修饰的IL-2蛋白、PEG偶联物及其用途制造技术

本申请提供了一种修饰的白细胞介素2(IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】修饰的IL
‑
2蛋白、PEG偶联物及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年6月20日提交的美国临时申请第62/864,372号中的优先权，该申请的内容通过引用整体并入本文。
[0003]以ASCII文本文件形式提交序列表
[0004]以下提交的ASCII文本文件的内容通过引用整体并入此处：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：720692000440SeqList.txt，记录日期：2020年6月16日，大小：33KB)。
[0005]本申请的领域
[0006]本申请涉及一种修饰的白细胞介素2(IL
‑
2)蛋白，其包含工程化的谷氨酰胺(Q)残基。本申请还涉及一种修饰的IL
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2蛋白
‑
聚乙二醇(PEG)偶联物，该偶联物包含修饰的IL
‑
2蛋白，所述修饰的IL
‑
2蛋白含有工程化的Q残基和PEG部分，其中PEG部分通过工程化的Q残基与修饰的IL
‑
2蛋白偶联。还提供了药物组合物、试剂盒、制造方法和治疗方法。
[0007]本申请的背景
[0008]健康个体的免疫系统可以区分健康细胞和非健康细胞，如癌细胞，后者通常会被免疫反应清除。当免疫系统受到损害时，它就不能区分和消除癌细胞。通过给癌症患者施用免疫调节蛋白，患者的免疫系统可以至少部分恢复正常，以消除癌症。白细胞介素
‑
2(IL
‑
2) 是一类用于肿瘤免疫治疗的免疫调节蛋白。
[0009]野生型IL
‑
2是一种约15
‑
16kDa的细胞因子信号分子。它调节免疫系统的白血细胞(白细胞，通常是淋巴细胞)的活性。IL
‑
2参与机体对微生物感染的自然反应和对“自我”与“非自我”的区分。它通过与淋巴细胞上表达的IL
‑
2受体(IL
‑
2R)结合介导其作用。IL
‑
2R是由 IL
‑
2Rα(p55，CD25)、IL
‑
2Rβ(p75，CD122)和γ
c
(通用γ链，IL
‑
2Rγ，p65，CD132)三条链组成的异三聚体复合物。IL
‑
2对于抗原选择的T细胞克隆在免疫应答期间的快速扩增、分化和存活，以及B细胞、自然杀伤(NK)细胞和调节性T细胞(T
reg
)的正常功能是至关重要的。
[0010]IL
‑
2被提示可以治疗急性髓系白血病(AML)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、乳腺癌和膀胱癌。阿地白介素(Aldesleukin)是一种市售的非糖基化人重组IL
‑
2(hrIL
‑
2)，已被FDA批准用于治疗转移性肾细胞癌(mRCC)和转移性黑色素瘤(mM)。然而，据报道即使在推荐剂量下，阿地白介素仍有严重的副作用，包括毛细血管渗漏综合征(CLS)和中性粒细胞功能受损。此外，由于需要多剂量频繁的静脉输注，因此在临床环境中施用阿地白介素。为了未来更普遍的应用，有待解决IL
‑
2的毒性和短半衰期等问题。
[0011]本文提及的所有出版物、专利、专利申请和公开的专利申请的公开内容，通过引用整体并入本文。
[0012]本申请的概要
[0013]本申请提供了修饰的IL
‑
2蛋白，其包含工程化的Q残基。本申请还提供了修饰的IL
‑
2 蛋白
‑
PEG偶联物，其包含修饰的IL
‑
2蛋白和PEG部分，所述修饰的IL
‑
2蛋白含有工程化的Q残基，其中PEG部分通过工程化的Q残基与修饰的IL
‑
2蛋白偶联。本文所述的任何修饰的IL
‑
2蛋白可用于制备修饰的IL
‑
2蛋白
‑
PEG偶联物，例如本文所述的任一修饰的IL
‑
2蛋
白
‑
PEG偶联物。还提供了药物组合物、试剂盒、制造方法和治疗方法。
[0014]在一个方面，提供了包含工程化的Q残基的修饰IL
‑
2蛋白。在一些实施方案中，所述工程化的Q残基位于IL
‑
2受体α(IL
‑
2Rα)亚基结合域内。在一些实施方案中，所述工程化的Q残基在IL
‑
2Rα亚基结合结构域外的约1至约3个(例如1、2或3)氨基酸残基之间。
[0015]在根据如上所述任一种修饰的IL
‑
2蛋白的实施方案中，所述修饰的IL
‑
2蛋白包括一个工程化的Q残基。
[0016]在根据如上所述任一种修饰的IL
‑
2蛋白的实施方案中，所述修饰的IL
‑
2蛋白包括两个或更多个工程化的Q残基。
[0017]在根据如上所述任一种修饰的IL
‑
2蛋白的实施方案中，所述工程化的Q残基是(例如，来自)相对于亲本IL
‑
2蛋白(例如，野生型IL
‑
2或IL
‑
2阿地白介素)的单个氨基酸突变。在一些实施方案中，亲本IL
‑
2包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，单个氨基酸突变选自下组：F43Q、R37Q、F41Q、K42Q、Y44Q、T36Q、M38Q，或其组合。在一些实施方案中，所述修饰的IL
‑
2蛋白包含SEQ ID NOs：2和4
‑
8中任一所示的氨基酸序列。
[0018]在根据如上所述任一种修饰的IL
‑
2蛋白的实施方案中，所述工程化的Q残基是适合谷氨酰胺转胺酶(TGase)反应的外源补丁(patch)序列的一部分。在一些实施方案中，所述修饰的IL
‑
2蛋白包括外源补丁序列，并且工程化的Q残基是补丁序列内的氨基酸残基之一。在一些实施方案中，所述外源补丁序列取代亲本IL
‑
2蛋白(例如，野生型IL
‑
2蛋白，或IL
‑
2阿地白介素)的一部分。在一些实施方案中，所述亲本IL
‑
2蛋白包含SEQ ID NO： 1所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述外源补丁序列选自下组：LEEQAA(SEQ IDNO：9)、IFKQTY(SEQ ID NO：10)、PKEQKY(SEQ ID NO：11)、VIQGV(SEQ ID NO： 12)、REEQFN(SEQ ID NO：13)、GLLQGA(SEQ ID NO：14)、或其组合。在一些实施方案中，所述修饰的IL
‑
2蛋白包含SEQ ID NOs：3和15
‑
19中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种修饰的白细胞介素
‑
2(IL
‑
2)蛋白，包含一个工程谷氨酰胺(Q)残基。2.根据权利要求1所述的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述工程化的Q残基位于IL
‑
2受体α(IL
‑
2Rα)亚基结合域内。3.根据权利要求1所述的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述工程化的Q残基在IL
‑
2Rα亚基结合结构域外约1至约3个氨基酸残基之间。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述修饰IL
‑
2蛋白包含一个工程化的Q残基。5.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述修饰IL
‑
2蛋白包含两个或更多个工程化的Q残基。6.根据权利要求1
‑
5中任一项的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述工程化的Q残基是相对于亲本IL
‑
2蛋白的单个氨基酸突变或是所述单个氨基酸突变的结果。7.根据权利要求6的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述亲本IL
‑
2蛋白包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。8.根据权利要求7的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述单个氨基酸突变选自下组：F43Q、R37Q、F41Q、K42Q、Y44Q、T36Q、M38Q或其组合。9.根据权利要求8所述的修饰的IL
‑
2蛋白，其中所述修饰的IL
‑
2蛋白包含SEQ ID NO：2和4
‑
8中任一所示的氨基酸序列。10.根据权利要求1
‑
5中任一项的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述工程化的Q残基是适合谷氨酰胺转胺酶(TGase)反应的外源补丁序列的一部分。11.根据权利要求10所述的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述外源补丁序列取代亲本IL
‑
2蛋白的一部分。12.根据权利要求11所述的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述亲本IL
‑
2蛋白包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。13.根据权利要求10
‑
12中任一项所述的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述外源补丁序列选自下组：LEEQAA(SEQ ID NO：9)，IFKQTY(SEQ ID NO：10)、PKEQKY(SEQ ID NO：11)、VIQGV(SEQ ID NO：12)、REEQFN(SEQ ID NO：13)、GLLQGA(SEQ ID NO：14)或其组合。14.根据权利要求13所述的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述修饰IL
‑
2蛋白包含SEQ ID NO：3和15
‑
19中任一所示的氨基酸序列。15.根据权利要求1
‑
14中任一项的修饰IL
‑
2蛋白，其中修饰的IL
‑
2蛋白与IL
‑
2Rα亚基的结合K
D
为亲本IL
‑
2蛋白与IL
‑
2Rα亚基之间的结合K
D
的约2～800倍。16.根据权利要求1
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15中任一项的修饰IL
‑
2蛋白，其中修饰后的IL
‑
2蛋白与IL
‑
2Rβ亚基的结合K
D
为亲本IL
‑
2蛋白与IL
‑
2Rβ亚基之间的结合K
D
的约1
‑
30倍。17.根据权利要求1
‑
16中任一项所述的修饰的IL
‑
2蛋白，其中所述修饰的IL
‑
2蛋白能够激活选自下组的免疫细胞：杀伤T细胞(T
c
，细胞毒性T淋巴细胞，或CTL)、辅助性T细胞(T
h
)、调节性T细胞(Treg)、γδT细胞、自然杀伤T(NKT)细胞和自然杀伤(NK)细胞。18.根据权利要求17所述的修饰IL
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2蛋白，其中修饰的IL
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2蛋白具有比亲本IL
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2蛋白降低约2至约50倍的激活Treg细胞的能力。19.根据权利要求17或18所述的修饰IL
‑
2蛋白，其中所述修饰IL
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2蛋白与亲本IL
‑
2蛋白在增加CTL与Treg的比率或NK细胞与Treg的比率的能力方面相似，或为约1至约20倍。
20.一种修饰的IL
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2蛋白
‑
聚乙二醇(PEG)偶联物，包括权利要求1
‑
19中任一项的修饰的IL
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2蛋白和PEG部分，其中PEG部分通过工程化的Q残基与修饰的IL
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2蛋白偶联。21.权利要求20的修饰的...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫哲，冯立新，李银贵，
申请(专利权)人：石药集团巨石生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：