用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物及其应用制造技术

本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物及其应用，其中，所述用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物包括上游引物及下游引物；其中，所述上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID No.2所示，采用提供的上游引物和下游引物对干扰素γ诱导蛋白10实现mRNA层面的检测，诊断时间短，适合大规模结核病的筛查；并且，以干扰素γ诱导蛋白10(IP

【技术实现步骤摘要】
用于干扰素
γ
诱导蛋白10mRNA检测引物及其应用


[0001]本申请属于生物
，尤其涉及一种用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物及其应用。

技术介绍

[0002]结核病是一种高度传染性的慢性病,尽管得到了迅速的改善，但它仍然是全球主要的健康和经济负担。世界卫生组织(WHO)估计，每年约有1040万新病例和180万人死于结核。估计有20亿人在没有主动感染的情况下表现出对结核病的免疫反应。潜伏性结核感染(LTBI)的定义是，在没有疾病活动和进展为活动性结核的风险增加的情况下，存在针对结核抗原的适应性免疫反应。LTBI约10％可能转化为活动性结核，其进展受多种因素影响，包括年龄、菌株毒力、剂量、宿主免疫状态和合并症等。
[0003]结核病极为广泛的临床表现与缺乏有效检测方法给结核病的防控带来严重缺憾。临床实践中正确诊断结核病是十分困难的，咳嗽以及非特异性的胸片是结核病的常规诊断方法之一。抗酸染色，结核培养，免疫学检测，核酸扩增诊断结核病的效果均有限。免疫学检测以结核菌素皮试(TST)和干扰素γ(IFN
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γ)释放试验(IGRA)为指导。TST是一种体内诊断试验，在皮内注射分枝杆菌特异性抗原48
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72小时后，测量皮肤中的延迟型超敏反应，TST的主要限制是对牛分枝杆菌卡介苗和环境分枝杆菌的交叉反应，这使得该试验在许多情况下没有特异性。IGRAs是TSTs的体外诊断替代品。干扰素
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γ释放试验(IGRA)是目前用于诊断结核的常用方法，其原理是使用结核特异性抗原(ESAT
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6和CFP10)刺激T细胞后检测干扰素
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γ(IFN
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γ)蛋白浓度。国内商用主要采用T
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spot试验，在接种卡介苗或暴露于大多数环境分枝杆菌后不会产生假阳性结果。尽管IGRAs具有高度特异性，但在活动性结核病患者中具有相对较高的假阴性率。在诊断性能方面，IGRA和TST在幼童和免疫抑制人群中诊断敏感性低，例如，由于艾滋病毒感染、皮质类固醇治疗和其他免疫抑制药物。且IGRA和TST均不能区分活动性和LTBI。因此，考虑到结核病诊断的这些局限性，开发新的、可靠的结核病检测方法是十分必要的。
[0004]干扰素γ诱导蛋白10(IP
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10)是一种7.2千道尔顿的趋化因子，在结核感染后，其表达水平比IFN
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γ高100倍。以前的研究表明在IGRA试验中IP
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10的表达水平高于IFN
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γ。个体的年龄、性别和结核病表现不影响IP
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10水平。因此，IP
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10通过提高对儿童、艾滋病毒感染者和接受免疫抑制治疗的风湿病患者的感染检测，提高了诊断性能。近年来，许多研究报道IP
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10已被确定为检测结核病的敏感参数极高。通过实时定量PCR(RT
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qPCR)检测结核特异性IP
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10mRNA作为IGRA指标比标准IGRA酶联免疫吸附试验更快更敏感。此外，RT
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qPCR允许自动化、多元化的，并且可以提供更高的检测灵敏度，这也为IP
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10mRNA的检测提供了可行性。

技术实现思路

[0005]本申请的目的在于提供一种用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物及其应用，旨
在解决现有技术中对干扰素γ诱导蛋白10在蛋白分子层面进行检测的检测时间长、假阳性高，且不利于区分活动性肺结核和潜伏性结核的问题。
[0006]为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：
[0007]第一方面，本申请提供一种用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物，用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物包括上游引物及下游引物；其中，上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，下游引物的序列如SEQ ID No.2所示。
[0008]第二方面，本申请提供一种mRNA检测引物在制备肺结核早期诊断的产品中的应用，mRNA检测引物为用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物。
[0009]第三方面，本申请提供一种用于预测肺结核患病的试剂盒，试剂盒包括用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物。
[0010]第四方面，本申请提供一种用于预测肺结核患病的系统，系统包括：
[0011]数据获取单元：用于将样本采用权利要求1的用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物进行一步法荧光定量PCR反应，获取样本的干扰素γ诱导蛋白10的Ct值；
[0012]数据分析单元：用于将Ct值与空白对照的数值进行计算，得到样本的风险概率值；
[0013]数据预测单元：用于将风险概率值进行分析，以预测肺结核患病情况。
[0014]本申请第一方面提供的用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物，采用提供的上游引物和下游引物对干扰素γ诱导蛋白10实现mRNA层面的检测，通过对干扰素γ诱导蛋白10进行mRNA的检测，在检测分析过程中，不需要筛选和制备特异性抗体，可直接进行PCR检测，诊断时间只需要小于4小时，且所用样品量较少，大大提高了诊断速度缩短诊断时间，适合大规模结核病的筛查；并且，以干扰素γ诱导蛋白10(IP
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10)作为检测对象，对免疫力低下的患者和儿童具有更强的诊断性能，并且可区分活动性结核、结核潜伏感染及健康人群，不会造成假阳性，更有利于全面、准确用于诊断结核情况。
[0015]本申请第二方面提供的mRNA检测引物在制备肺结核早期诊断的产品中的应用，采用用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物制备诊断产品，在检测分析过程中，不需要制备抗体，直接进行PCR检测，且诊断时间短、速度快，适合大规模结核病的筛查分析，不会造成假阳性，应用更广泛。
[0016]本申请第三方面提供的预测肺结核患病的试剂盒，该试剂盒中包括用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物，根据检测引物可直接对样本进行PCR检测，实现在mRNA层面对肺结核患病情况进行分析，使用样本量少，检测时间短、速度快；可对免疫力低下的患者和儿童具有更强的诊断性能，并且可区分活动性结核、结核潜伏感染及健康人群，提供的试剂盒应用更广泛。
[0017]本申请第四方面提供的提供一种用于预测肺结核患病的系统，提供的系统包括数据获取单元、数据分析单元以及数据预测单元，该系统利用用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物对样本进行一步法荧光定量PCR反应，获取其Ct值，再进行数据分析，以预测肺结核患病情况；该系统的分析结果可靠，准确率较高，可对免疫力低下的患者和儿童具有更强的诊断性能，并且可区分活动性结核、结核潜伏感染及健康人群。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述
中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物，其特征在于，所述用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物包括上游引物及下游引物；其中，所述上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID No.2所示。2.一种mRNA检测引物在制备肺结核早期诊断的产品中的应用，其特征在于，所述mRNA检测引物为权利要求1所述的用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物。3.一种用于预测肺结核患病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述用于干扰素γ诱导蛋白10mRNA检测引物的终浓度为0.2～0.25μmol/L。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括2
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SYBR一步法荧光定量PCR缓冲液，超级混合酶、不包含RNA酶的无菌水以及内参对照。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：任维，谭宇蓉，
申请(专利权)人：深圳友道聚财科技企业有限合伙，
类型：发明
国别省市：