一种尘肺病人早期筛查的mRNA检测引物组和探针、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种尘肺病人早期筛查的mRNA检测引物组和探针、试剂盒及应用，属于医药医学技术领域。本发明专利技术提供一种尘肺病人早期筛查的mRNA的检测引物组和探针，包括下列中的一种或多种：(1)检测KIF3A基因的mRNA表达水平的引物组和探针；(2)检测IFT88基因的mRNA表达水平的引物组和探针；(3)检测ARL13B基因的mRNA表达水平的引物组和探针。本发明专利技术可以证明初级纤毛KIF3A、IFT88和ARL13B的mRNA任意一种或多种组合可作为尘肺病检测标志物，且具有客观性、特异性和准确性的特点，同时本发明专利技术提供的检测试剂盒对于尘肺病的早期筛查具有重大意义，具有极大的经济和社会价值。具有极大的经济和社会价值。具有极大的经济和社会价值。

【技术实现步骤摘要】
一种尘肺病人早期筛查的mRNA检测引物组和探针、试剂盒及应用


[0001]本专利技术涉及医药医学
，特别是涉及一种尘肺病人早期筛查的mRNA检测引物组和探针、试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]尘肺病(矽肺)是最严重的职业病之一，也是占比最高的纤维化间质性肺疾病。近十年每年新发病例年均2万例左右，累计病例数已达90万例。平均每例患者患病后将造成的经济负担为207.5万元，由于缺乏有效地早期识别、进展监控和有效的治疗靶点，尘肺病群体生命质量下降、已经成为严重的公共卫生问题。
[0003]目前对矽肺的诊断主要依据是生产性粉尘接触史、排除其他肺部疾病和X射线结合确定分期，目前除了肺移植，没有阻断或者逆转矽肺纤维化进展的治疗方法，因此，患者尽早(0+期和I期)脱离职业环境是延缓病情进展、提高病人生活质量的重要干预措施。然而，矽肺早期(0+期和I期)肺组织表现为巨噬细胞炎症反应为主，伴随形成较小的矽结节，该阶段结节常不典型，且与肺结核、肺部感染等疾病难以鉴别，此阶段患者极难确诊。因此，亟待寻求新的临床诊断方法。
[0004]目前，血液由于采样方便且能较好反映机体病理生理过程而成为疾病标志物的最好来源，但是要寻找特异性和准确性高，能用于矽肺早期筛查的血液标志物有一定难度。广泛的组学测序可以对生理状态或者是一个细胞表型有关的基因进行系统监控。测序和芯片技术以其通量高、数据输出和获取快捷等优势，在疾病机制探索、疾病诊断标记物的筛选和治疗靶点的挖掘中发挥了重要的作用。因此，本专利技术提出一种尘肺病人早期筛查的mRNA检测引物组和探针、试剂盒及应用，以解决现有技术存在的技术问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种尘肺病人早期筛查的mRNA检测引物组和探针、试剂盒及应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术可以证明初级纤毛KIF3A、IFT88和ARL13B的mRNA任意一种或多种组合可作为尘肺病检测标志物，且具有客观性、特异性和准确性的特点。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种尘肺病人早期筛查的mRNA的检测引物组和探针，包括下列中的一种或多种：
[0008](1)检测KIF3A基因的mRNA表达水平的引物组和探针：上游引物序列为SEQIDNO：1，下游引物序列为SEQIDNO：2，探针序列为SEQIDNO：7；
[0009](2)检测IFT88基因的mRNA表达水平的引物组和探针：上游引物序列为SEQIDNO：3，下游引物序列为SEQIDNO：4，探针序列为SEQIDNO：8；
[0010](3)检测ARL13B基因的mRNA表达水平的引物组和探针：上游引物序列为SEQID
NO：5，下游引物序列为SEQ ID NO：6，探针序列为 SEQ ID NO：9。
[0011]进一步地，所述探针的5
’
端和3
’
端分别携带荧光基团FAM和淬灭基团NFQ
‑
MGB。
[0012]本专利技术还提供一种用于尘肺病人早期筛查的mRNA的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括上述的检测引物组和探针。
[0013]本专利技术还提供根据所述的检测引物组和探针在制备筛查早期尘肺病产品中的应用。
[0014]进一步地，所述产品通过测定样本中KIF3A和/或IFT88和/或ARL13B 基因的mRNA表达水平以筛查早期尘肺病。
[0015]进一步地，所述产品包括通过荧光定量PCR来检测KIF3A和/或IFT88 和/或ARL13B基因的mRNA表达水平以筛查早期尘肺病的产品。
[0016]进一步地，所述产品包括以下使用方法：
[0017]步骤1：提取待测患者血清样本中的RNA，并以正常人血清样本为对照；
[0018]步骤2：以提取的RNA为模板，合成cDNA,利用所述的检测引物组和探针进行荧光定量PCR，分别检测待测患者和正常人血清样本中KIF3A和 /或IFT88和/或ARL13B基因的cDNA含量，并将所得结果进行比对；
[0019]步骤3：根据比对结果判断待测患者是否为早期尘肺病患者。
[0020]进一步地，所述荧光定量PCR扩增条件为：95℃预变性30s，95℃变性10s，58℃退火30s，72℃延伸30s，进行45个循环。
[0021]进一步地，所述荧光定量PCR扩增体系包括：Premix Ex Taq(2
×
)10μL、上游引物0.4μL、下游引物0.4μL、探针0.4μL、cDNA模板2μL、ROXReference Dye II(50
×
)0.4μL、ddH2O 6.4μL。
[0022]进一步地，若待测患者血清样本中KIF3A和/或IFT88和/或ARL13B 基因的表达水平高于对照，则判断为早期尘肺病患者。
[0023]本专利技术公开了以下技术效果：
[0024]本专利技术可以证明初级纤毛KIF3A、IFT88和ARL13B的mRNA任意一种或多种组合可作为尘肺病检测标志物，且具有客观性、特异性和准确性的特点，本专利技术提供的检测试剂盒灵敏度高、检测时间短，对于尘肺病的早期筛查具有重大意义，具有极大的经济和社会价值。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0026]图1为KIF3A因子作为检测指标检测I期尘肺病的ROC曲线图；
[0027]图2为IFT88因子作为检测指标检测I期尘肺病的ROC曲线图；
[0028]图3为ARL13B因子作为检测指标检测I期尘肺病的ROC曲线图；
[0029]图4为KIF3A+IFT88联合因子作为检测指标检测I期尘肺病的ROC 曲线图；
[0030]图5为KIF3A+ARL13B联合因子作为检测指标检测I期尘肺病的ROC 曲线图；
[0031]图6为IFT88+ARL13B联合因子作为检测指标检测I期尘肺病的ROC 曲线图；
[0032]图7为KIF3A+IFT88+ARL13B联合因子作为检测指标检测I期尘肺病的ROC曲线图。
具体实施方式
[0033]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0034]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种尘肺病人早期筛查的mRNA的检测引物组和探针，其特征在于，包括下列中的一种或多种：(1)检测KIF3A基因的mRNA表达水平的引物组和探针：上游引物序列为SEQ ID NO：1，下游引物序列为SEQ ID NO：2，探针序列为SEQ ID NO：7；(2)检测IFT88基因的mRNA表达水平的引物组和探针：上游引物序列为SEQ ID NO：3，下游引物序列为SEQ ID NO：4，探针序列为SEQ ID NO：8；(3)检测ARL13B基因的mRNA表达水平的引物组和探针：上游引物序列为SEQ ID NO：5，下游引物序列为SEQ ID NO：6，探针序列为SEQ ID NO：9。2.根据权利要求1所述的检测引物组和探针，其特征在于，所述探针的5
’
端和3
’
端分别携带荧光基团FAM和淬灭基团NFQ
‑
MGB。3.一种用于尘肺病人早期筛查的mRNA的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括权利要求1或2所述的检测引物组和探针。4.一种权利要求1或2所述的检测引物组和探针在制备筛查早期尘肺病产品中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述产品通过测定样本中KIF3A和/或IFT88和/或ARL13B基因的mRNA表达水平以筛查早期尘肺病。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：李世峰，蔡文臣，刘舒鹏，徐洪，高学敏，李耕旭，范宇杭，陈思，
申请(专利权)人：华北理工大学，
类型：发明
国别省市：