一种大体积尿液的预处理方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种大体积尿液的预处理方法及应用。本发明专利技术可以从大量尿液中进行高效低成本的DNA富集，并有效去除血尿中的血红素、尿素等影响后续分子生物学反应的抑制物，从而对富集产物直接进行检测，以达到更快速检测的目的。本发明专利技术的检测方法及其检测试剂盒可以从100mL尿液中精确检测5个拷贝的尿路上皮癌相关突变DNA分子。关突变DNA分子。关突变DNA分子。

【技术实现步骤摘要】
一种大体积尿液的预处理方法及应用


[0001]本专利技术涉及一种大体积尿液的预处理方法及应用。属于基因检测


技术介绍

[0002]尿路上皮癌是起源于尿路上皮的一种多源性的恶性肿瘤，是最常见的泌尿系统肿瘤。其中尿路上皮癌可分为非肌层浸润性尿路上皮癌和肌层浸润性尿路上皮癌。而10～15％的肌层浸润性尿路上皮癌患者在确诊时已出现转移。西方国家的尿路上皮癌发病率位列第4，仅次于前列腺癌、肺癌、结直肠癌。从发生部位来看，包括发生于上尿路的肾盂癌和输尿管癌以及下尿路的膀胱癌和尿道癌。其中上尿路上皮癌较少，在临床上只占尿路上皮癌的5～10％，与膀胱癌不同的是上尿路上皮癌约60％是浸润性肿瘤，预后不佳。膀胱全切或肾输尿管全长切除术是治疗尿路上皮肿瘤的金标准，但是对高危的肿瘤的患者来讲，术后局部复发或远处转移是导致长期生存没有改善的主要原因。50％的浸润型膀胱癌患者在手术前，已经存在潜在转移灶。在中国，膀胱癌是十大常见癌种之一，因易复发、易转移、治疗手段有限，已经成为我国重要疾病负担之一，并严重威胁患者的生存时间和生活质量。尿路上皮癌(UC)是常见的一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大体积尿液的预处理方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)先利用蛋白酶K对尿液进行蛋白质消化，得到尿液Ⅰ；(2)再利用交联聚乙烯吡咯烷酮PVPP去除尿液Ⅰ中的QPCR分子生物学反应抑制剂成分，得到尿液Ⅱ；(3)再以多聚赖氨酸包被的二氧化硅颗粒对尿液Ⅱ中的游离DNA进行富集，即可得到可用于QPCR检测的尿液样本。2.根据权利要求所述的一种大体积尿液的预处理方法，其特征在于，步骤(1)中，所述尿液为新鲜血尿或收集后迅速冷冻的血尿。3.根据权利要求所述的一种大体积尿液的预处理方法，其特征在于，步骤(1)的具体方法为：先将血尿经冷冻离心机800g离心10分钟，取上清，然后向上清中加入蛋白酶K，55℃消化30分钟即可；其中，血尿与蛋白酶K的体积比为1000：1，蛋白酶K的浓度为20mg/mL。4.根据权利要求所述的一种大体积尿液的预处理方法，其特征在于，步骤(2)的具体方法为：先向尿液Ⅰ中加入交联聚乙烯吡咯烷酮PVPP，垂直混匀仪上颠倒混匀，接着经冷冻离心机1600g离心5分钟，取上清，即为尿液Ⅱ；其中，血尿与PVPP的用量比为100mL：35mg。5.根据权利要求所述的一种大体积尿液的预处理方法，其特征在于，步骤(3)中，多聚赖氨酸包被的二氧化硅颗粒，其制备方法如下：先...

【专利技术属性】
技术研发人员：王龙，徐根明，李超，王永利，姚鲲，刘建业，鞠巍，汤维，李仁君，李永祥，
申请(专利权)人：湖南大地同年生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：