磁珠外源核酸污染清除试剂及清除方法技术

本发明专利技术涉及分子生物技术领域，具体涉及磁珠外源核酸污染清除试剂及清除方法。本发明专利技术提供的磁珠外源核酸污染清除试剂包括溶液A和溶液B，其中，溶液A中包括表面活性剂和氧化剂，溶液B中包括碱、盐和裂解液。本发明专利技术提供的磁珠外源核酸污染清除试剂，操作方法简单经济、安全温和且效率高，可以在确保处理后的磁珠保持原有性能的情况下达到清除核酸污染的目的，适宜规模化处理。规模化处理。

【技术实现步骤摘要】
磁珠外源核酸污染清除试剂及清除方法


[0001]本专利技术涉及分子生物
，具体涉及磁珠外源核酸污染清除试剂及清除方法。

技术介绍

[0002]生物污染在科学、医疗和工业的许多领域都是一个普遍问题。特别是医疗服务和食品工业，必须确定是否残留潜在的致病菌，如细菌、病毒和真菌。尽管完全无菌的环境是不可能实现的，但有时候这种生物污染可能会对测量结果产生重大影响。病原微生物检测市场空间巨大，病原微生物的基因提取是临床标本检验的重要步骤，也是临床诊断和治疗感染性疾病必要途径。在进行核酸扩增前，快速有效地提取核酸是一项必不可少的步骤。目前，核酸提取方法主要有柱提法和磁珠法，而柱提法在实际应用中不便于机械化，难以实现高通量，需要投入大量的人工成本和时间成本，那么在使用磁珠法进行核酸提取时，确保清除磁珠外源核酸污染显得格外重要，也是本专利技术所要解决的问题。
[0003]常见的核酸污染包括：扩增产物的污染、提取核酸的污染、阳性对照的污染、外来核酸的污染等。如何处理这些污染的核酸，科研人员也提出很多处理方法，如核酸酶降解法、紫外线照射法、氯化物氧化法、高温处理法、次氯酸钠浸泡法或擦洗法。现有清除核酸的方法并不完全适用于处理表面含有功能基团的磁珠。核酸酶法通过一定时间和温度的孵育可以起到水解核酸的作用，但是会在磁珠表面引入蛋白质的污染，虽然酶可以通过热孵育失活，但蛋白仍会附着在磁珠表面，难以完全分离出来，增加其他污染的可能性。环氧乙烷灭菌消毒过程缓慢，费用昂贵，且会释放出残留的毒性气体，极有可能对科研人员造成安全隐患，另外磁珠因其表面含功能基团不适合用环氧乙烷灭菌，可能造成功能基团的结构破坏从而影响磁珠性能。
[0004]因此，寻求一种简单有效且不影响磁珠性能的方法迫在眉睫。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供磁珠外源核酸污染清除试剂及清除方法，本专利技术提供的磁珠外源核酸污染清除试剂及清除方法，简单经济、安全温和且效率高，适宜规模化处理。
[0006]本专利技术提供了核酸清除试剂组合，包括：溶液A和溶液B，其中：
[0007]所述溶液A由水、0.1wt％～5wt％表面活性剂和0.5wt％～4.5wt％氧化剂组成；
[0008]所述溶液B由水、0.5～1.5M碱、0.05～0.2M盐和0.25～1M裂解液组成。
[0009]相比其他试剂，本专利技术所述溶液A与溶液B中，各组分之间能够更有效的配合使用。其中，溶液A中，表面活性剂和氧化剂配合，相对于其他试剂组合能够更有效破坏核酸的氢键、磷酸二酯键，进而破坏核酸的结构；溶液B中，碱性环境和盐类配合，共同导致核酸一级结构的断裂、影响核酸的溶解度，，还加入了一定比例的裂解剂液组分，确保清除污染效果。而在降解核酸的同时，本专利技术提供的试剂还可以维持磁珠的稳定性。通过溶液A与溶液B配
合使用对样本进行交叉处理，不仅安全、温和同时充分清除外源核酸残留，在清除磁珠外源核酸污染时也能保证磁珠性能的稳定，从而获得更准确、更灵敏的技术效果。
[0010]优选的，所述表面活性剂包括吐温20、甜菜碱、脱氧胆酸钠和曲拉通中的至少一种。
[0011]优选的，所述氧化剂包括过氧化氢和过氧化钠中的至少一种。
[0012]优选的，所述碱包括氢氧化钠和氢氧化钾中的至少一种。经实验探究表明，溶液B中的碱性环境在磁珠去核酸污染中发挥比较重要的作用。
[0013]优选的，所述盐包括氯化钠和氯化钾中的至少一种。
[0014]优选的，所述裂解液包括异硫氰酸胍和盐酸胍中的至少一种。
[0015]在一些实施例中，所述溶液A由水、5wt％吐温20和3wt％过氧化氢组成，所述溶液B由水、1.5M氢氧化钠、0.05M氯化钠和0.25M异硫氰酸胍组成。
[0016]在一些实施例中，所述溶液A由水、3wt％甜菜碱、1.5wt％曲拉通和4.5wt％过氧化钠组成，所述溶液B由水、0.5M氢氧化钾、0.2M氯化钠和1M盐酸胍组成。
[0017]在一些实施例中，所述溶液A由水、0.1wt％脱氧胆酸钠、3wt％曲拉通和0.5wt％过氧化氢组成，所述溶液B由水、1M氢氧化钾、0.1M氯化钾、0.8M异硫氰酸胍组成。
[0018]实验表明，在上述浓度范围下，所述溶液A与所述溶液B对磁珠外源核酸污染的清除能力都表现为最佳。
[0019]在一些实施例中，所述溶液A由水、2.5wt％曲拉通和3wt％过氧化氢组成，所述溶液B由水、0.8M氢氧化钠、0.15M氯化钠和0.75M异硫氰酸胍组成。
[0020]实验表明，在此浓度下，经溶液B处理后的磁珠，可以同时保证减少外源核酸残留、保持磁珠提取性能以及保证磁珠悬浮性等要求。
[0021]本专利技术还提供了所述的核酸清除试剂组合在清除磁珠外源核酸污染上的应用。
[0022]本专利技术提供了清除磁珠核酸的方法，采用所述的核酸清除试剂组合进行清除。
[0023]优选的，所述方法包括以下步骤：
[0024]磁珠中加入所述溶液A，混匀洗涤后，去除废液；
[0025]再加入所述溶液B混匀洗涤，去除废液后获得清洁磁珠。
[0026]进一步优选的，所述磁珠中加入5倍体积的所述溶液A，所述洗涤时间20分钟后去除废液；再在所述磁珠中加入5倍体积的所述溶液B，所述洗涤时间20分钟。
[0027]在一些实施例中，所述溶液A与所述溶液B交替重复洗涤2次。
[0028]在一些实施例中，所述溶液B最后一次洗涤并去除废液后，所述磁珠中加入5倍体积的灭菌水，混匀洗涤20分钟后获得清洁磁珠。
[0029]本专利技术提供的磁珠外源核酸污染清除试剂包括溶液A和溶液B，其中，溶液A中包括表面活性剂和氧化剂，溶液B中包括碱、盐和裂解液。与现有技术相比，本专利技术的磁珠外源核酸污染清除试剂与操作方法简单经济、安全温和且效率高，可以在确保处理后的磁珠保持原有的性能的情况下达到清除核酸污染的目的，适宜规模化处理。实验中发现，磁珠外源核酸污染清除试剂中未处理时平均CT值为22.40，未添加碱性试剂处理时平均CT值为29.35，而添加了碱性试剂处理后未检出污染残留，表明磁珠外源核酸污染清除试剂中添加了碱性试剂，可以有效提升磁珠表面核酸去除效果。
附图说明
[0030]图1示磁珠外源残留检测的扩增图；
[0031]图2示磁珠外源残留清除前和使用清除剂A和B处理后扩增图；
[0032]图3示磁珠残留清除前及使用清除剂A和B处理后磁珠提取性能检测扩增图。
具体实施方式
[0033]本专利技术提供了磁珠外源核酸污染清除试剂及清除方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.核酸清除试剂组合，其特征在于，包括：溶液A和溶液B，其中：所述溶液A由水、0.1wt％～5wt％表面活性剂和0.5wt％～4.5wt％氧化剂组成；所述溶液B由水、0.5～1.5M碱、0.05～0.2M盐和0.25～1M裂解液组成。2.如权利要求1所述的核酸清除试剂组合，其特征在于，所述表面活性剂包括吐温20、甜菜碱、脱氧胆酸钠和曲拉通中的至少一种。3.如权利要求1所述的核酸清除试剂组合，其特征在于，所述氧化剂包括过氧化氢和过氧化钠中的至少一种。4.如权利要求1所述的核酸清除试剂组合，其特征在于，所述碱包括氢氧化钠和氢氧化钾中的至少一种。5.如权利要求1所述的核酸清除试剂组合，其特征在于，所述盐包括氯化钠和氯化钾中的至少一种。6.如权利要求1所述的核酸清除试剂组合，其特征在于，所述裂解液包括异硫氰酸胍和盐酸胍中的至少一种。7.如权利要求1～6任一项所述的核酸清除试剂组合，其特征在于，所述溶液A由水、5wt％吐温20和3wt％过氧化氢组...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢海霞，张慧，黄明贤，任辉，
申请(专利权)人：苏州海狸生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：