一种RNA提取试剂盒及RNA提取方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于血液RNA提取的裂解结合液、RNA提取试剂盒及RNA提取方法。利用该裂解结合液直接对血样样本中的RNA进行提取，无需裂解离心分离红细胞，获得的RNA质量较高，满足各种实验需要，可直接用于RT

【技术实现步骤摘要】
一种RNA提取试剂盒及RNA提取方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种RNA提取试剂盒及RNA提取方法。

技术介绍

[0002]随着分子生物学技术的发展，以RNA为靶标进行的组织及细胞的分子生物学研究更为广泛，其中分离出纯度高且完整的RNA是进行基因表达分析及RNA结构功能研究的基础。在所有RNA实验中，最关键的步骤是分离得到纯度高且完整的RNA。血液中含有核白细胞，因此从血液中抽提RNA比较方便，但是血液中的红细胞富含核糖核酸酶，所以从血液中分离RNA有其特殊的难度。
[0003]常见的RNA提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、热硼酸法或改良热硼酸法、LiCl
‑
尿素法、改良的Gomez法、异硫氰酸胍法、TRIzol试剂快速提取法、CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法。
[0004]随着生物技术的不断发展，很多生物技术公司着手RNA提取的研究并取得丰硕成果，将科研人员从繁琐的提取、纯化工作中解放出来。目前，RNA提取中常用的试剂盒主要分为3种：TRIzol试剂一步法、TRIzol LS试剂一步法和PAXgene试剂盒法，前两者均使用苯酚和异硫氰酸胍的单相溶液，而PAXgene法需根据试剂生产商说明书操作。
[0005]Trizol法不可避免会使用氯仿，然而氯仿是一种有毒试剂，不利于实验操作人员的身体健康。而其它试剂盒方法中均需要先对红细胞进行裂解，然后离心取沉淀的细胞再进行下一步的提取，这些试剂盒方法操作繁琐耗时较长，不适合大批量提取。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了一种RNA提取试剂盒及RNA提取方法，该方法无需裂解离心分离红细胞，可直接对血样样本中的RNA进行提取，获得RNA满足各种实验需要，可直接用于RT
‑
qPCR等实验或保存于
‑
70℃。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]一种用于血液RNA提取的裂解结合液，包括DEPC水和如下浓度的组分：
[0008]作为优选，所述裂解结合液包括DEPC水和如下浓度的组分：
[0009][0010]一些具体实施例中，所述裂解结合液包括DEPC水和如下浓度的组分：
[0011]一些具体实施例中，所述裂解结合液包括DEPC水和如下浓度的组分：
[0012][0013]本专利技术还提供了所述的裂解结合液在提取血液RNA中的应用。
[0014]本专利技术还提供一种提取血液RNA的试剂盒，包括本专利技术所述的裂解结合液，以及清洗液、洗脱液和磁珠。
[0015]作为优选，所述清洗液包括第一清洗液和第二清洗液。
[0016]其中，所述第一清洗液包括以下组分：
[0017]0.1
‑
2M盐酸胍；
[0018]0.1
‑
2M氯化钠；
[0019]1‑
5vol％Triton X
‑
100；
[0020]10
‑
50vol％异丙醇；
[0021]第二清洗液为80％乙醇。
[0022]作为优选，所述洗脱液为DEPC水。
[0023]作为优选，所述磁珠为超顺磁性二氧化硅磁珠。
[0024]本专利技术还提供一种提取血液RNA的方法，利用本专利技术所述的试剂盒提取血液样本中的RNA。
[0025]作为优选，本专利技术提供的提取血液RNA的方法，包括如下步骤：
[0026]1)将磁珠进行羧基改性后悬浮于缓冲液中，得到第一混合液；
[0027]3)在血液样本中加入裂解结合液得到第二混合液；
[0028]4)第一混合液与第二混合，得到含有核酸
‑
磁珠的第三混合液；
[0029]5)利用磁力吸附第三混合液的中核酸
‑
磁珠，去除上清液；收集磁珠，依次用第一清洗液和第二清洗液洗涤，干燥，DNaseⅠ消化；消化结束后加入第二清洗液洗涤，磁吸去上清液；
[0030]7)将洗涤后的磁珠与洗脱液混合，收集洗脱液，获得血液RNA。
[0031]作为优选，所述第一混合液中，磁珠的浓度为10
‑
100mg/mL。
[0032]本专利技术中，所述DNaseⅠ购自Omega、诺唯赞、罗氏、生工；优选为DNase
Ⅰ‑
Omega。
[0033]本专利技术提供了一种用于血液RNA提取的裂解结合液、RNA提取试剂盒及RNA提取方法。利用该裂解结合液直接对血样样本中的RNA进行提取，无需裂解离心分离红细胞，获得的RNA质量较高，满足各种实验需要，可直接用于RT
‑
qPCR等实验或保存于
‑
70℃
附图说明
[0034]图1示本专利技术血液RNA提取的试剂盒的操作流程图；
[0035]图2示不同磁珠对提取的RNA的影响；2
‑
a为电泳分析结果，从左到右依次为SC磁珠、PC磁珠和70108磁珠的结果；2
‑
a为Agilent 4150TapeStation检测分析的70108磁珠实验组的RNA电泳图，代表RNA条带的片段分布与完整性；
[0036]图3示不同DNaseⅠ对提取的RNA的影响；3
‑
a为电泳分析结果，从左到右依次为DNase
Ⅰ‑
Omega、DNase
Ⅰ‑
诺唯赞、DNase
Ⅰ‑
罗氏和DNase
Ⅰ‑
生工的结果；3
‑
b为Agilent4150TapeStation检测分析DNase
Ⅰ‑
Omega实验组的RNA电泳图，代表RNA条带的片段分布与完整性；
[0037]图4示不同反应温度下的DNaseⅠ消化对RNA提取的影响；4
‑
a为电泳分析结果，从左到右依次为生工DNaseⅠ37℃、生工DNaseⅠRT、诺唯赞DNaseⅠ37℃和诺唯赞DNaseⅠRT的结果；4
‑
b为Agilent 4150TapeStation检测分析诺唯赞DNaseⅠRT实验组的RNA电泳图，代表RNA条带的片段分布与完整性；
[0038]图5示不同磁珠加入量对提取的RNA的影响；5
‑
a为电泳分析结果，从左到右依次为SC20210714
‑
0.25mg、SC20210714
‑
0.5mg、SC20210714
‑
1mg、70108
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0.25mg、70108
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0.5mg和70108
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1mg的结果；5
‑
b为Agilent4150TapeStation检测70108
‑
1mg实验组的RNA电泳图，代表RNA条带的片段分布与完整性；
[0039]图6示实施例7的裂解液对RNA提取本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于血液RNA提取的裂解结合液，包括DEPC水和如下浓度的组分：2.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，包括DEPC水和如下浓度的组分：3.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，包括DEPC水和如下浓度的组分：3.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，包括DEPC水和如下浓度的组分：4.权利要求1～3任一项所述的裂解结合液在提取血液RNA中的应用。5.一种提取血液RNA的试剂盒，包括权利要求1～3任一项所述的裂解结合液，以及清洗液、洗脱液和磁珠。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述清洗液包括第一清洗液和第二清洗液；
所述第一清洗液包括以下组分：0.1
‑
2M盐酸胍；0.1
‑
2M氯化钠；1
‑
5vol％TritonX
‑
100；10
‑
50％vol异丙醇；第二清洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：庞经昊，黄明贤，任辉，
申请(专利权)人：苏州海狸生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：