一种牛源抑制金黄色葡萄球菌生长的单链抗体及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种牛源抑制金黄色葡萄球菌生长的单链抗体及其制备方法和用途，采用RT

【技术实现步骤摘要】
一种牛源抑制金黄色葡萄球菌生长的单链抗体及其制备方法和用途


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，尤其涉及牛源抑制金黄色葡萄球菌生长的单链抗体及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]单链抗体是一种基因工程抗体，通过DNA重组技术将抗体轻链可变区VL和重链可变区VH通过一段连接短肽linker首尾连接而成，是保留完整抗原结合部位的最小功能片段。单链抗体的表达形式主要有融合表达，胞内表达和分泌表达三种形式。和完整抗体相比，单链抗体具有以下优点：1)分子量小，大小仅为完整抗体的六分之一，免疫原性较低；2)组织穿透力强，容易进入实体瘤周围的微循环；3)血液清除快，肾脏蓄积很少；4)无Fc段，非特异结合低；5)易于通过基因工程大量生产；6)易于基因操作，更易构建重组免疫毒素。
[0003]奶牛乳腺炎是影响奶牛业发展，给乳品生产造成巨大损失的一种常见多发病。引起奶牛乳腺炎的致病菌很多，其中金黄色葡萄球菌是最重要的致病菌之一，流行率达到了50％，导致严重的经济损失。因为金黄色葡萄球菌具有传染性，且治疗用的抗生素易产生耐药性，所以很难彻底治愈。目本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种牛源抑制金黄色葡萄球菌生长的单链抗体，其特征在于，包括轻链可变区VL、重链可变区VH、连接肽Linker，并按照VL
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VH的顺序连接构成牛源单链抗体片段VL
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VH，所述体轻链可变区VL氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述重链可变区VH氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。2.根据权利要求1所述的牛源抑制金黄色葡萄球菌生长的单链抗体，其特征在于，所述单链抗体片段VL
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VH氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。3.一种抑制奶牛乳腺炎的药物，其特征在于，该药物包括权利要求1或2所述的单链抗体。4.一种奶牛乳腺炎诊断试剂盒，其特征在于包括权利要求1或2所述的单链抗体，或者编码所述单链抗体的基因片段以及与之交联的探针。5.一种牛源抑制金黄色葡萄球菌生长的单链抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、扩增轻链可变区VL基因和重链可变区VH基因采用RT
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PCR从患奶牛乳腺炎的外周血单个核细胞RNA中扩增出抗体编码基因的轻链可变区VL基因和重链可变区VH基因；步骤2、合成scFv基因利用SOE
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PCR法将中间连接肽linker、VH基因、VL基因相连，构建牛源单链抗体基因，即scFv基因；步骤3、构建重组表达质粒将scFv基因和噬菌体载体酶切后，构建重组表达质粒；步骤4、建立初级单链抗体文库将重组表达质粒转化入宿主细胞，培养并用辅助噬菌体扩增建立初级单链抗体文库；步骤5、用原核表达的金黄色葡萄球菌GapC蛋白作为包被抗原，富集淘选；步骤6、采用phage ELISA筛选,用原核表达的金黄色葡萄球菌GapC蛋白作为包被抗原，筛选阳性克隆；步骤7、构建单链抗体原核表达质粒将筛选得到的阳性克隆酶切，回收单链抗体GapC
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scFv
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1编码基因，与同步酶切的原核表达载体pET32a(+)混匀后，14～16℃连接过夜，连接产物转化DH5α感受态细胞后，挑取单克隆，菌落PCR和质粒双酶切验证正确的克隆进行测序；步骤8、构建单链抗体原核表达质粒的菌株测序正确的克隆进行质粒的提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建国，程曼玲，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：