一种微环境酶靶向联合抗体Fab细胞靶向载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种微环境酶靶向联合抗体Fab细胞靶向载体及其制备方法和应用，所述靶向载体为核

【技术实现步骤摘要】
一种微环境酶靶向联合抗体Fab细胞靶向载体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医学工程领域，具体涉及一种微环境酶靶向联合抗体Fab细胞靶向载体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]胎盘粘连是指由于胎盘的部分或全部蜕膜基底层缺失，部分乃至整个胎盘绒毛组织异常侵入子宫肌层的病理状态。严重者胎盘侵及子宫深肌层，或胎盘穿透子宫壁达子宫浆膜层甚至侵入相邻器官。该类疾病临床风险极高，围产期常造成难以控制的出血，常导致子宫肝切除，进而危及母儿生命安全。目前研究显示，前次剖宫产史、多次人流史、高龄等是导致孕妇胎盘植入发生的独立危险因素。随着2014年我国全面放开二胎生育政策，近年放开三胎政策，生育多胎的人数增加，剖宫产后瘢痕子宫再次妊娠问题显得日益突出，胎盘粘连及其相关疾病已经成为重大公共卫生问题。
[0003]虽然目前可以通过一定的影像学手段对胎盘粘连进行一定程度的预判，但是，临床上仍然没有针对该病机制，实现胎盘粘连治疗的可靠手段。但是，由于缺乏特异性的药物，即使提前诊断，也无法实现怀孕期间对该病的有效治疗。从病理机制上，胎盘粘连是表现为部分或全部蜕膜基底层缺失，部分乃至整个胎盘绒毛组织异常侵入子宫肌层的病理状态。这种异常侵入的状态，引起了胎盘在子宫壁的粘连。所以，该病发生发展的根源在于胎盘滋养细胞侵袭和EMT功能的过度激活，进而产生胎盘功能的失调。必须根据这一机制，进行胎盘功能调控，才有望改善这一临床重大问题。
[0004]胎盘滋养细胞(trophoblastcell，TB)功能失调是包括胎盘粘连在内的众多孕妇重大疾病发病的根源。例如，TB的EMT功能和促血管生成功能过度激活，就是引发胎盘粘连的重要原因。已有诸多报道认为，包括滋养细胞在内的多种细胞，其EMT和侵袭转移功能与NF
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κB通路的功能密切相关【Commun Biol.2020 Aug 28；3(1):475】。本团队前期研究中已经证实，黄芩苷是一种可以在细胞中实现确切抑制NF
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κB通路的化合物【Biochem Biophys Res Commun.2015 Mar 13；458(3):707
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713.Acta Pharmacol Sin.2021 Jan；42(1):88
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96.】，可以利用该药物进行对NF
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κB通路的抑制，进而实现对胎盘粘连时过度激活的滋养细胞EMT功能和侵袭能力的抑制【Placenta.2010 Nov；31(11):997
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1002.d】。IGFBP2(Insulin
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like growth factor binding protein 2)是一种NF
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κB通路【Dig Liver Dis.2020 May；52(5):573
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581.】和PD
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1/PD
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L1相关免疫调控通路【Cancer Lett.2020 May 1；477:19
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30】的有效激活基因，其高表达可以促进与侵袭转移，并调控EGFR
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STAT3相关的免疫耐受。利用siRNA技术对滋养细胞的IGFBP2表达进行抑制，就可以实现NF
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κB通路的活性调控。我们前期研究已经发现，黄芩苷和可以抑制IGFBP2表达的siRNA在TB细胞中联合应用，可以产生对NF
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κB通路的协同抑制效果，进而抑制EMT功能。所以，我们期望能够实现如上NF
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κB通路调控功能相关的药物，对胎盘粘连疾病中，体内滋养细胞的有效递送和功能调控。
[0005]然而，目前缺乏能够确切将药物递送进入胎盘中的TB，对其进行功能调控，进而实现相关疾病治疗的药物载体手段。开发TB功能调控药物存在母体和胎儿两方面的病理生理学障碍。孕妇的药物使用和新药开发需要考虑对药物在母体和胎儿本身两方面的分布，以及产生两方面的毒性问题。绝大多数的药物可以通过胎盘，分布进入胎儿侧，影响胎儿发育。所以，包括急救药品在内的孕妇用药均存在极多的禁忌。孕妇用药按照致畸性质分为5类，除极少数毒性最小的药物归入a、b类外，其余多数c、d、e类药物对胎儿具有明显损害。孕妇怀孕期间体内代谢负担重，免疫变化复杂。所以，即使药物在非怀孕期间没有明显的毒性，其也有可能对孕妇产生明显的副作用。因此，目前在体外实验中可能对TB有效的药物，无法在保证母体和胎儿安全的条件下，实现调控TB功能。
[0006]既往体外实验研究筛选的可能具有TB功能调控作用的小分子药物或基因治疗药物，通过注射或口服，进入孕妇循环后，首先药物会在胎盘外的孕妇全身细胞起效，产生副作用；同时药物进入胎盘后，由于向胎儿侧的血供丰富，导致药物迅速穿过胎盘屏障，对胎儿造成损害。所以，这些药物均无法实现临床应用。因此目前临床上，对前述胎盘粘连等疾病，仍然没有确切的药物干预手段。医生只能针对胎盘功能失调疾病引发的症状，进行被动的对症治疗。而不能通过TB功能调节，实现真正的胎盘功能恢复。因此，如何避免对母体和胎儿的毒性，实现TB功能调控药物的有效递送，是解决TB功能失调所致疾病的关键。
[0007]目前的高分子纳米载体药物，在多种疾病中可能实现对病变目的细胞的特异性药物递送。由于这些载体无法解决可能对母体和胎儿非特异性分布造成毒副作用的问题，所以TB特异性递送载体开发存在很大的困难。目前研究者尝试过的可能促进TB特异性纳米药物递送的手段有2种，一种是通过加大纳米药物粒径，使其不能通过胎膜屏障，滞留于胎盘产生药物递送效果；另一种是针对TB细胞膜标志物，进行抗体修饰纳米载体的特异性递送。
[0008]加大纳米药物粒径，促进胎盘内药物分布的原理在于，实验研究发现，＜300nm的纳米药物无法滞留于胎盘，容易通过胎盘进入胎儿。所以研究者尝试合成粒径＞300nm的纳米药物，使其滞留于胎盘，产生对胎盘TB在内的多种细胞的功能调控。但是，过大的药物粒径(＞100nm)不利于药物的体内分布。此类＞300nm的纳米药物在母体循环中多数被网状内皮系统捕获，在全身各处产生副作用，能够到达胎盘中，实现TB特异性分布的比例也较低。所以，需要采用其他方式实现纳米药物在胎盘中的滞留和对TB细胞的靶向。
[0009]纳米药物可采用纳米药物链接抗体，靶向识别目的细胞的细胞膜标志，实现对目的细胞的特异性递送。TB具有一些确定的，区别于胎盘组织中与其他胎盘基质细胞的表面标志(如白细胞分化抗原19，Cluster of Differentiation 19，简称CD19)，可供与胎盘中其他细胞进行区别。但是，全身多器官组织表达量分析发现，这种表面标志在胎盘外其他部位的部分细胞也有表达。在少量高表达细胞表面的表达丰度，与TB差异不显著。如果在纳米药物载体表面连接CD19的抗体，直接体内应用，将造成对体内其他表达标志物CD19的细胞的副作用。因此，只有在血液循环中进入胎盘前，屏蔽纳米载体的TB细胞识别抗体，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种微环境酶靶向联合抗体Fab细胞靶向载体，其特征在于，所述靶向载体为核
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壳双层结构，以在接触胎盘组织间液高表达的酶的作用下靶向崩解的酶底物多肽
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PEG修饰的脂质双分子膜作为外壳，以胎盘滋养细胞表面特异性高表达的标志物抗体修饰的药物载体作为内核，所述胎盘组织间液高表达的酶为酪氨酸激酶SYK、溶菌酶、激肽酶、组胺酶、催产素酶或基质金属蛋白酶中的一种或几种；所述药物载体为聚乙二醇修饰的聚阳离子载体与疏水性可降解聚酯形成的共聚物；所述胎盘滋养细胞表面特异性高表达的标志物抗体为CD19抗体的Fab段；所述药物载体中负载超顺磁性四氧化三铁SPIO纳米粒子、调控胎盘滋养细胞功能的小分子药物、治疗基因或其组合。2.根据权利要求1所述的微环境酶靶向联合抗体Fab细胞靶向载体，其特征在于，所述胎盘组织间液高表达的酶为酪氨酸激酶SYK。3.根据权利要求1所述的微环境酶靶向联合抗体Fab细胞靶向载体，其特征在于，所述共聚物为聚乙二醇
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聚乙烯亚胺
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聚己内酯PEG
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PEI
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PCL、聚乙二醇
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聚乙烯亚胺
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聚乳酸PEG
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PEI
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PLA或聚乙二醇
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聚乙烯亚胺
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聚乳酸
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羟基乙酸PEG
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PEI
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PLGA中的一种或几种，优选聚乙二醇
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聚乙烯亚胺
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聚己内酯PEG
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【专利技术属性】
技术研发人员：郭宇，吴志强，曹众，姚清河，赵子洲，王伟伟，郭若汨，李庆玲，
申请(专利权)人：中山大学南昌研究院，
类型：发明
国别省市：