一种无精子症有关的分子标志物及其检测方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种无精子症有关的分子标志物及其检测方法和应用，属于分析化学及临床医学技术领域。本发明专利技术通过采用UPLC

【技术实现步骤摘要】
一种无精子症有关的分子标志物及其检测方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种无精子症有关的分子标志物及其检测方法和应用，属于分析化学及临床医学


技术介绍

[0002]1988年，世界卫生组织(WHO)首次提出了生殖健康的概念，即人类及其个体在整个生命过程中与生殖相关的机体的结构、功能和行为过程中的生理、心理和社会的完满和谐的健康状态。不孕不育是全球普遍存在的夫妻之间的问题，据估计有4
‑
17％的夫妻会就诊以纠正他们的不孕不育，但通常认为，更多的不孕不育夫妇不会去诊疗。调查显示，男性因素为主要或唯一因素的占不孕不育原因的20
‑
50％左右。无精子症的发生率占男性不育症的10％
‑
20％。WHO对男性不育的标准是夫妻婚后同居1年以上，未采取避孕措施，由于男方原因造成女方不孕者。无精子症的临床诊断往往需要参考多次精液常规分析。更为重要的是,传统的精液参数检查不能全面地反映精液的全部状况。因此,男性不育经常表现为常规精液参数无明显异常,也使得传统的精液参数检查并不能有效诊断男性不育。因而,临床上亟需用于特发性男性不育的新的诊断方法。
[0003]代谢组学是一种新兴的技术,可以用于疾病诊断的生物标志的发现并且可以揭示疾病发生的机制。代谢组学揭示了发生在基因、转录和蛋白层面之下的分子事件,被认为是最近接近疾病表型的组学。目前,无精子症的精浆代谢组改变仍然未知,精浆调节了精液的化学成分,是一种无创伤的样本,特别适合用来发现无精子症诊断和机制研究的生物标志。<br/>
技术实现思路

[0004]本专利技术的一个目的在于提供一种与无精子症提供相关的分子标志物。
[0005]本专利技术另一个目的是为将分子标志物1,3
‑
二羟基丙
‑2‑
基十五烷酸酯用于无精子症诊断提供基于UPLC
‑
Q exactive MS的应用。
[0006]本专利技术再有一个目的是为上述分子标志物1,3
‑
二羟基丙
‑2‑
基十五烷酸酯提供色谱质谱用检测和诊断试剂盒。
[0007]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种无精子症有关的分子标志物，所述分子标志物为1,3
‑
二羟基丙
‑2‑
基十五烷酸酯。
[0008]本专利技术还提供一种如上所述的分子标志物在制备无精子症诊断或监测试剂中的应用。
[0009]本专利技术再提供一种如上所述的分子标志物制备的无精子症诊断或监测试剂盒，包括：
[0010]1,3
‑
二羟基丙
‑2‑
基十五烷酸酯标准品；
[0011]内标A：肌酐﹑缬氨酸、烟酸、胸腺密啶、戊二酸、L
‑
苯基丙胺酸、N
‑
乙酰对氨基酚、马尿酸八种物质的氛标同位素内标；
[0012]内标B：十五烷酸的氩标同位素内标；
[0013]内标C：二十四烷酸的氛标同位素内标、配套Hypersil GOLDC18色谱柱：100mm
×
2.1mm，粒径1.9μm Thermo Scientific，Germany；
[0014]试剂A：含100％甲醇；
[0015]试剂B：含0.1％的甲酸的水；
[0016]试剂C：含0.1％的甲酸的乙腈；
[0017]试剂D：超纯水。
[0018]本专利技术又提供一种无精子症诊断或监测的UPLC
‑
Q exactive MS的方法，所述方法检测精液中的如权利要求1中所述分子1,3
‑
二羟基丙
‑2‑
基十五烷酸酯。
[0019]本专利技术的目的是通过下列技术措施实现的：
[0020]与人类无精子症相关的1,3
‑
二羟基丙
‑2‑
基十五烷酸酯，采用UPLC
‑
Q exactive MS方法检测上述代谢小分子进行无精子症的早期诊断。
[0021]所述的检测和诊断试剂盒，该试剂盒含有1,3
‑
二羟基丙
‑2‑
基十五烷酸酯标准品。内标A：肌酐、缬氨酸、烟酸、胸腺密啶、戊二酸、L
‑
苯基丙胺酸、N
‑
乙酰对氨基酚、马尿酸八种物质的氩标同位素内标。内标B：十五烷酸的氛标同位素内标。内标C：二十四烷酸的氛标同位素内标。配套Hypersil GOLD C18色谱柱(100mm
×
2.1mm，粒径1.9μm Thermo Scientific,Germany)、试剂A(沉淀蛋白用，含100％甲醇)、试剂B(流动相用，含0.1％的甲酸的水)、试剂C(流动相用，含0.1％的甲酸的乙腈)，试剂D(复溶用，超纯水)。
[0022]本专利技术详细描述如下：
[0023]以标准操作程序(SOP)采集符合标准的精液样本，系统收集完整的人群基础信息和临床资料，并采用了基于UPLC
‑
Q exactive MS的代谢组学方法进行分析。
[0024]具体来说研究的实验方法主要包括以下几个部分：
[0025]一、研究对象选择和分组依据
[0026]纳入明确诊断的包括梗阻和非梗阻类型的无精子症80人和健康对照116人，共196人。
[0027]A组：健康对照组(80人)：
[0028]1.年龄在24至36岁之间；
[0029]2.体质指数在19至24之间；
[0030]3.生殖能力健康的男性，而且5
‑
8个月后有了健康的后代；
[0031]4.无全身重大疾病。
[0032]B组：无精子症疾病组(116人)：
[0033]1.年龄与对照组匹配；
[0034]2.体质指数与对照组匹配；
[0035]3.尝试怀孕12个月没有成功，而配偶没有不孕疾病的男性；
[0036]4.明确患有无精子症；
[0037]5.吸烟饮酒史与对照组匹配；
[0038]6.民族与对照组匹配；
[0039]7.无全身重大疾病。
[0040]二、UPLC
‑
Q exactive MS代谢组学分析和无精子症诊断用1,3
‑
二羟基丙
‑2‑
基十五烷酸酯筛选和验证
[0041]1.样本前处理
[0042]1.1.取100μL精液、加入10μL内标A，加入10μL内标B，加入10μL内标C，加入甲醇(试剂A)310μL，涡旋30s，沉淀蛋白。
[0043]1.2.离心机中4℃20000g离心15min，将上清液转移至1.5mL进口EP管，并将上清液在室温条件下于离心浓缩干燥仪中浓缩至干。
[0044]1.3.用20μL超纯水(试剂D)复溶，待分析。
[0045]2.仪器检测
[0046]2.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无精子症有关的分子标志物，其特征在于，所述分子标志物为1,3
‑
二羟基丙
‑2‑
基十五烷酸酯。2.一种如权利要求1所述的分子标志物在制备无精子症诊断或监测试剂中的应用。3.一种如权利要求1所述的分子标志物制备的无精子症诊断或监测试剂盒，其特征在于，包括：1,3
‑
二羟基丙
‑2‑
基十五烷酸酯标准品；内标A：肌酐﹑缬氨酸、烟酸、胸腺密啶、戊二酸、L
‑
苯基丙胺酸、N
‑
乙酰对氨基酚、马尿酸八种物质的氛标同位素内标；内标B：...

【专利技术属性】
技术研发人员：沙家豪，袁艳，陈敏健，杨晓玉，王嘉琛，姚莹，
申请(专利权)人：苏州南医大创新中心，
类型：发明
国别省市：