一种提高生物靛蓝产量的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高生物靛蓝产量的方法，属于代谢工程领域，以导有细胞色素加氧酶的宿主大肠杆菌为出发菌株，以变构酶基因组为模板，以载体PET作为表达载体，获得重组质粒，将重组质粒导入出发菌株中，获得大肠杆菌基因工程菌sHG

【技术实现步骤摘要】
一种提高生物靛蓝产量的方法


[0001]本专利技术涉及一种提高生物靛蓝产量的方法，属于代谢工程


技术介绍

[0002]靛蓝，是天然染料之一，来源于植物。最早，靛蓝主要从蓼蓝植物中提取加工制得，但是植物种植耕地占用量大，培养周期长，也受天气影响较大。随着工业的发展，现在靛蓝常常以苯胺为原料，通过化学合成的方式制备，但是原料的毒性大，反应需要用到强酸、强碱，且反应温度高，对环境及人体的危害性很大。为此，研究者另辟蹊径，以生物合成的方式生产靛蓝，虽然采用无毒无害的微生物，但是现有生物合成的靛蓝，产量、纯度很低，主要因为在生物合成过程的中间产物吲哚酚的限速酶活性较低，导致吲哚酚的转化率较低，中国专利技术专利CN202110656252.X公开了一种高产靛蓝的工程菌制备靛蓝及其染布的方法，报道了生物合成靛蓝的产量仅达到346.29mg/L，靛蓝产量较低，不能使靛蓝的生物合成实现产业化。为了解决上述存在的问题，本专利技术提供了一种提高吲哚酚的转化效率而提高生物靛蓝产量的方法。

技术实现思路

[0003]针对上述现有技术存在的问题，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高生物靛蓝产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、构建大肠杆菌基因工程菌sHG
‑
01S1.1、通过转化法将细胞色素加氧酶导入宿主大肠杆菌中，获得出发宿主菌株sHG
‑
00；S1.2、以变构酶基因组为模板，在变构酶基因的上下游各选取20bp碱基作为正向引物和反向引物，通过聚合酶链式反应，获得变构酶基因片段P1；S1.3、以载体PET作为表达载体，将上述S1.2中的变构酶基因片段P1连接到载体PET的多克隆位点，获得重组质粒，标记为pHG
‑
01；S1.4、将上述S1.3中的重组质粒pHG
‑
01转入上述S1.1的出发宿主菌株sHG
‑
00中，获得带有变构酶基因片段的大肠杆菌基因工程菌，标记为sHG
‑
01；S2、工程菌sHG
‑
01的种子培养液S2.1、将上述S1.4中大肠杆菌基因工程菌sHG
‑
01加入到甘油中，使大肠杆菌基因工程菌sHG
‑
01的浓度为15~40%，于
‑
80℃进行保藏；S2.2、取上述S2.1中保藏有大肠杆菌基因工程菌sHG
‑
01的甘油经摇瓶活化，后接种于5ml LB固体培养基中，使工程菌sHG
‑
01接种量为1%，于30℃、2250rpm 摇床中过夜培养12
‑
18 小时，获得工程菌sHG
‑
01的种子培养液；所述 LB固体培养基的配方为：每升培养基中，加入胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，琼脂20g，其余为水，pH5.5~6.5;S3、扩大培养取上述S2.2中的工程菌sHG
‑
01的种子培养液1ml，加入到250ml的LB液体培养基中，于30℃、2250rpm 摇床中进行扩大培养，获得发酵培养液；所述 LB液体培养基的配方为：每升培养基中，加入胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，其余为水，pH5.5~6.5；S4、诱导表达S4.1取上述S3中的发酵培养液，用分光光度计在600nm波长下进行检测O...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙磊，丁叶，李亚，许旭，
申请(专利权)人：南京合谷生命生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：