一种同时检测旋毛虫和刚地弓形虫的引物组合、试剂盒及方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种同时检测旋毛虫和刚地弓形虫的引物组合、试剂盒及方法与应用。所述引物组合包括用于检测旋毛虫的第一引物组和用于检测刚地弓形虫的第二引物组，所述第一引物组包括如SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测旋毛虫和刚地弓形虫的引物组合、试剂盒及方法与应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种同时检测旋毛虫和刚地弓形虫的引物组合、试剂盒及方法与应用。

技术介绍

[0002]旋毛虫是袋形动物门(Aschelminthes)线虫纲(Nematoda)的寄生蠕虫，学名为Trichinella spiralis，呈世界性分布，能引起人和其他哺乳动物(猪、犬、猫、熊、狐、鼠)的严重疾病—旋毛虫病(trichinosis)。旋毛虫病是一种世界范围内的人畜共患病，主要是由于食入含旋毛虫囊包蚴的生食动物制品或受到旋毛虫囊包蚴污染熟制品而感染人体。
[0003]弓形虫病是由刚地弓形虫(Toxoplasma Gondii)所引起的人畜共患病，在全球范围内广泛分布。刚地弓形虫是专性细胞内寄生虫，球虫亚纲，真球虫目，等孢子球虫科，弓形体属。弓形虫的生活周期需要两个宿主，中间宿主包括爬虫类、鱼类、昆虫类、鸟类、哺乳类等动物和人，终宿主则为猫科动物。弓形虫对人群普遍易感，在人体多为隐性感染。严重疾病患者，如恶性肿瘤、淋巴肉芽肿、长期免疫抑制剂以及免疫缺陷如艾滋病等患者多易发生弓形虫病。弓形虫能广泛寄生于人和动物的有核细胞内，可随血液流动到达全身各部位。发病者临床表现复杂，其症状和体征又缺乏特异性，易造成误诊，主要侵犯眼、脑、心、肝、淋巴结等，致使人的免疫力下降，罹患各种疾病。弓形虫是孕期宫内感染导致胚胎畸形的重要病原体之一。弓形虫的传播途径很多，密切接触染病的人、家畜、受污染的环境和水，以及吸血昆虫叮咬等是重要感染方式，另外就是食用被污染的食物，如生或未熟的肉类、乳制品、蛋等导致感染。
[0004]从食品安全角度考虑，针对猪肉、牛奶等动物源性食品，非常有必要开展旋毛虫和刚地弓形虫等寄生虫的快速检测，以便及时发现受染食品，有效控制食源性传染病和人畜共患疾病，保障人民的身体健康。目前诊断旋毛虫和刚地弓形虫的经典方法主要是应用显微镜观测寄生虫的涂片法，但该方法灵敏度低，耗时费工，也容易漏诊；以及检测抗原或抗体的免疫学方法，如酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析技术等，但免疫学方法检测的样本必需是血清或血浆，在针对肉类、蛋类、乳制品等动物源性食品开展检测时并不适用。因此，针对寄生虫的基因组DNA开展核酸检测是动物源性食品微生物病原体安全检测的首选方案。将聚合酶链反应(PCR)技术与可视化的横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合建立的病原体PCR
‑
LFD检测技术，可实现双靶标的双重可视化检测。但是，基于PCR
‑
LFD的检测需要专业实验室和精密设备—PCR仪，而且由于PCR需要3个温度至少30次的升降温反复循环扩增，所以整个检测时间需要1.5
‑
2小时，耗时太长。考虑到动物源性食品或动物疫病的病原体检测应用场景经常是农贸市场、养猪场等现场，如何提高核酸检测的灵敏度和效率，实现对肉类等动物源性食品中旋毛虫和刚地弓形虫2种寄生虫的现场、简易、同时、快速、可视化检测是本领域追求的目标。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种同时检测旋毛虫和刚地弓形虫的引物组合，能够快速、灵敏的同时检测旋毛虫和刚地弓形虫。
[0006]本专利技术还提出一种具有上述引物组合的试剂盒。
[0007]本专利技术还提出上述引物组合和试剂盒的应用。
[0008]根据本专利技术的一个方面，提出了一种同时检测旋毛虫和刚地弓形虫的引物组合，所述引物组合包括用于检测旋毛虫的第一引物组和用于检测刚地弓形虫的第二引物组；
[0009]其中，所述第一引物组包括如序列SEQ ID NO:1所示的正向内引物FIP
‑
1、如序列SEQ ID NO:2所示的反向内引物BIP
‑
1、如序列SEQ ID NO:3所示的正向外引物F3
‑
1、如序列SEQ ID NO:4所示的反向外引物B3
‑
1、以及如序列SEQ ID NO:5所示的正向环引物LF
‑
1和如序列SEQ ID NO:6所示的反向环引物LB
‑
1；
[0010]所述第二引物组包括如序列SEQ ID NO:7所示的正向内引物FIP
‑
2、如序列SEQ ID NO:8所示的反向内引物BIP
‑
2、如序列SEQ ID NO:9所示的正向外引物F3
‑
2、如序列SEQ ID NO:10所示的反向外引物B3
‑
2、以及如序列SEQ ID NO:11所示的正向环引物LF
‑
2和如序列SEQ ID NO:12所示的反向环引物LB
‑
2。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，引物组在每25μL反应体系中的使用浓度为：正向内引物FIP
‑
1、FIP
‑
2，反向内引物BIP
‑
1、BIP
‑
2的终浓度均为0.8
‑
2.0μmol/L；正向外引物F3
‑
1、F3
‑
2，反向外引物B3
‑
1、B3
‑
2的终浓度均为0.1
‑
0.3μmol/L；正向环引物LF
‑
1、LF
‑
2，反向环引物LB
‑
1、LB
‑
2的终浓度均为0.2
‑
0.5μmol/L。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，还包括采用生物素、地高辛或荧光素对所述引物组合中的环引物进行标记，得到带标记的正向环引物FITC
‑
LF
‑
1、FITC
‑
LF
‑
2和带标记的反向环引物Bio
‑
LB
‑
1、Dig
‑
LB
‑
2。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，采用荧光素对正向环引物的5
’
端进行修饰，采用生物素或地高辛对反向环引物的5
’
端进行修饰。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，引物组在每25μL反应体系中的使用浓度为：正向内引物FIP
‑
1、FIP
‑
2，反向内引物BIP
‑
1、BIP
‑
2的终浓度均为0.8
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2.0μmol/L；正向外引物F3
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1、F3
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2，反向外引物B3
‑
1、B3
‑
2的终浓度均为0.1
‑
0.3μmol/L；正向环引物LF
‑
1、LF
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2，反向环引物LB
‑
1、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测旋毛虫和刚地弓形虫的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括用于检测旋毛虫的第一引物组和用于检测刚地弓形虫的第二引物组；其中，所述第一引物组包括如序列SEQ ID NO:1所示的正向内引物FIP
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1、如序列SEQ ID NO:2所示的反向内引物BIP
‑
1、如序列SEQ ID NO:3所示的正向外引物F3
‑
1、如序列SEQ ID NO:4所示的反向外引物B3
‑
1、以及如序列SEQ ID NO:5所示的正向环引物LF
‑
1和如序列SEQ ID NO:6所示的反向环引物LB
‑
1；所述第二引物组包括如序列SEQ ID NO:7所示的正向内引物FIP
‑
2、如序列SEQ ID NO:8所示的反向内引物BIP
‑
2、如序列SEQ ID NO:9所示的正向外引物F3
‑
2、如序列SEQ ID NO:10所示的反向外引物B3
‑
2、以及如序列SEQ ID NO:11所示的正向环引物LF
‑
2和如序列SEQ ID NO:12所示的反向环引物LB
‑
2。2.根据权利要求1的引物组合，其特征在于，还包括采用生物素、地高辛或荧光素对所述引物组合中的环引物进行标记，得到的带标记的正向环引物FITC
‑
LF
‑
1、FITC
‑
LF
‑
2和带标记的反向环引物Bio
‑
LB
‑
1、Dig
‑
LB
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2。3.根据权利要求2的引物组合，其特征在于，引物组合在每25μL反应体系中的使用浓度为：正向内引物FIP
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1、FIP
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2，反向内引物BIP
‑
1、BIP
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2的终浓度均为0.8
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2.0μmol/L；正向外引物F3
‑
1、F3
‑
2，反向外引物B3
‑
1、B3
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2的终浓度均为0.1
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0.3μmol/L；正向环引物LF
‑
1、LF
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2，反向环引物LB
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1、LB
‑
2的终浓度均为0.2
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0.5μmol/L；带标记的正向环引物FITC
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LF
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1、FITC
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LF
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2，带标记的反向环引物Bio
‑
LB
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1、Dig
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LB
‑
2的浓度均为0.2
‑
0.5μmol/L。4.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1
‑
3任一项所述的引物组合。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核酸检测试纸。6.根据权利要求5所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫秋华，王炳志，杨波，严义勇，付辉，周巧妮，
申请(专利权)人：深圳市易瑞生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：