不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法技术

本发明专利技术涉及一种防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，属于图谱构建及分析技术领域。本发明专利技术的防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，采用高效液相色谱分别测定N批供试品溶液的色谱图，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，标定共有峰，并指认N批不同产地防风的指纹图谱中升麻素苷、升麻素、5

【技术实现步骤摘要】
不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法


[0001]本专利技术属于图谱构建及分析
，具体涉及一种防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法。

技术介绍

[0002]防风为伞形科植物防风(Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.)未抽薹的干燥根。防风始载于《神农本草经》，主要化学成分为色原酮类、香豆素类、多糖类、挥发油类等。现代药理研究表明防风具有解热、抗炎、镇静、镇痛以及抗肿瘤等药理活性作用，临床上常用于治疗风湿痹症、风疹瘙痒、惊吓抽搐以及破伤风等疾病。
[0003]防风的产地有黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、宁夏、甘肃、陕西、山西、山东等省区。生长地势有草原、丘陵、多砾石山坡等。中药的产地不同，生长地势不同，药效会大不相同。如明代李时珍《本草纲目》曰：性从地变，质与物迁，是言地区不同，植物接受的光热、水分不同，服食后的功效也不同。但是现有技术中，对于产地不同，生长地势不同的防风，没有对应的分析方法。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供一种防风HPLC指纹图谱的指纹图谱的构建及分析方法。
[0005]本专利技术解决上述技术问题采取的技术方案如下：
[0006]不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，包括以下步骤：
[0007]步骤一、取升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷适量，精密称定，加甲醇，制备成每1mL含升麻素苷2mg、升麻素2.3mg、5
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甲基维斯阿米醇苷3mg和亥茅酚苷0.7mg的混合对照品溶液；
[0008]步骤二、采用高效液相色谱分别测定混合对照品溶液的色谱图，记录升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的保留时间；
[0009]步骤三、取N批不同地区的防风，分别加入甲醇超声30min，取上清液过滤，再加入甲醇，震荡之后再超声30min，再过滤，合并两次得到的滤液，蒸发，甲醇定容，最后用0.22μm微孔滤膜滤过，得到N批供试品溶液；
[0010]以1g防风计，第一次加入甲醇的量为20ml，第二次加入甲醇的量为20ml，蒸发至5ml，定容至10mL；
[0011]步骤四、采用高效液相色谱分别测定N批供试品溶液的色谱图，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，标定共有峰，建立N批不同产地防风的指纹图谱；
[0012]步骤五、基于步骤二中获得的升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的保留时间，指认N批不同产地防风的指纹图谱中升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰；
[0013]步骤六、计算N批不同产地防风的指纹图谱中升麻素苷的色谱峰的峰面积，并以升麻素苷的色谱峰为参照峰，计算升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的峰
面积；
[0014]步骤七、将N批不同地区的防风的升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的峰面积带入Past软件进行聚类分析，并带入SIMCA14.1软件进行主成分分析。
[0015]进一步的，高效液相色谱的色谱条件均为4.6mm
×
250mm，5μm；流动相甲醇(A)水(B)；梯度洗脱：0～20min，30％A；20～25min，45％A；25～50min，60％A；50～55min，90％A；55～60min，100％A；体积流量1mL/min；检测波长254nm；柱温30℃；进样量为10μL。
[0016]进一步的，防风过2号筛。
[0017]进一步的，N＝33。
[0018]进一步的，还包括含量分析：
[0019]采用高效液相色谱分别测定不同浓度的混合对照品溶液的色谱图，分别以升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的峰面积(y)为纵坐标，分别以升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的浓度(x)为横坐标，绘制四条标准曲线；
[0020]将N批不同地区的防风的升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的峰面积带入标准曲线，依据已知的升麻素苷、5
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甲基维斯阿米醇苷、升麻素和亥茅酚苷的浓度，算出升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量。
[0021]更进一步的，不同浓度的混合对照品溶液为：
[0022]含有升麻素苷2mg/ml，5
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甲基维斯阿米醇苷3mg/ml，升麻素2.3mg/ml，亥茅酚苷0.7mg/ml的混合对照品溶液；
[0023]含有升麻素苷4mg/ml，5
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甲基维斯阿米醇苷6mg/ml，升麻素4.6mg/ml，亥茅酚苷1.4mg/ml的混合对照品溶液；
[0024]含有升麻素苷8mg/ml，5
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甲基维斯阿米醇苷12mg/ml，升麻素9.2mg/ml，亥茅酚苷2.8mg/ml的混合对照品溶液；
[0025]含有升麻素苷16mg/ml，5
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甲基维斯阿米醇苷24mg/ml，升麻素18.4mg/ml，亥茅酚苷5.6mg/ml的混合对照品溶液；
[0026]含有升麻素苷32mg/ml，5
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甲基维斯阿米醇苷48mg/ml，升麻素29.9mg/ml，亥茅酚苷11.2mg/ml的混合对照品。
[0027]更进一步的，高效液相色谱的色谱条件均为4.6mm
×
250mm，5μm；流动相甲醇(A)水(B)；梯度洗脱：0～20min，30％A；20～25min，45％A；25～50min，60％A；50～55min，90％A；55～60min，100％A；体积流量1mL/min；检测波长254nm；柱温30℃；进样量为10μl。
[0028]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0029]本专利技术通过建立不同产地防风HPLC指纹图谱，并测定4种色原酮类成分的含有量，可用于不同产地防风的质量控制，该方法准确，稳定，重复性好。
附图说明
[0030]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、取升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷适量，精密称定，加甲醇，制备成每1mL含升麻素苷2mg、升麻素2.3mg、5
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甲基维斯阿米醇苷3mg和亥茅酚苷0.7mg的混合对照品溶液；步骤二、采用高效液相色谱分别测定混合对照品溶液的色谱图，记录升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的保留时间；步骤三、取N批不同地区的防风，分别加入甲醇超声30min，取上清液过滤，再加入甲醇，震荡之后再超声30min，再过滤，合并两次得到的滤液，蒸发，甲醇定容，最后用0.22μm微孔滤膜滤过，得到N批供试品溶液；以1g防风计，第一次加入甲醇的量为20ml，第二次加入甲醇的量为20ml，蒸发至5ml，定容至10mL；步骤四、采用高效液相色谱分别测定N批供试品溶液的色谱图，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，标定共有峰，建立N批不同产地防风的指纹图谱；步骤五、基于步骤二中获得的升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的保留时间，指认N批不同产地防风的指纹图谱中升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰；步骤六、计算N批不同产地防风的指纹图谱中升麻素苷的色谱峰的峰面积，并以升麻素苷的色谱峰为参照峰，计算升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的峰面积；步骤七、将N批不同地区的防风的升麻素苷、升麻素、5
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甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的峰面积带入Past软件进行聚类分析，并带入SIMCA14.1软件进行主成分分析。2.根据权利要求1所述的不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，高效液相色谱的色谱条件均为4.6mm
×
250mm，5μm；流动相甲醇(A)水(B)；梯度洗脱：0～20min，30％A；20～25min，45％A；25～50min，60％A；50～55min，90％A；55～60min，100％A；体积流量1mL/min；检测波长254nm；柱温30℃；进样量为10μL。3.根据权利要求1所述的不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，所述防风过2号筛。4.根据权利要求1所述的不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，N...

【专利技术属性】
技术研发人员：张涛，陈雨秋，陈长宝，徐哲丰，高思莹，张庆贺，李琼，王恩鹏，陈雪，程一名，
申请(专利权)人：长春中医药大学，
类型：发明
国别省市：