高产PHA的基因重组菌及其构建方法技术

本发明专利技术涉及高产PHA的基因重组菌及其构建方法，提供了可用于生产聚羟基脂肪酸酯（PHA）的工程化微生物，更具体地是高产PHA的重组富养罗尔斯通氏菌，其中所述重组富养罗尔斯通氏菌包含上调phaJ基因的启动子，并进一步包括突变的phaC基因。本发明专利技术提供的重组富养罗尔斯通氏菌可用于生产PHA中的3

【技术实现步骤摘要】
高产PHA的基因重组菌及其构建方法


[0001]本专利技术属于基因工程和发酵工程领域，更具体地，本专利技术涉及一种高产聚羟基脂肪酸酯（Polyhydroxyalkanoates，PHA）的基因重组菌及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]聚羟基脂肪酸酯（Polyhydroxyalkanoates，PHA）是一类由微生物合成的可再生可降解且具有多元材料学性能的高分子聚合物，在医学、材料和环保领域有着广泛的应用前景。聚羟基脂肪酸酯广泛存在于微生物细胞内，主要作为碳源及能量的贮存载体。PHA根据单体种类、聚合方式的不同，具有从坚硬质脆的硬塑料到柔软的弹性体等一系列多样性的材料学特性。
[0003]聚羟基丁酸酯（PHB）是一种商业上有用的复合生物聚合物，是由大量细菌产生的细胞内材料。聚羟基丁酸酯是基于聚合物的化学和物理性质的有用的生物材料，具有多种潜在应用，包括用作可生物降解/热塑性材料，某些抗生素有机合成的手性中心来源以及用作药物递送和骨替代的基质。3
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羟基丁酸与3
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羟基己酸共聚酯（PHBHHx）是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组富养罗尔斯通氏菌，其特征在于，所述重组富养罗尔斯通氏菌基因组中引入了上调phaJ基因的启动子；所述重组富养罗尔斯通氏菌中包括引入的phaC突变基因，其中所述引入的phaC突变基因的表达使得所述重组富养罗尔斯通氏菌合成3
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羟基丁酸与3
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羟基己酸共聚酯。2.根据权利要求1的重组富养罗尔斯通氏菌，其特征在于，通过同源重组的方式，在phaJ基因上游插入上调phaJ基因的启动子序列，其中所述phaJ基因是phaJ4b基因，所述启动子序列选自phaJ43启动子序列SEQ ID NO.3、phaJ210启动子序列SEQ ID NO.8、phaJ183启动子序列SEQ ID NO.9和phaJ225启动子序列SEQ ID NO.10中的一种。3.根据权利要求1或2的重组富养罗尔斯通氏菌，其特征在于，所述重组富养罗尔斯通氏菌基因组中的原始phaC基因失活；phaC突变基因通过同源重组被引入至基因组或通过含有其的稳定质粒被引入而在重组富养罗尔斯通氏菌中稳定表达。4.根据权利要求3的重组富养罗尔斯通氏菌，其特征在于，所述引入的phaC突变基因序列如SEQ ID NO.5所示。5.根据权利要求1或2的重组富养罗尔斯通氏菌，其特征在于，所述重组富养罗尔斯通氏菌的基因组中引入了上调phaJ基因的启动子，所述上调phaJ基因的启动子序列是phaJ43启动子序列SEQ ID NO.3；并且敲除了原基因组phaC和原基因组proC基因，具体地所述原基因组phaC基因序列如SEQ ID NO.1所示，且具体地所述原基因组proC基因序列如SEQ ID NO.2所示；所述重组富养罗尔斯通氏菌中还引入了在富养罗尔斯通氏菌中稳定存在的质粒，所述质粒上装载有引入的phaC突变基因和引入的proC基因，其中所述引入的phaC突变基因序列如SEQ ID NO.5所示，并且所述引入的proC基因序列如SEQ ID NO.4所示。6.根据权利要求5的重组富养罗尔斯通氏菌，其特征在于，所述重组富养罗尔斯通氏菌为菌株BPS
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050，保藏编号为CGMCC N...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹进，王禺，张桦宇，李英滋，
申请(专利权)人：深圳蓝晶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：