一种牛奶的核酸提取预处理制造技术

本发明专利技术公开了一种牛奶的核酸提取预处理，其包括如下步骤：在待处理的牛奶样本中加入氧化铝和氧化锆微珠，震荡一段时间，然后离心取上清液。本发明专利技术利用加入氧化铝、氧化锆微珠进行样本震荡离心的方法，使得牛奶样本经过了较好的预处理(均质和去除脂肪)，震荡均质有利于微生物从被包裹的脂肪、蛋白颗粒中被更完全释放，也进一步提高了核酸提取效率，通过氧化锆和氧化铝微珠对脂肪进行了有效吸附，同时分离简单，有效提高样本提取核酸的效率和质量，使得扩增更有效。得扩增更有效。

【技术实现步骤摘要】
一种牛奶的核酸提取预处理


[0001]本专利技术涉及生物领域，具体涉及了一种牛奶的核酸提取预处理。

技术介绍

[0002]在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基础也是最常用的技术。通常的核酸提取方法在开始之前，需要针对样本的特性进行一定的样本预处理过程，以使得核酸提取效率得以提高。
[0003]牛奶样本与其它样本有一定的差异，牛奶样本中脂肪、蛋白含量较高，通常以单一或组合形式形成颗粒，形成了粘度大、微生物不好释放等特点。特别是微生物超标的样本更加粘稠，核酸提取过程更加不易处理。
[0004]目前，常用的预处理方法一般使用蛋白酶K来对蛋白进行消解。随后再将消解后的样本进行核酸提取过程。
[0005]如中国专利技术专利公开了一种从鲜奶中高效提取核酸的方法，属生物工程应用
，其包括如下步骤：(1)、二次向鲜奶样品中加入生理盐水，经混合离心后，弃去脂肪层和上层液体，得沉淀A；(2)、向沉淀A中加入TES 溶液、盐酸胍溶液和蛋白酶K溶液；经水浴后室温冷却，再加入Tris饱和酚，经抽提离心后，取上清液B；(3)、向上清液B中加入乙酸钠溶液和异丙醇，经混合离心后，弃上清，得核酸溶于双蒸水中，
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20℃保存备用。又如中国专利技术专利公开了一种牛奶样品的前处理方法，包括如下步骤：(1)将牛奶样品水解后，加入第一溶剂萃取，分离出第一水相和第一有机相，再向第一水相中加入第二溶剂萃取，分离出第二水相和第二有机相，合并第一有机相和第二有机相，经氮吹浓缩后获得浓缩液，将所述浓缩液与混合试剂混合均匀，离心分离，去除浓硫酸层，制得提取液；其中，所述第一有机溶剂与所述第二有机溶剂为相同或不同的有机溶剂；所述有机溶剂包括但不限于乙醚、丙酮、二甲基亚砜、甲苯、正己烷、二氯甲烷中的一种或几种；(2)将步骤(1)所得的提取液依次进行酸性硅胶柱、酸性氧化铝硅胶柱净化，得到净化液；(3)将步骤(2) 所得的净化液经氮吹浓缩，加入13C
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PCDD/Fs内标，得到仪器分析用净化试样。其中，所述水解的步骤，具体包括：将牛奶样品与碱性蛋白酶溶液混合，在40～ 55℃、pH＝8.5～10.0的条件下水解3～5h；再加入碱性溶液在70～80℃水解15～ 35min，再加入有机醇震荡混合均匀，其中，所述碱性蛋白酶溶液中碱性蛋白酶的质量分数为1～5％(进一步优选为2％)；所述碱性蛋白酶溶液与所述牛奶样品的体积比为1:10～20；所述碱性溶液包括但不限于氨水溶液、氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液中的一种或几种；所述有机醇包括但不限于乙醇、甲醇、丁二醇、丙醇中的一种或几种。
[0006]但是在具体实践中，本申请人发现：蛋白酶K只能将蛋白进行降解，而脂肪球的形式对核酸的提取及后续的扩增是有消极影响的(可参考DOI： 10.1111/j.1472
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765x.1996.tb01131.x；DOI：10.1016/j.mimet.2004.06.001；ApplEnviron Microbiol.1996 Mar；62(3):1102
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1106)。除脂肪方面加入正己烷等有机溶剂萃取，但会损失一部分核酸，而且正己烷等有机溶剂存在毒性，不受用户欢迎。
[0007]基于此，如何简单安全地把脂肪颗粒进行分解，降低样本脂肪含量，对高质量的核酸提取具有重要作用。

技术实现思路

[0008]为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供了一种牛奶的核酸提取预处理，本专利技术是用于牛奶，特别是原奶的核酸提取预处理，以提高牛奶核酸提取效率，便于后续的病原微生物核酸提取。本专利技术利用加入氧化铝、氧化锆微珠进行样本震荡离心的方法，使得牛奶样本经过了较好的预处理(均质和去除脂肪)，震荡均质有利于微生物从被包裹的脂肪、蛋白颗粒中被更完全释放，也进一步提高了核酸提取效率，通过氧化锆和氧化铝微珠对脂肪进行了有效吸附，同时分离简单，有效提高样本提取核酸的效率和质量，使得扩增更有效。
[0009]本专利技术所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：
[0010]一种牛奶的核酸提取预处理，其包括如下步骤：在待处理的牛奶样本中加入氧化铝和氧化锆微珠，震荡一段时间，然后离心取上清液。
[0011]作为本专利技术提供的所述牛奶的核酸提取预处理的一种优选实施方式，所述氧化铝和氧化锆微珠粒径均为0.1～1mm。
[0012]作为本专利技术提供的所述牛奶的核酸提取预处理的一种优选实施方式，所述氧化铝和氧化锆微珠粒径均为0.1～0.3mm。
[0013]作为本专利技术提供的所述牛奶的核酸提取预处理的一种优选实施方式，所述氧化铝和氧化锆微珠的添加量各为0.05～0.2g/ml。
[0014]作为本专利技术提供的所述牛奶的核酸提取预处理的一种优选实施方式，所述一段时间为1～10min。
[0015]作为本专利技术提供的所述牛奶的核酸提取预处理的一种优选实施方式，所述一段时间为3～5min。
[0016]作为本专利技术提供的所述牛奶的核酸提取预处理的一种优选实施方式，所述震荡速度1500rpm以上。
[0017]作为本专利技术提供的所述牛奶的核酸提取预处理的一种优选实施方式，所述预处理还包括如下步骤：往上清液中加入含蛋白酶K的缓冲液，涡旋及离心处理，去掉上清；再加入溶菌酶，涡旋后孵育。
[0018]作为本专利技术提供的所述牛奶的核酸提取预处理的一种优选实施方式，所述预处理包括如下步骤：取原奶，放入离心管中，加入氧化铝及氧化锆微珠，震荡数分钟，离心取上清转移到另一离心管中；加入含蛋白酶K缓冲液，恒温孵育涡旋数分钟，离心去掉上清；再加入溶菌酶，涡旋均匀，恒温孵育数分钟，即完成预处理。
[0019]本专利技术具有如下有益效果：
[0020]本专利技术提供的牛奶的核酸提取预处理，具体是在待处理的牛奶样本中加入氧化铝和氧化锆微珠，震荡一段时间，然后离心取上清液。其中，震荡过程中，氧化铝和氧化锆微珠可以将脂肪或其与蛋白的混合颗粒进行打碎，进一步释放微生物，使其中的核酸更容易被提取；同时通过氧化锆和氧化铝微珠对脂肪的选择性吸附，有效降低了脂肪含量，离心后脂肪即可与氧化铝及氧化锆微球一同沉淀下来，与样本分离。本专利技术利用加入氧化铝、氧化锆
微珠进行样本震荡离心的方法，使得牛奶样本经过了较好的预处理(均质和去除脂肪)，震荡均质有利于微生物从被包裹的脂肪、蛋白颗粒中被更完全释放，也进一步提高了核酸提取效率，通过氧化锆和氧化铝微珠对脂肪进行了有效吸附，同时分离简单，有效提高样本提取核酸的效率和质量，使得扩增更有效。
具体实施方式
[0021]如
技术介绍
描述的，蛋白酶K只能将蛋白进行降解，而脂肪球的形式对核酸的提取及后续的扩增是有消极影响的。除脂肪方面加入正己烷等有机溶剂萃取，但会损失一部分核酸，而且正己烷等有机溶剂存在毒性，不受用户欢迎。
[0022]为了解决上述技术问题，本专利技术提出了一种牛奶的核酸提取预处理，其包括如下步骤：在待处理的牛奶样本中加入氧化铝和氧化锆微珠，震荡一段时间，然后离心取上清液。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种牛奶的核酸提取预处理，其特征在于，其包括如下步骤：在待处理的牛奶样本中加入氧化铝和氧化锆微珠，震荡一段时间，然后离心取上清液。2.根据权利要求1所述牛奶的核酸提取预处理，其特征在于，所述氧化铝和氧化锆微珠粒径均为0.1～1mm。3.根据权利要求1所述牛奶的核酸提取预处理，其特征在于，所述氧化铝和氧化锆微珠粒径均为0.1～0.3mm。4.根据权利要求1至3任一所述牛奶的核酸提取预处理，其特征在于，所述氧化铝和氧化锆微珠的添加量各为0.05～0.2g/ml。5.根据权利要求1所述牛奶的核酸提取预处理，其特征在于，所述一段时间为1～10min。6.根据权利要求1所述牛奶的核酸提取预处理，其特征在于，所述一段时间为3～5min。7.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓炀，马红圳，何洁，严义勇，周巧妮，韦家波，
申请(专利权)人：深圳市易瑞生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：