寡核苷酸分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种寡核苷酸分离纯化方法，所述方法包括使待分离的寡核苷酸样品进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，由此分离所述寡核苷酸，其中所述凝胶中聚丙烯酰胺的浓度为20

【技术实现步骤摘要】
寡核苷酸分离纯化方法


[0001]本专利技术涉及寡核苷酸分离纯化方法，更具体地涉及使用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化寡核苷酸的方法。

技术介绍

[0002]目前市面上使用较为广泛的寡核苷酸纯化方法主要有：聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)纯化法、寡核苷酸纯化柱(RPC/OPC)柱纯化法、高效液相色谱(HPLC)纯化法、毛细管凝胶电泳(CGE)纯化法等等，而PAGE纯化法在纯化效果和经济成本上具备的综合优势，使其成为寡核苷酸纯化中最受欢迎的一种纯化方式。
[0003]目前通用的寡核苷酸PAGE纯化方法是16％尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化方法结合乙醇沉淀回收方法，但该PAGE方法存在两大缺陷，极大地限制了其在寡核苷酸纯化回收上的效率和质量。
[0004]其一，16％尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化的原理主要是根据寡核苷酸片段在聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率不同来实现大小片段的分离，但该纯化工艺的缺陷在于：目前所使用的16％尿素变性PAGE胶对于与目的产物相差1到2个核苷酸(1
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2nt)的合成失败寡核苷酸残缺片段(与目的产本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.寡核苷酸分离方法，所述方法包括使待分离的寡核苷酸样品进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，由此分离所述寡核苷酸，其中所述凝胶中聚丙烯酰胺的浓度为20
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28％。2.根据权利要求1所述的寡核苷酸分离方法，其中所述凝胶中聚丙烯酰胺的浓度为25％。3.根据权利要求1或2所述的寡核苷酸分离方法，其中所述寡核苷酸的长度为6
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200nt。4.根据权利要求3所述的寡核苷酸分离方法，其中所述寡核苷酸的长度为6
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50nt。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的寡核苷酸分离方法，其中所述待分离的寡核苷酸样品中至少含有长度相差为1
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10nt的两种寡核苷酸，优选为至少含有长度相差为1
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2nt的两种寡核苷酸。6.寡核苷酸纯化方法，所述方法包括：(1)使用权利要求1
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5中任一项所述的寡核苷酸分离方法分离寡核苷酸样品；(2)回收分离的目的寡核苷酸。7.根据权利要求6所述的寡核苷酸纯化方法，其中所述步骤(2)包括割取步骤(1)分离的目的寡核苷酸条带，用泡胶液浸泡所述寡核苷酸条带后直接回收所述目的寡核苷酸，所述泡胶液是水或水溶液。8.根据权利要求7所述的寡核苷酸纯化方法，其中用泡胶液浸泡寡核苷酸条带的时间为0.2h
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1.5h，优选为0.5h。9.根据权利要求7或8的纯化方法，所述泡胶液经预热后使用；优选地，预热温度为40℃
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80℃，更优选为60℃。10.根据权利要求7
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9中任一项所述的寡核苷酸纯化方法，其中所述泡胶液为含有1
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10mM Tris
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HCl和1mM EDTA，pH 7.5
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8.5的水溶液，优选为含有10mM Tris
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HCl和1mM EDTA，pH 8.0的水溶液。11.一种分离寡核苷酸的非变性聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述凝胶中聚丙烯酰胺浓度为20％
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28％，优选地聚丙烯酰胺浓度为25％。12.根据权利要求11所述的非变性聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，配制所述凝胶的原料包括丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺。13.根据权利要求12所述的非变性聚丙烯酰胺凝胶，所述丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的重量比为29:1
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19:1，优选为29：1。14.根据权利要求11
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13中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘仁杰，王进，郭庆，曾文举，
申请(专利权)人：江苏金斯瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：