磁珠法质粒提取试剂盒、制备方法及质粒提取方法技术

本发明专利技术公开了一种磁珠法质粒提取试剂盒，包括SⅠ溶液、SⅡ溶液、磁珠Ⅰ溶液、磁珠Ⅱ溶液和洗脱液；所述SⅠ溶液用于裂解细胞，释放核酸；所述SⅡ溶液用于将蛋白等杂质沉淀；所述磁珠Ⅰ溶液中含有磁珠Ⅰ和多羧基化合物，所述磁珠Ⅰ包括第一磁芯和其表面修饰的多个羧基基团，所述磁珠Ⅰ能够吸附蛋白等杂质沉淀，从而将其去除；所述磁珠Ⅱ溶液中含有磁珠Ⅱ，用于结合质粒。本发明专利技术还提供了所述磁珠法质粒提取试剂盒的制备方法。本发明专利技术还提供了利用该试剂盒进行质粒提取的方法。提取的方法。提取的方法。

【技术实现步骤摘要】
磁珠法质粒提取试剂盒、制备方法及质粒提取方法


[0001]本专利技术涉及核酸提取
，具体涉及一种磁珠法质粒提取试剂盒、制备方法及质粒提取方法。

技术介绍

[0002]在分子生物技术中，核酸的提取也至关重要。经过长期的发展，提取核酸的方法有很多种，目前最常用的核酸提取方法是离心吸附柱提取和磁珠法提取。离心吸附柱提取质粒需要经过多次离心，难以实现自动化，并且受限于离心机对样本数量处理有一定限制。磁珠法核酸提取试剂盒配套自动化核酸提取仪能够实现核酸提取的自动化和高通量。但现阶段的磁珠法质粒提取方法，主要是用在菌体裂解离心除去大部分杂质后进行自动化提取，通过离心除去杂质这一步大幅增加了样本处理的人工成本，且限制了质粒提取的自动化范围。

技术实现思路

[0003]基于此，有必要针对上述问题，提供一种能够使质粒提取过程免于离心的磁珠法质粒提取试剂盒、制备方法及质粒提取方法，对实现质粒提取的全程自动化具有决定性的意义。
[0004]本专利技术的第一目的在于提供一种磁珠法质粒提取试剂盒，包括SⅠ溶液、SⅡ溶液、磁珠Ⅰ溶液、磁珠Ⅱ溶液和洗脱液；
[0005]所述SⅠ溶液中含有氢氧化钠、十二烷基硫酸钠和乙二胺四乙酸或其盐；
[0006]所述SⅡ溶液中含有钾盐和酸性pH调节剂；
[0007]所述磁珠Ⅰ溶液中含有磁珠Ⅰ和多羧基化合物，所述磁珠Ⅰ包括第一磁芯和其表面修饰的多个羧基基团，所述多羧基化合物中至少含有两个羧基；
[0008]所述磁珠Ⅱ溶液中含有磁珠Ⅱ、醇和乙酸钠，所述磁珠Ⅱ用于结合核酸。
[0009]在其中一个实施例中，所述多羧基化合物选自柠檬酸、乙二胺四乙酸、酒石酸和这些化合物相应的盐中的一种或多种。
[0010]在其中一个实施例中，所述磁珠Ⅰ表面修饰的羧基基团通过在其制备过程中加入所述多羧基化合物得到。
[0011]本专利技术的第二目的在于提供所述磁珠法质粒提取试剂盒的制备方法，其包括将各组分按照配比分别混合。
[0012]在其中一个实施例中，所述磁珠Ⅰ溶液的制备方法包括：
[0013]将二价铁化合物、三价铁化合物和水混合，在无氧条件下，搅拌；
[0014]在搅拌后的混合物中加入氨水，在第一温度下进行反应，所述第一温度为50℃～120℃；
[0015]在所述第一温度反应后得到的产物中加入所述多羧基化合物和抗氧化剂，在第二温度下搅拌反应，所述第二温度为50℃～120℃；
[0016]将所述第二温度反应后得到的产物用水进行磁分离洗涤，直至洗涤液pH值为6.5～7.5；
[0017]将洗涤后的产物与含有所述多羧基化合物的溶液混合。
[0018]本专利技术的第三目的在于提供利用所述的磁珠法质粒提取试剂盒进行质粒提取的方法，包括以下步骤：
[0019]将含有菌液的样品与所述SⅠ溶液混合，得到第一混合液；
[0020]将所述第一混合液、所述SⅡ溶液和所述磁珠Ⅰ溶液混合，得到第二混合液；
[0021]对所述第二混合液进行磁吸分离，收集得到第一上清液；
[0022]将所述第一上清液与所述磁珠Ⅱ溶液混合，得到第三混合液；
[0023]对所述第三混合液进行磁吸分离，去除上清液得到表面结合有核酸的磁珠Ⅱ；
[0024]对表面结合有核酸的磁珠Ⅱ进行洗涤，去除所述磁珠Ⅱ表面的杂质；
[0025]采用所述洗脱液对洗涤后的所述表面结合有核酸的磁珠Ⅱ进行洗脱，使得核酸收集在所述洗脱液中。
[0026]相比于现有离心除杂技术，本专利技术的积极效果包括：
[0027]本专利技术采用双磁珠法分别实现杂质的分离和质粒的提取。所述SⅠ溶液用于裂解细胞，释放核酸；所述SⅡ溶液用于将蛋白等杂质沉淀；所述磁珠Ⅰ溶液中含有磁珠Ⅰ和多羧基化合物，所述磁珠Ⅰ包括第一磁芯和其表面修饰的多个羧基基团，所述磁珠Ⅰ能够吸附蛋白等杂质沉淀，从而将其去除；所述磁珠Ⅱ溶液中含有磁珠Ⅱ，用于结合核酸。本专利技术独创的磁珠Ⅰ可吸附样品裂解后碎片、蛋白等杂质，避免了裂解后的离心步骤，实现了质粒提取的全自动化。
附图说明
[0028]图1为本专利技术实施例1所制备的磁珠Ⅰ透射电镜图；
[0029]图2为本专利技术实施例2所制备的磁珠Ⅱ透射电镜图；
[0030]图3为本专利技术实施例3菌液裂解除去杂质后上清液对比图；
[0031]图4为本专利技术实施例4提取质粒的琼脂糖电泳图；
[0032]图5为本专利技术对比例1菌液裂解除去杂质后上清液对比图；
[0033]图6为本专利技术对比例2提取质粒的琼脂糖电泳图；
[0034]图7为本专利技术实施例5提取质粒的琼脂糖电泳图。
具体实施方式
[0035]为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0036]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0037]本专利技术中，“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。
[0038]本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本专利技术中所使用的术语“含有”、“包含”和“包括”是同义词，其是包容性或开放式的，不排除额外的、未被引述的成员、元素或方法步骤。本专利技术中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
[0039]本专利技术中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
[0040]本专利技术中，涉及到数值区间，如无特别说明，则包括数值区间的两个端点。
[0041]本专利技术中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相
‑
固相混合均指质量百分比，对于液相
‑
液相混合指体积百分比。
[0042]本专利技术中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。
[0043]第一方面，本专利技术实施例提供一种磁珠法质粒提取试剂盒，包括SⅠ溶液、SⅡ溶液、磁珠Ⅰ溶液、磁珠Ⅱ溶液和洗脱液；
[0044]所述SⅠ溶液中含有氢氧化钠、十二烷基硫酸钠和乙二胺四乙酸或其盐；
[0045]所述SⅡ溶液中含有钾盐和酸性pH调节剂；
[0046]所述磁珠Ⅰ溶液中含有磁珠Ⅰ和多羧基化合物，所述磁珠Ⅰ包括第一磁芯和其表面修饰的多个羧基基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法质粒提取试剂盒，其特征在于，包括SⅠ溶液、SⅡ溶液、磁珠Ⅰ溶液、磁珠Ⅱ溶液和洗脱液；所述SⅠ溶液中含有氢氧化钠、十二烷基硫酸钠和乙二胺四乙酸或其盐；所述SⅡ溶液中含有钾盐和酸性pH调节剂；所述磁珠Ⅰ溶液中含有磁珠Ⅰ和多羧基化合物，所述磁珠Ⅰ包括第一磁芯和其表面修饰的多个羧基基团，所述多羧基化合物中至少含有两个羧基；所述磁珠Ⅱ溶液中含有磁珠Ⅱ、醇和乙酸钠，所述磁珠Ⅱ用于结合核酸。2.根据权利要求1所述的磁珠法质粒提取试剂盒，其特征在于，所述多羧基化合物选自柠檬酸、乙二胺四乙酸、酒石酸和这些化合物相应的盐中的一种或多种；优选地，所述磁珠Ⅰ表面修饰的羧基基团通过在其制备过程中加入所述多羧基化合物得到。3.根据权利要求1所述的磁珠法质粒提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠Ⅱ包括第二磁芯和其表面包覆的二氧化硅层。4.根据权利要求1所述的磁珠法质粒提取试剂盒，其特征在于，所述钾盐选自乙酸钾、硫酸钾、磷酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钾中的一种或多种组合。5.根据权利要求1～4任一项所述的磁珠法质粒提取试剂盒，其特征在于，所述SⅠ溶液中包含如下质量比例的物质：氢氧化钠、十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸或其盐和柠檬酸钠的比例为(0.2％～5％):(0.15～10％):(10mM～100mM):(2mM～50mM)；和/或，所述SⅡ溶液中包含乙酸钾、氯化钾和冰醋酸，所述乙酸钾和所述氯化钾的摩尔比为(0.05～3)M:(10～100)mM；和/或，所述磁珠Ⅰ溶液中包含所述磁珠Ⅰ、柠檬酸钠和抗氧化剂，所述磁珠Ⅰ和柠檬酸钠的质量为(10～100)mg/mL:(2～50)mM；和/或，所述磁珠Ⅱ溶液中包含所述磁珠Ⅱ、无水乙醇、异丙醇和乙酸钠，所述磁珠Ⅱ和所述乙酸钠的质量为(1～50)mg/mL:(0.5～3)M；优选地，按质量浓度计，所述SⅠ溶液中包含0.2％～5％的氢氧化钠、0.15％～10％的十二烷基硫酸钠、10mM～100mM的乙二胺四乙酸或其盐、2mM～50mM的柠檬酸钠；所述SⅡ溶液中包含0.05M～3M的乙酸钾、10mM～100mM的氯化钾和冰醋酸，所述SⅡ溶液的pH为3.5～4.8；所述磁珠Ⅰ溶液中包含10mg/mL～100mg/mL的所述磁珠Ⅰ、2mM～50mM的柠檬酸钠和2mM～50mM的抗氧化剂；所述磁珠Ⅱ溶液中包含1mg/mL～50mg/mL的所述磁珠Ⅱ、乙醇、异丙醇、0.5M～3M的乙酸钠，所述乙醇和所述异丙醇在所述磁珠Ⅱ溶液中的总体积分数为40％～75％。6.根据权利要求1～4任一项所述的磁珠法质粒提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括WⅠ溶液，所述WⅠ溶液中含有乙醇、异丙醇和0.1M～2M乙酸钠，所述乙醇和所述异丙醇在所述WⅡ溶液中的总体积分数为50％～75％；优选地，所述试剂盒还包括WⅡ溶液，所述WⅡ溶液包括体积分数为50％～80％的乙醇溶液。
7.权利要求1～6任一项所述的磁珠法质粒提取试剂盒的制备方法，其包括将各组分按照配比分别混合；优选地，所述磁珠Ⅰ溶液的制备方法包...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖晓文，喻春函，曹文刚，杜军，
申请(专利权)人：湖北擎科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：