抗瓜类果斑病菌抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及植物病原体检测技术领域，具体而言，涉及抗瓜类果斑病菌抗体及其应用。本发明专利技术所提供的抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体的特异性好，效价高，与瓜类果斑病菌不同分离物均起反应，具有较好的广谱性。应用于瓜类果斑病菌血清学诊断试剂中，特异性好，避免了交叉反应。本发明专利技术研制的瓜类果斑病菌的单克隆抗体可用于研制瓜类果斑病菌的免疫学诊断试剂，如酶联诊断试剂，胶体金免疫试纸条，抗体芯片，生物传感器等。传感器等。

【技术实现步骤摘要】
抗瓜类果斑病菌抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及植物病原体检测
，具体而言，涉及抗瓜类果斑病菌抗体及其应用。

技术介绍

[0002]瓜类果斑病是西瓜、甜瓜上的一种毁灭性病害，由噬酸菌属燕麦种西瓜亚种(Acidovorax citrulli)引起，是我国进境植物检疫性有害生物和农业检疫性有害生物。该病主要通过种子带菌传播。苗期和成株均可发病。瓜苗染病沿中脉出现不规则褐色病变，有的扩展到叶缘，从叶背面看呈水渍状，种子带菌的瓜苗在发病后1～3周即死亡。西瓜果实染病，初在果实上部表面现数个几毫米大小灰绿色至暗绿色水渍状斑点，后迅速扩展成大型不规则的水浸状斑，变褐或龟裂，致果实腐烂，分泌出一种粘质琥珀色物质，进一步发展，细菌透过瓜皮进入果内。该病多始于成瓜向阳面，与地面接触处未见发病，瓜蔓不萎蔫，病瓜周围病叶上现褐色小斑，病斑通常在叶脉边缘，有时被一个黄色组织带包围，病斑周围呈水渍状是该病别于其他细菌病害的重要特征。对于该细菌病害，较为可行的控制措施是实行检疫控制其扩展，而这有赖于准确、快速、灵敏的检测技术的应用。
[0003]本专利技术的申请人此前曾提供了一种抗瓜类果斑病菌抗体(申请号 CN201410111292.6，公开日2014年06月25日)，虽然该抗体能够检测瓜类果斑病菌，但特异性和亲和力仍不够理想。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一目的在于提供一种抗体或其抗原结合片段，其能够特异性识别瓜类果斑病菌，包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1～3所示的重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3以及依次如SEQ ID NO:4～6所示的轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供一种分离的核酸，其编码如上所述的抗体或其抗原结合片段。
[0007]本专利技术的第三目的在于提供一种载体，其包含如上所述的核酸。
[0008]本专利技术的第四目的在于提供一种宿主细胞，其包含如上所述的核酸或如上所述的载体。
[0009]本专利技术的第五目的在于提供一种含有如上所述抗体或其抗原结合片段的试剂盒。
[0010]本专利技术的第六目的在于提供如上所述抗体或其抗原结合片段，或如上所述的试剂盒在检测瓜类果斑病菌中的应用。
[0011]本专利技术的有益效果为：相较现有技术所提供的抗瓜类果斑病菌抗体，本专利技术所提供的抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体的特异性好，效价高，与瓜类果斑病菌不同分离物均起反应，具有较好的广谱性。应用于瓜类果斑病菌血清学诊断试剂中，特异性好，避免了交叉反应。本专利技术研制的瓜类果斑病菌的单克隆抗体可用于研制瓜类果斑病菌的免疫学诊断试
剂，如酶联诊断试剂，胶体金免疫试纸条，抗体芯片，生物传感器等，具有更广阔的应用前景。
具体实施方式
[0012]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0013]除非另有说明，用于披露本专利技术的所有术语(包括技术和科学术语)的意义与本专利技术所属领域普通技术人员所通常理解的相同。通过进一步的指导，随后的定义用于更好地理解本专利技术的教导。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。
[0014]本专利技术中所使用的术语“含有”、“包含”和“包括”是同义词，其是包容性或开放式的，不排除额外的、未被引述的成员、元素或方法步骤。
[0015]本专利技术中用端点表示的数值范围包括该范围内所包含的所有数值及分数，以及所引述的端点。
[0016]本专利技术中涉及浓度数值，其含义包括在一定范围内的波动。比如，可以在相应的精度范围内波动。比如2％，可以允许
±
0.1％范围内波动。对于数值较大或无需过于精细控制的数值，还允许其含义包括更大波动。比如 100mM，可以允许
±
1％、
±
2％、
±
5％等范围内的波动。涉及分子量，允许其含义包括
±
10％的波动。
[0017]本专利技术中，涉及“多个”、“多种”等描述，如无特别限定，指在数量上指大于等于2。
[0018]本专利技术中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
[0019]本专利技术中，“优选”、“更好”、“更佳”、“为宜”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本专利技术保护范围的限制。本专利技术中，“可选地”、“可选的”、“可选”，指可有可无，也即指选自“有”或“无”两种并列方案中的任一种。如果一个技术方案中出现多处“可选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“可选”各自独立。
[0020]在本专利技术提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。除非和本申请的专利技术目的和/或技术方案相冲突，否则，本专利技术涉及的引用文献以全部内容、全部目的被引用。本专利技术中涉及引用文献时，相关技术特征、术语、名词、短语等在引用文献中的定义也一并被引用。本专利技术中涉及引用文献时，被引用的相关技术特征的举例、优选方式也可作为参考纳入本申请中，但以能够实施本专利技术为限。应当理解，当引用内容与本申请中的描述相冲突时，以本申请为准或者适应性地根据本申请的描述进行修正。
[0021]本专利技术涉及一种抗体或其抗原结合片段，其能够特异性识别瓜类果斑病菌，包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1～3所示的重链互补决定区 HCDR1、HCDR2和HCDR3以及依次如SEQ ID NO:4～6所示的轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3。
[0022]术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体对预先确定的抗原上的表位的结合。通常，抗体以大约小于10
‑7M，例如大约小于10
‑8M、10
‑
9
M、10
‑
10
M、10
‑
11
M、10
‑
12
M或更强的亲和力(K
D
) 结合。
[0023]在一些实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8 所示。
[0024]在一些实施方式中，本专利技术的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区(HCVR)的氨基酸序列如SEQ ID NO:7 所示，轻链可变区(LCVR)的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。在一些实施方式中，所述HCVR的氨基酸序列与SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗体或其抗原结合片段，其特征在于，能够特异性识别瓜类果斑病菌，包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1～3所示的重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3以及依次如SEQ ID NO:4～6所示的轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体具有恒定区，重链恒定区序列选自IgG、IgA、IgM、IgE、IgD任意一种的恒定区序列；轻链恒定区为κ或λ链。4.根据权利要求1或2...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗金燕，杜伟，陈磊，余慧，陆占军，杨明进，李宗泽，李斌，
申请(专利权)人：宁夏回族自治区农业技术推广总站，
类型：发明
国别省市：