一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于激素检测技术领域，涉及一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒及方法。针对现有技术中雌激素在生物样本和人体内以痕量水平存在，在干血片样本中含量极低，雌激素化合物极性较小，在质谱中ESI和APCI源中离子化效率不高，直接检测灵敏度不高的技术问题，本申请提供一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，包括衍生化试剂、第一萃取剂和第二萃取剂，萃取和衍生化前处理结合超高效液相色谱串联质谱能快速简便准确的检测出干血片中痕量的雌激素。本申请还提供了一种测定干血片中多种雌激素的方法，用第一萃取剂将雌激素从干血片中萃取，再衍生化，用第二萃取剂将衍生后的雌激素再次萃取，增大了通量，提高了分析效率。提高了分析效率。

【技术实现步骤摘要】
一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于激素检测
，具体地，涉及一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]雌激素是女性体内重要的性激素，具有重要而广泛的生理作用，研究表明雌激素不仅有维持女性生殖功能和第二性征的生理作用，而且对人体的新陈代谢的调节、神经系统的发育、骨骼的生长等有一定程度的影响，雌激素其主要包括雌酮(E1)、雌二醇(E2)及雌三醇(E3)3种。雌酮在人体中的水平是评估性早熟，老人骨骼风险评估的重要指标，雌二醇是妇女体内生物活性最强的雌激素，雌三醇是雌二醇和雌酮的代谢产物，前体来源于胎儿肾上腺和肝，由胎盘合成分泌，是妊娠期的主要雌激素，雌三醇水平的高低与胎盘和胎儿有效的代谢功能有密切关系，直接影响胎儿的生长发育。测定孕妇体中雌激素，是判断胎盘功能、预测胎儿状态及监护胎儿安全较可信的方法。是高危妊娠监测，过期妊娠胎盘功能评估，预测早产的可靠指标。雌激素水平异常还是骨质疏松症、神经性厌食症、心血管疾病、乳腺癌，唐氏综合征，女性性发育不全，多囊卵巢综合征，男性乳房发育等的主要原因之一。因此，对人体中的雌激素定性定量分析，能够更早发现疾病的异常变化，有助于研究疾病产生机制、临床诊断以及开发医疗药物。
[0003]临床生物样品中内源性激素的测定方法主要采用放射免疫分析法和化学发光免疫法等免疫分析法，但由于免疫分析法中同一抗体可能与多种抗原发生反应，容易受相关内源性类固醇、脂质和基质效应的干扰，其对于雌激素测定的特异性和可靠性仍然存在疑问导致其灵敏度与准确度都不足以及放射性危害等缺陷，再加之各测定方法学间的可比性差等原因。超高效液相色谱串联质谱法分析法的特异性高，干扰低的特点可以来提高检测结果的灵敏度，可同时检测三种激素的浓度，通量大，检测方法的准确度和精密度更高。如中国专利申请公布号CN109470791A，专利技术名称为“一种高效液相色谱
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串联质谱检测血清雌激素的方法及试剂盒”，公开的试剂盒包括洗脱液、稀释液、萃取剂、质控品和色谱柱，萃取剂为乙酸乙酯/正己烷；检测血清中雌激素的方法，包括如下步骤：样本预处理；色谱分离；质谱检测；利用系列浓度的雌激素标准品制备标准曲线的步骤，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算血清样本中雌激素的含量。但是，干血片样本中雌激素含量极低，化合物极性都较小，在质谱中ESI和APCI源中离子化效率不高，直接检测的灵敏度不高，因此需要在前处理过程中进行衍生化来提高分析的响应。

技术实现思路

[0004]1、要解决的问题
[0005]针对现有技术中雌激素在生物样本和人体内以痕量水平存在，在干血片样本中含量极低，雌激素化合物极性较小，在质谱中ESI和APCI源中离子化效率不高，直接检测灵敏
度不高的技术问题，本申请提供一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，萃取和衍生化前处理结合超高效液相色谱串联质谱能快速简便准确的检测出干血片中痕量的雌激素。本申请还提供了一种测定干血片中多种雌激素的方法，用第一萃取剂将雌激素从干血片中萃取，再衍生化，用第二萃取剂将衍生后的雌激素再次萃取，增大了通量，提高了分析效率。
[0006]2、技术方案
[0007]为达到上述目的，提供的技术方案为：
[0008]本专利技术的一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，所述试剂盒包括以下组分：校准品、质控品、内标准品、衍生化试剂、缓冲液、第一萃取剂、第二萃取剂。
[0009]进一步的，所述衍生化试剂为N
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三甲基硅烷基咪唑、五氟苯甲酰氯、五氟苄基羟胺或丹磺酰氯。
[0010]进一步的，第一萃取剂为甲醇、乙腈中的一种或两种；第二萃取剂为甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二氯甲烷中的一种或几种。
[0011]优选的，第一萃取剂为体积比为54:50的甲醇和乙腈的混合溶液。
[0012]进一步的，所述缓冲液为碳酸钠、磷酸钠或硼酸钠缓冲液。
[0013]进一步的，所述校准品为雌酮、雌二醇、雌三醇；所述内标准品为雌酮
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d4、雌二醇
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d3、雌三醇
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d3。
[0014]进一步的，还包括甲醇、乙腈、甲酸、牛血清白蛋白。
[0015]一种测定干血片中多种雌激素的方法，使用所述的试剂盒，包括如下步骤：
[0016]用第一萃取剂将雌激素从干血片中萃取出的步骤，得第一萃取样品；
[0017]用衍生化试剂将所述第一萃取样品衍生化处理的步骤，得衍生化样品；
[0018]用第二萃取剂将雌激素从衍生化样品中萃取出的步骤，得第二萃取样品；
[0019]将第二萃取样品离心后取上清液，用高效液相色谱串联质谱检测的步骤。
[0020]进一步的，
[0021]所述高效液相色谱条件为：进样器温度：4℃；柱温：40℃；运行时间：3.5min；
[0022][0023][0024]所述流动相A：0.1％甲酸水溶液；
[0025]所述流动相B：含0.1％甲酸的甲醇溶液。
[0026]进一步的，所述质谱条件为：
[0027]毛细管电压：3.0kV；脱溶剂温度：650℃；脱溶剂气：800L/hr；锥孔气：150L/hr；扫描模式：多反应离子检测，正离子模式。
[0028]3、有益效果
[0029]采用本专利技术提供的技术方案，与已有的公知技术相比，具有如下有益效果：
[0030](1)本专利技术的一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，采用超高效液相色谱串联质谱法同时检测干血片样本中雌酮、雌二醇和雌三醇三种雌激素含量，所需采血量少，样品容易采集，相对于血清等液体样本更易于保存和运输。可以用来检测病人的雌酮、雌二醇、
雌三醇三种雌激素的浓度来筛查雌激素过多以及雌激素缺乏等引起的相关疾病，有更准确的临床参考和诊断价值。
[0031](2)本专利技术的一种测定干血片中多种雌激素的方法，使用的超高效夜相色谱和串联质谱系统UPLC I
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Class/TQ
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S同时对雌酮、雌二醇和雌三醇三种雌激素进行分析检测，增大了通量，提高了分析效率，分析的灵敏度和结果的准确度、精密度都得到极大的提高。运用有机试剂萃取和衍生化前处理方法结合超高效液相色谱串联质谱法能快速简便准确的检测出干血片中痕量的雌酮、雌二醇、雌三醇三种雌激素的浓度，将雌酮、雌二醇和雌三醇测定的定量下限降至5pg/mL，比现有文献的报道的低了4到20倍。
4、具体实施方式
[0032]为进一步了解本专利技术的内容，结合实施例对本专利技术作详细描述。
[0033]实施例1
[0034]本实施例的一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，所述试剂盒包括以下组份：
[0035]表1 测定干血片中多种雌激素的试剂盒的组份
[0036][0037]本实施例中，其中，组份1的校准品包括雌酮、雌二醇、雌三醇；内标准品包括雌酮...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括以下组分：校准品、质控品、内标准品、衍生化试剂、缓冲液、第一萃取剂、第二萃取剂。2.根据权利要求1所述的一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，其特征在于：所述衍生化试剂为N
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三甲基硅烷基咪唑、五氟苯甲酰氯、五氟苄基羟胺或丹磺酰氯。3.根据权利要求1所述的一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，其特征在于：第一萃取剂为甲醇、乙腈中的一种或两种；第二萃取剂为甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二氯甲烷中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为碳酸钠、磷酸钠或硼酸钠缓冲液。5.根据权利要求1所述的一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，其特征在于：所述校准品为雌酮、雌二醇、雌三醇；所述内标准品为雌酮
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d4、雌二醇
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d3、雌三醇
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d3。6.根据权利要求1
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5任一项所述的一种测...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭军，刘超，
申请(专利权)人：合肥歆智医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：