D4C、D6C、N27C、K38C、S39C、L42C、Y43C、I118C、和H120C的半胱氨酸取代。在一些实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.可活化的前蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽包含第一掩蔽部分和IL
‑
2蛋白，其中所述第一掩蔽部分包含第一结合部分和与所述IL
‑
2蛋白融合的第一接头，其中所述第二多肽包含第二掩蔽部分和IL
‑
2结合蛋白，其中所述第二掩蔽部分包含第二结合部分和与所述IL
‑
2结合蛋白融合的第二接头，其中所述第一和第二掩蔽部分通过其各自的第一和第二结合部分结合在一起，任选地作为二聚体，从而掩蔽所述IL
‑
2蛋白的结合位点，所述结合位点在体外或体内与存在于免疫细胞表面的IL
‑
2Rβ/γc链结合。并且其中所述第一接头或第二接头中的至少一个是可切割接头。2.根据权利要求1所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2蛋白包含、由或基本上由以下氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与选自S1表的序列或与SEQ ID NO:1(全长野生型人IL
‑
2)的氨基酸21
‑
153具有至少80、85、90、95、98或100％同一性，任选地所述氨基酸序列包含如SEQ ID NO:1所定义的C145X(X是任意氨基酸)或C145S取代。3.根据权利要求1或2所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2蛋白包含、由或基本上由与SEQ ID NO：2(具有C125S取代的成熟人IL
‑
2)，任选地其中IL
‑
2蛋白保留如SEQ ID NO:2所定义的S125残基具有至少80、85、90、95、98或100％同一性的氨基酸序列组成。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2蛋白包含一个或多个选自如SEQ ID NO:2所定义的K35C、R38C、T41C、F42C、E61C和V69C的取代。5.根据权利要求4所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2蛋白与所述IL
‑
2结合蛋白形成二硫键，任选地通过权利要求4中的一种或多种半胱氨酸和IL
‑
2结合蛋白中的一种或多种半胱氨酸。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2蛋白如SEQ ID NO:2所定义在位置69、74或128处包含一个或多个氨基酸取代，任选地其中所述一个或多个氨基酸取代选自如SEQ ID NO:2所定义的V69A、Q74P和I128T。7.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2蛋白在如SEQ ID NO:2所定义的R38、F42、Y45、E62、E68和/或L72位置处包含一个或多个氨基酸取代，任选地，其中所述一个或多个氨基酸取代选自R38A和R38K；F42A、F42G、F42S、F42T、F42Q、F42E、F42N、F42D、F42R、F42K和F42I；Y45A、Y45G、Y45S、Y45T、Y45Q、Y45E、Y45N、Y45D、Y45R和Y45K；E62A和E62L；E68A和E68V；和L72A、L72G、L72S、L72T、L72Q、L72E、L72N、L72D、L72R和L72K，包括其组合，任选地选自F42A、Y45A和L72G；R38K、F42Q、Y45N、E62L和E68V；R38K、F42Q、Y45E和E68V；R38A、F42I、Y45N、E62L和E68V；R38K、F42K、Y45R、E62L和E68V；R38K、F42I、Y45E和E68V；和R38A、F42A、Y45A和E62A的组合。8.根据权利要求1
‑
7中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2蛋白包含、由或基本上由与SEQ ID NO：3(成熟人IL
‑
2“D10”变体)，任选地其中所述IL
‑
2蛋白保留如SEQ ID：3所定义的Q74H、L80F、R81D、L85V、I86V和/或I92F取代中的任意一个或多个具有至少80、85、90、95、98或100％同一性的氨基酸序列组成。9.根据权利要求1
‑
8中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述IL
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2结合蛋白是IL
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2Rα蛋白，或者特异性结合所述IL
‑
2蛋白的抗体或其抗原结合片段，任选地双特异性抗体或其抗原结合片段。
10.根据权利要求9所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2Rα蛋白包含、由或基本上由与选自表S2的序列或与SEQ ID NO:4(全长野生型人IL
‑
2Rα)的氨基酸22
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187具有至少80、85、90、95、98或100％同一性的氨基酸序列组成。11.根据权利要求9或10所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2Rα蛋白包含一个或多个选自如SEQ ID NO:6(人IL
‑
2RαSushi 1到Sushi2结构域)所定义的D4C、D6C、N27C、K38C、S39C、L42C、Y43C、I118C和H120C的半胱氨酸取代。12.根据权利要求1
‑
11中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2Rα蛋白与所述IL
‑
2蛋白形成二硫键，任选地通过权利要求11中的一种或多种半胱氨酸和IL
‑
2蛋白中的一种或多种半胱氨酸，任选地权利要求4中的一种或多种半胱氨酸，任选地一种或多种选自IL2
‑
K35C和IL2Rα
‑
D4C、IL2
‑
R38C和IL2Rα
‑
D6C、IL2
‑
R38C和IL2Rα
‑
H120C、IL2
‑
T41C
‑
IL2Rα
‑
I118C、IL2
‑
F42C和IL2Rα
‑
N27C、IL2
‑
E61C和IL2Rα
‑
K38C、IL2
‑
E61C和IL2Rα
‑
S39C，以及IL2
‑
V69C和IL2Rα
‑
L42C的半胱氨酸对，其中IL
‑
2蛋白和IL
‑
2Rα蛋白之间的二硫键结合掩蔽了优先结合T
reg
上表达的IL
‑
2Rαβγ链的IL
‑
2蛋白的结合位点。13.根据权利要求1
‑
12中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述IL
‑
2Rα蛋白在如SEQ ID NO:6所定义的位置49和/或68处包含丙氨酸取代。14.根据权利要求9所述的可活化前蛋白，其中所述与IL
‑
2蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段选自完整抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、单特异性Fab2、双特异性Fab2、FV、单链Fv(scFv)、scFV
‑
Fc、纳米抗体、双抗体、骆驼抗体和微型抗体中的一种或多种，任选地其中所述抗体是NARA1或其抗原结合片段。15.根据权利要求1
‑
14中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一掩蔽部分和/或所述第二掩蔽部分不结合IL
‑
2蛋白或IL
‑
2结合蛋白。16.根据权利要求1
‑
14中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一掩蔽部分和/或第二掩蔽部分结合IL
‑
2蛋白。17.根据权利要求1
‑
16中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一和第二结合部分通过一个或至少一个非共价键结合在一起，任选地二聚化。18.根据权利要求1
‑
17中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一和第二结合部分通过一个或至少一个共价键结合在一起，任选地二聚化。19.根据权利要求18所述的可活化前蛋白，其中所述至少一个共价键包含至少一个二硫键。20.根据权利要求1
‑
19中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一结合部分和所述第二结合部分选自表M1。21.根据权利要求1
‑
20中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一结合部分和/或所述第二结合部分包含免疫球蛋白的抗原结合结构域，包括其抗原结合片段和变体。22.根据权利要求1
‑
21中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一结合部分和/或所述第二结合部分包含免疫球蛋白的CH1、CH2、CH3、CH1CH3、CH2CH3、CH1CH2CH3和/或CL结构域，包括其片段和变体。23.根据权利要求21或22所述的可活化前蛋白，其中所述第一结合部分和/或所述第二结合部分在N
‑
至C
‑
末端方向包含：(1)免疫球蛋白的抗原结合结构域，包括其抗原结合片段
和变体；(2)免疫球蛋白的CH1、CH2、CH3、CH1CH3、CH2CH3、CH1CH2CH3和/或CL结构域，包括其片段和变体。24.根据权利要求21
‑
23中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述抗原结合结构域包含免疫球蛋白的VH或VL结构域，包括其抗原结合片段和变体。25.根据权利要求1
‑
24中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一结合部分和/或所述第二结合部分不结合抗原。26.根据权利要求1
‑
25中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一结合部分包含免疫球蛋白的VL和CL结构域，并且其中所述第二结合部分包含免疫球蛋白的VH和CH1结构域。27.根据权利要求1
‑
25中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一结合部分包含免疫球蛋白的VH和CH1结构域，并且其中所述第二结合部分包含免疫球蛋白的VL和CL结构域。28.根据权利要求21
‑
27中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述免疫球蛋白来自选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE和IgM的免疫球蛋白类别。29.根据权利要求1
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28中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一结合部分和所述第二结合部分每个都包含亮氨酸拉链肽。30.根据权利要求1
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29中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一和第二掩蔽部分通过其各自的第一和第二结合部分结合在一起作为异源二聚体。31.根据权利要求1
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29中任一项所述的可活化前蛋白，其中所述第一和第二掩蔽部分通过其各自的第一和第二结合部分结合在一起作为同源二聚体，任选地，其中所述第一和第二结合部分中的每个都包含CH2结构域和CH3结构域。32.根据权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：李子娟，
申请(专利权)人：普罗维瓦疗法香港有限公司，
类型：发明
国别省市：