包裹腺苷的脂质体制造技术

本文提供了一种包裹腺苷的脂质体。脂质体可以由鞘磷脂或鞘磷脂与1,2

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包裹腺苷的脂质体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年4月3日提交的美国临时专利申请第62/828,916号的优先权，其公开内容纳入本文。

技术介绍

[0003]骨关节炎(OA)是一种以软骨流失为特征的疾病，也是最常见的关节炎类型，影响到全世界1.51亿人，包括美国和其他工业化国家近10％的人口。年龄、先前的创伤、肥胖和遗传是造成这种退行性关节疾病的风险因素之一。OA的发病率随着年龄的增长而增加，由此产生的疼痛、关节功能和活动能力的丧失、社会孤立和生活质量的大幅降低使得OA成为一种具有高度医学和社会影响的疾病。OA可以影响任何关节，但是最常见的是影响膝、髋和手。OA在膝关节的发病率最高，无论女性(47％)还是男性(40％)都是如此。目前的治疗方案不尽如人意，不能解决根本问题。治疗大多是姑息性的，包括使用非甾体抗炎药(如布洛芬)、麻醉性镇痛药、运动和针灸。FDA也已经批准了一些OA的具体治疗方法，包括皮质类固醇(抗炎剂)和透明质酸(润滑、止痛)，所有这些都是通过关节内(IA)注射来进行的。虽然这些可注射药剂能缓解症状，但是没有一个具有恢复性。
[0004]嘌呤系统在维持软骨平衡方面起到关键作用。腺苷作用于其A2A受体(A2AR)，是维持软骨细胞和软骨平衡的重要自分泌稳态因子。腺苷是一种内源性生理调节剂，其细胞内和细胞外的浓度受氧消耗、细胞压力和线粒体功能的严格控制。细胞外的腺苷主要来自ATP的水解(主要但不完全通过胞外酶CD39和CD73)，并且通过激活G蛋白偶联受体(A1R、A2AR、A2BR和A3R)来介导其作用。这些腺苷受体在进化上是高度保守的，它们的表达和功能也趋于保守。腺苷长期以来一直被认为可以调节炎症和免疫反应，以往的研究已经证明了腺苷及其受体在成骨细胞、破骨细胞和骨髓稳态中的重要性。先前的研究表明，腺苷受体也能调节软骨细胞的生理和病理，以应对啮齿动物、马、牛和人类软骨细胞的炎症刺激，但是涉及的具体受体尚未确定。尽管马的嘌呤代谢与其他物种不同，但是内源性腺苷的除去(通过添加腺苷脱氨酶)或A2AR的阻断会导致马软骨外植体的软骨退化，因为存在于大多数物种的淋巴细胞、血浆和细胞外液中的腺苷脱氨酶不存在于马的淋巴细胞或血清中。据报道，在化学诱导的OA模型中，A3R的刺激能减少OA的进展，这主要是因为A3R激动剂的抗炎作用。但是，腺苷的半衰期仅有几秒钟。

技术实现思路

[0005]本公开提供了一种可注射制剂。本文还公开了制造和使用该可注射制剂的方法。可注射制剂包含脂质体和生理盐水，其中，脂质体为亚稳态并包裹腺苷。
[0006]附图简要说明
[0007]为了更全面地了解本公开的性质和目的，参考以下与附图相关联的详细描述。
[0008]图1所示为由RgnA09形成的脂质体的腺苷保留。
[0009]图2所示为由RgnA09形成的脂质体悬浮液的显微镜图像。
[0010]图3所示为由RgnA09形成的脂质体的近似直径的直方图。
[0011]图4所示为由RgnA10形成的脂质体的腺苷保留。
[0012]图5所示为由RgnA10形成的脂质体悬浮液的显微镜图像。
[0013]图6所示为由RgnA10形成的脂质体的近似直径的直方图。
[0014]图7所示为预脂质体冻干物。
[0015]图8所示为现有技术的脂质体悬浮液的显微镜图像。脂质体悬浮液含有明显的结晶化腺苷的迹象，并且据信球形物是油。
[0016]图9所示为使用双足平衡测试(incapacitance test)记录的疼痛数据。
[0017]图10所示为实施例1中分离出的材料的HPLC色谱。
[0018]图11所示为图10中分离出的材料的UV光谱。
[0019]图12所示为RgnA09和RgnA10的初始突释。
[0020]图13所示为(左)RgnA09
‑
MLV和(右)RgnA10
‑
MLV在24小时内的腺苷释放动力学。
[0021]图14所示为60天时(六次注射后)使用(左)RgnA09和(右)RgnA10的旋转杆疼痛测试。
[0022]图15所示为(A)RgnA09和(B)RgnA10在不同浓度下的6次注射对关节炎症的影响。施用方式为同侧
‑
对侧。统计学：单向(Brown
‑
Forsythe和Welch)ANOVA。*P<0.05v/s载剂，P<0.05v/s生理盐水，+P<0.05v/s 0.3mg和1mg。
[0023]图16所示为用载剂或3剂量的脂质体腺苷治疗后受影响的大鼠胫骨的代表性番红精
‑
O染色切片。在载剂治疗的动物中，软骨蛋白多糖和软骨表面不规则性明显减少。在RgnA09治疗的大鼠中，软骨蛋白多糖有剂量依赖性的改善并且软骨磨损消失，伴有表面软骨增加。在RgnA10处理的大鼠中，在那些用最高剂量(3mg/ml)处理的大鼠中效果最强，虽然在较低剂量下也观察到软骨的保护。
具体实施方式
[0024]尽管将以特定实施方式来描述所要求保护的实质内容，但是包括不全部提供本文所阐述的优点和特征的实施方式在内的其他实施方式也在本公开的范围内。在不偏离本公开范围的情况下，可以对各种结构、逻辑和工艺步骤进行改变。
[0025]除非另有说明，否则本文提供的所有范围包括落在该范围内的所有数值，直至小数点后第十位。
[0026]本公开提供了一种可注射制剂。本文还公开了制造和使用该可注射制剂的方法。
[0027]在一个方面中，本公开提供一种可注射制剂，其包含脂质体和生理盐水，其中，脂质体包裹腺苷。
[0028]脂质体可以包含i)鞘磷脂或ii)鞘磷脂与1,2
‑
二肉豆蔻酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸胆碱(DMPC)或iii)鞘磷脂与1,2
‑
二肉豆蔻酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸甘油(DMPG)的组合或iv)鞘磷脂、DMPG与DMPC的组合。在多个示例中，脂质体包含70
‑
100质量％的鞘磷脂。包含小于100质量％的鞘磷脂的脂质体可以进一步包含最多达30质量％(如其余部分)的DMPC或DMPG或DMPC与DMPG的组合。在一个实施方式中，脂质体可以包含70
‑
99.9质量％的鞘磷脂和0.1
‑
30质量％(如其余部分)的DMPC或1,2
‑
二肉豆蔻酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸甘油(DMPG)或DMPC与DMPG的组合。在一个实施方式中，脂质体包含75
‑
100质量％的鞘磷脂。包含小于100质量％的鞘
磷脂的脂质体可以进一步包含最多达25质量％(如其余部分)的DMPC或DM本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种可注射制剂，其包含生理盐水和脂质体，所述脂质体包含一个或多个层状物，其中，脂质体层状物包含70
‑
100质量％的鞘磷脂，并且当鞘磷脂低于100质量％时，其余部分为1,2
‑
二肉豆蔻酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸胆碱(DMPC)或1,2
‑
二肉豆蔻酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸甘油(DMPG)或DMPC与DPMG的组合，其中，脂质体(a)直径为50nm
‑
150μm；以及(b)将腺苷包裹在脂质体的水性隔室中。2.如权利要求1所述的可注射制剂，其中，脂质体处于亚稳态。3.如权利要求1所述的可注射制剂，其中，腺苷或其一部分的释放最长达两周。4.如权利要求1所述的可注射制剂，其进一步包含赋形剂。5.如权利要求1所述的可注射制剂，其中，制剂适用于关节内注射。6.如权利要求1所述的可注射制剂，其中，腺苷浓度为0.1
‑
7mg/mL。7.如权利要求5所述的可注射制剂，其中，腺苷浓度为0.1
‑
4mg/mL。8.如权利要求1所述的可注射制剂，其中，DMPC与DMPG的比例为6：4至8：2。9.如权利要求8所述的可注射制剂，其中，DMPC与DMPG的比例为7：3。10.如权利要求1所述的可注射制剂，其中，总脂质浓度为7
‑
12mg/mL。11.如权利要求1所述的可注射制剂，其中，一个或多个脂质体的直径为50nm
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：纽约大学，
类型：发明
国别省市：