吉西他滨或其盐的脂质体及其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供吉西他滨或其盐的脂质体及其制备方法和用途，具体地，本发明专利技术提供一种脂质体，其含有脂质体膜和包封在脂质体膜内部的内水相；其中，所述内水相中含有吉西他滨或其盐以及金属离子；构成所述脂质体膜的成分包括磷脂、胆固醇和任选的功能性长循环材料；所述磷脂为中性磷脂或中性磷脂与负电荷磷脂的组合；所述磷脂和胆固醇的重量比为(1～125)：(0.1～25)，所述磷脂与长循环材料(如果有)的重量比为(1～125):(0.1～25)；并且，所述吉西他滨或其盐与金属离子的摩尔比为(0.25～20):1。所述脂质体具有稳定好、包封率高、能延长吉西他滨体内循环时间、增强肿瘤靶向性、提高疗效、降低其毒副作用的特点。其毒副作用的特点。其毒副作用的特点。

【技术实现步骤摘要】
吉西他滨或其盐的脂质体及其制备方法和用途


[0001]本专利技术涉及药物制剂领域，具体涉及吉西他滨或其盐的脂质体及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]吉西他滨是一种嘧啶类核酸类似物，主要作用于DNA合成期，属于抗代谢类抗癌药。其给药后在细胞内被脱氧胞苷酶磷酸化成双氟脱氧胞苷一磷酸(dFdCMP)，然后经核苷激酶被代谢为具有活性的二磷酸(dFdCDP)及三磷酸核苷(dFdCTP)。吉西他滨主要通过活性的dFdCTP嵌入DNA链中来抑制DNA合成；同时dFdCDP可抑制核糖核苷酸还原酶的活性，使合成DNA所必需的脱氧核糖核苷酸(dCTP)的生成受到抑制。此外，dFdCTP还可干扰DNA的自我修复机制，最终导致肿瘤细胞死亡。吉西他滨单药或联合其他药物为多种实体瘤(包括胰腺癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌等)化疗一线方案，抗癌谱广，临床应用广泛。
[0003]吉西他滨分子结构简单、亲水性强，在肝脏、肾脏、血液和其他组织中被胞苷脱氨酶快速代谢，半衰期短(42-97min，与年龄和性别相关)，因此普通注射剂在临床上需要使用大剂量(推荐使用剂量1000mg/m2)以及延长其输注时间(大于30min以上)来维持其血药浓度达到杀死肿瘤细胞作用，由于靶向性差，常导致严重的毒副作用，包括血液毒性(贫血、中性粒细胞减少和血小板减少)、脱发、胃肠道毒性(如恶心、呕吐)、疲劳、发热等。其中，血液毒性为其剂量限制性毒性。吉西他滨单次给药后即产生骨髓抑制作用，活性代谢产物会破坏骨髓细胞的增殖分化，使造血细胞减少，继而导致血小板和中性粒细胞的数量减少，限制临床用药。目前吉西他滨上市剂型仅有普通注射剂，包括粉针剂、水针剂和输液剂。
[0004]脂质体作为药物载体具有安全无毒、生物相容性好的优点，药物经脂质体包裹后，可以避免外界因素(pH、光、酶)破坏，提高药物的稳定性；进入体内后，可以避免血液中相关酶、蛋白等对药物的破坏，同时延长其血液循环时间。相对于正常组织，肿瘤组织血管间隙大、结构不完整，具有纳米尺寸的脂质体可以通过EPR效应被动靶向至肿瘤部位，直接释放药物杀伤肿瘤细胞，从而达到提高疗效、减少毒副作用的目的。
[0005]有文献报道，将吉西他滨制成脂质体后可以避免吉西他滨分子被快速代谢、延长其作用时间。但所用制备方法对吉西他滨脂质体包封率低、不稳定、在体内易泄露、释放快、工艺复杂、难以满足临床需求。CN102846547 B利用大豆磷脂、胆固醇、聚氧乙烯蓖麻油酸酯制备吉西他滨脂质体，包封和粒径有所改善，但其所采用辅料聚氧乙烯蓖麻油酸酯易引起急性超敏反应、外周神经毒性和细胞毒性等不良反应，注射安全风险大，安全性有待提高。CN 102716089 B利用盐酸吉西他滨、胆固醇、蛋黄磷脂酰肌醇、卵磷脂、吐温80、海藻糖和聚乙烯吡咯烷酮冻干制成盐酸吉西他滨脂质体注射剂，而吐温80的引入同样会带来体内注射的安全性风险。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供了一种具有高包封率、高稳定性的吉西他滨脂质体及其制
备方法。该脂质体能显著延长吉西他滨血液半衰期，改善组织分布，提高肿瘤靶向性，提高疗效、降低毒副作用。同时该脂质体组成成分安全，制备工艺简单，易于工业化生产和临床转化。
[0007]在第一个方面，本专利技术提供一种脂质体，其含有脂质体膜和包封在脂质体膜内部的内水相；
[0008]其中，所述内水相中含有吉西他滨或其盐以及金属离子；构成所述脂质体膜的成分包括磷脂、胆固醇和任选的功能性长循环材料；所述磷脂为中性磷脂或中性磷脂与负电荷磷脂的组合；
[0009]所述磷脂和胆固醇的重量比为(1～125):(0.1～25)，优选为(1～100):(0.1～20)，更优选为(2～80):(0.1～15)，例如(2～10)：1，再例如(4～8)：1；
[0010]所述磷脂与长循环材料(如果有)的重量比为(1～125):(0.1～25)；例如(1～20)：1，再例如(2～15)：1；
[0011]并且，所述吉西他滨或其盐与金属离子的摩尔比为(0.25～20):1。
[0012]上述各比例是指所述成分在制得的脂质体中的比例。受药物利用率的影响，该比例与制备中的投料比例可能会有所不同。
[0013]本专利技术所述药物利用率是指制备所得脂质体中药物量与制备时所投入药物的量的比值。其中脂质体中药物量采用《中国药典》规定的吉西他滨含量测定方法，利用高效液相色谱测定。
[0014]在本专利技术的实施方案中，所述吉西他滨的盐为吉西他滨的盐酸盐。
[0015]在另一个方面，本专利技术提供一种脂质体，其通过制备方法1或制备方法2制备得到：
[0016]制备方法1
[0017](1)制备空白脂质体：将磷脂和胆固醇的溶液作为油相，将含有金属离子的溶液作为水相，通过薄膜水化法、有机溶剂注入法、管线乳化法、乳化法或逆向蒸发法制备初乳，整粒，任选地，进行透析、离心、超滤或浓缩中的一种或多种处理，得到空白脂质体；
[0018](2)载药：将吉西他滨或其盐的溶液加入步骤(1)制备得到的空白脂质体，任选地，所述吉西他滨或其盐的溶液中含有步骤(1)水相中所述金属离子，在磷脂相转变温度以上加热孵育即得载药脂质体；
[0019](3)去除游离药物：对步骤(2)制得的载药脂质体进行透析、离心和超滤的一种或多种处理以除去游离药物以及任选的浓缩处理，即得所述脂质体；
[0020]其中，在步骤(1)油相中加入任选的功能性长循环材料，或者在步骤(2)加入任选的功能性长循环材料，以制备含功能性长循环材料的脂质体；
[0021]制备方法2
[0022](1)配制油相：将磷脂和胆固醇溶于有机溶剂，制得油相；
[0023](2)配制水相：将吉西他滨或其盐溶于含金属离子的溶液中，制得水相；
[0024](3)制备载药脂质体：将步骤(1)的油相以及步骤(2)的水相采用薄膜水化、有机溶剂注入、管线乳化法或逆向蒸发法制备脂质体，或者直接将(2)与前体脂质体(如商业化的Presome)混合，整粒，制得载药脂质体；
[0025](4)去除游离药物：对步骤(3)制得的载药脂质体进行透析、离心和超滤的一种或多种处理以除去游离药物以及任选的浓缩处理，即得所述脂质体；
[0026]其中，在步骤(1)配制油相时加入功能性长循环材料，或者在步骤(3)整粒后加入功能性长循环材料，以制备含功能性长循环材料的脂质体。
[0027]在另一个方面，本专利技术提供一种脂质体制剂，其含有本文所述的脂质体，以及一种或多种药用辅料。
[0028]在另一个方面，本专利技术提供本文所述的脂质体在制备治疗抗肿瘤药物中的用途。
[0029]在另一个方面，本专利技术提供一种抗肿瘤方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的本文所述的脂质体或脂质体制剂。
[0030]在另一个方面，本专利技术提供本文所述脂质体的制备方法，其选自制备方法1和制备方法2：
[0031]制备方法1
[0032](1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.脂质体，其含有脂质体膜和包封在脂质体膜内部的内水相；其中，所述内水相中含有吉西他滨或其盐以及金属离子；构成所述脂质体膜的成分包括磷脂、胆固醇和任选的功能性长循环材料；所述磷脂为中性磷脂或中性磷脂与负电荷磷脂的组合；所述磷脂和胆固醇的重量比为(1～125):(0.1～25)，优选为(1～100):(0.1～20)，更优选为(2～80):(0.1～15)，例如(2～10)：1，再例如(4～8)：1；所述磷脂与长循环材料(如果有)的重量比为(1～125):(0.1～25)；例如(1～20)：1，例如(2～15)：1；并且，所述吉西他滨或其盐与金属离子的摩尔比为(0.25～20):1。2.权利要求1的脂质体，其中，所述中性磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺或二者的组合；优选地，所述中性磷脂为大豆磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱或其任意组合。3.权利要求1或2的脂质体，其中，所述负电荷磷脂选自磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)和心磷脂中的一种或多种；优选地，所述负电荷磷脂选自二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油或二者的组合。4.权利要求1-3任一项的脂质体，其中，构成所述脂质体膜的成分包括中性磷脂、胆固醇和任选的功能性长循环材料；优选地，构成所述脂质体膜的成分包括中性磷脂和胆固醇；进一步优选地，所述中性磷脂选自大豆磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂酰胆碱及其组合；优选地，构成所述脂质体膜的成分包括中性磷脂、胆固醇和功能性长循环材料；进一步优选地，所述中性磷脂选自大豆磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱及其任意组合；进一步优选地，所述中性磷脂选自氢化大豆磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱及其任意组合。5.权利要求1-3任一项的脂质体，其中，构成所述脂质体膜的成分包括中性磷脂、负电荷磷脂、胆固醇和任选的功能性长循环材料；优选地，构成所述脂质体膜的成分包括中性磷脂、负电荷磷脂和胆固醇；进一步优选地，所述中性磷脂选自大豆磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱及其任意组合；进一步优选地，所述负电荷磷脂为二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油及其组合；优选地，构成所述脂质体膜的成分包括中性磷脂、负电荷磷脂、胆固醇和功能性长循环材料；进一步优选地，所述中性磷脂选自大豆磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱及其任意组合；进一步优选地，所述负电荷磷脂选自二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油及其组合。6.权利要求1-5任一项的脂质体，其中，所述功能性长循环材料为聚乙二醇(PEG)、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)、聚乙二醇-胆固醇(PEG-Chol)、聚乙二醇修饰的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(MPEG-DSPE)、聚乙二醇修饰的二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(MPEG-DMPE)、聚乙二醇修饰的二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(MPEG-DPPE)的一种或几种，其中聚乙二醇的分子量
为500道尔顿～10,000道尔顿，优选2000道尔顿；优选地，所述功能性长循环材料为MPEG2000-DSPE。7.权利要求1-6任一项的脂质体，其中，所述金属离子选自钙离子、镁离子以及过渡金属离子；优选地，所述金属离子选自铜离子、锰离子、镍离子、铁离子、钼离子、钴离子、钙离子和锌离子的一种或多种；优选地，所述金属离子选自铜离子、钴离子和钙离子的一种或多种；优选地，吉西他滨或其盐与所述金属离子的摩尔比为(0.5～10)：1。8.权利要求1-7任一项的脂质体，其中，所述内水相中含有酸根离子，例如无机酸根离子或有机酸根离子；优选地，所述酸根离子选自硫酸根、卤素离子、葡萄糖酸根离子、硝酸根离子、醋酸根离子中的一种或多种；优选地，所述酸根离子选自葡萄糖酸根、醋酸根、硝酸根和硫酸根中的一种或多种。9.权利要求1-8任一项的脂质体，其中，所述内水相中还含有调节pH的成分，例如盐酸、醋酸、三乙醇胺、氢氧化钠或精氨酸；优选地，所述内水相pH为2-8，优选为3-7.5，更优选4～7.5，例如4.0，4.5，4.8，5.0，5.2，5.5，5.8，6.0，6.1，6.2，6.5，6.8，6.9，7.0，7.3，7.4，7.5，7.8，7.9或8.0。10.脂质体，其通过制备方法1或制备方法2制备得到：制备方法1(1)制备空白脂质体：将磷脂和胆固醇的溶液作为油相，将含有金属离子的溶液作为水相，通过薄膜水化法、有机溶剂注入法、管线乳化法、乳化法或逆向蒸发法制备初乳，整粒，任选地，进行透析、离心、超滤或浓缩中的一种或多种处理，得到空白脂质体；(2)载药：将吉西他滨或其盐的溶液加入步骤(1)制备得到的空白脂质体，任选地，所述吉西他滨或其盐的溶液中含有步骤(1)水相中所述金属离子，在磷脂相转变温度以上加热孵育即得载药脂质体；(3)去除游离药物：对步骤(2)制得的载药脂质体进行透析、离心和超滤的一种或多种处理以除去游离药物以及任选的浓缩处理，即得所述脂质体；其中，在步骤(1)油相中加入任选的功能性长循环材料，或者在步骤(2)加入任选的功能性长循环材料，以制备含功能性长循环材料的脂质体；制备方法2(1)配制油相：将磷脂和胆固醇溶于有机溶剂，制得油相；(2)配制水相：将吉西他滨或其盐溶于含金属离子的溶液中，制得水相；(3)制备载药脂质体：将步骤(1)的油相以及步骤(2)的水相采用薄膜水化、有机溶剂注入、管线乳化法或逆向蒸发法制备脂质体，或者直接将(2)与前体脂质体(如商业化的Presome)混合，整粒，制得载药脂质体；(4)去除游离药物：对步骤(3)制得的载药脂质体进行透析、离心和超滤的一种或多种处理以除去游离药物以及任选的浓缩处理，即得所述脂质体；其中，在步骤(1)配制油相时加入功能性长循环材料，或者在步骤(3)整粒后加入功能性长循环材料，以制备含功能性长循环材料的脂质体。11.权利要求10的脂质体，其制备方法包括下述特征中的一项或多项：1)在制备方法1步骤(1)中，将磷脂和胆固醇溶于选自醇类(例如甲醇、乙醇或异丙醇)、
卤代烃类(例如二氯甲烷或三氯甲烷)、水及其任意组合的溶剂作为油相；2)在制备方法1步骤(2)中，所述吉西他滨或其盐的溶液为吉西他滨或其盐的水溶液或步骤(1)中所述含金属离子的溶液；3)在制备方法1步骤(2)中，在50-70℃(例如60-70℃，再例如60-65℃)进行所述孵育；4)在制备方法2步骤(1)中，所述有机溶剂选自醇类溶剂(例如甲醇、乙醇或异丙醇)、卤代烃类溶剂(例如二氯甲烷或三氯甲烷)及其与水的混合溶剂；5)在制备方法1或制备方法2中，所述磷脂和胆固醇的重量比为(1～125):(0.1～25)，优选为(1～100):(0.1～20)，更优选为(2～80):(0.1～15)，例如(2～10)：1，再例如(4～8)：1；6)在制备方法1步骤(2)中，所述吉西他滨或其盐和磷脂的重量比为1：(0.01～100)，优选为1：(0.02～80)，更优选为1：(0.05～50)，例如1：(0.5～5)，再例如1：(0.5～2)；7)在制备方法1或制备方法2中，所述磷脂为中性磷脂；优选地，所述中性磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺或二者的组合；优选地，所述中性磷脂为大豆磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱或其任意组合；8)在制备方法1或制备方法2中，所述磷脂为中性磷脂和负电荷磷脂的组合；优选地，所述中性磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺或二者的组合；优选地，所述中性磷脂为大豆磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱或其任意组合；优选地，所述负电荷磷脂选自磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)和心磷脂中的一种或多种；优选地，所述负电荷磷脂选自二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油或二者的组合；优选地，中性磷脂和负电荷磷脂之间的重量比为(0.1～20):1；进一步优选为(0.5～15):1，更优选为(1～10)：1；9)在制备方法1或制备方法2中，所述金属离子选自钙离子、镁离子以及过渡金属离子；优选地，所述金属离子选自铜离子、锰离子、镍离子、铁离子、钼离子、钴离子、钙离子和锌离子的一种或多种；优选地，所述金属离子选自铜离子、钴离子和钙离子的一种或多种；优选地，所述吉西他滨或其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张瑞霞，郝斐，刘厦，苏正兴，李明，赵栋，王晶翼，
申请(专利权)人：四川科伦药物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：