本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种蛋白酶K及其复合酶在制备病毒抑制剂中的应用。首先本发明专利技术发现蛋白酶K对冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒具有一定的抑制和杀灭作用，能够显著降低病毒效价，可作为病毒抑制剂，用于制备治疗冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒感染的药物，也可用于制备动物饲料；其次，本发明专利技术发现由蛋白酶K和中性蛋白酶组成的复合酶对冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒均具有显著的抑制和杀灭作用，能够显著降低病毒效价，且其效果显著优于同剂量的蛋白酶K及中性蛋白酶，可作为病毒抑制剂，用于制备治疗冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒感染的药物；也可用于制备动物饲料，具有广泛的应用前景。具有广泛的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
蛋白酶K及其复合酶在制备病毒抑制剂中的应用
[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种蛋白酶K及其复合酶在制备病毒抑制剂中的应用。
技术介绍
[0002]蛋白酶家族中的蛋白酶K是一种丝氨酸蛋白酶，能够消化富含二硫键的天然角蛋白，来源于林伯氏白色念球菌。近年来，蛋白酶K的应用不仅仅局限在医疗诊断及科研领域。在实现规模化工业生产的前提下，蛋白酶K还可以替代作用范围较窄的其它蛋白酶，应用于工业制革、造纸、饲料等行业中。
[0003]中性蛋白酶属于其中一种内切酶，可水解处理各种蛋白质肽键，释放氨基酸或者多肽，其最适pH值为7.0左右。中性蛋白酶具有无工业污染、催化反应速度快、反应条件适应性宽等优点，因此在众多行业中都有应用，例如皮革、纺织、化工、食品、医药等，具有重要的工业价值。
[0004]本专利技术发现，蛋白酶K对冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒具有一定的抑制和杀灭作用，能够显著降低病毒效价，可作为病毒抑制剂，用于制备治疗冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒感染的药物，也可用于制备动物饲料。而且由蛋白酶K和中性蛋白酶组成的复合酶对冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒均具有显著的抑制和杀灭作用，能够显著降低病毒效价，且其效果显著优于同剂量的蛋白酶K及中性蛋白酶，可作为病毒抑制剂，用于制备治疗冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒感染的药物；也可用于制备动物饲料，具有广泛的应用前景。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于提供一种蛋白酶K及其复合酶在制备病毒抑制剂中的应用。具体包括以下内容：
[0006]第一方面，本专利技术提供了一种蛋白酶K在制备抑制病毒复制或抑制病毒感染的药物中的应用。
[0007]优选地，所述病毒包括冠状病毒(PEDV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、口蹄疫病毒(FMDV)。
[0008]优选地，所述蛋白酶K加入药学上可接受的辅料或载体制成药学上可接受的任一剂型。
[0009]第二方面，本专利技术提供了一种蛋白酶复合酶，所述蛋白酶复合酶包括蛋白酶K和中性蛋白酶，所述蛋白酶K和中性蛋白酶的重量比为：2
‑
8：8
‑
2。
[0010]优选地，所述蛋白酶K和中性蛋白酶的重量比为：6
‑
8：4
‑
2。
[0011]优选地，所述蛋白酶K和中性蛋白酶的重量比为：6：4。
[0012]第三方面，本专利技术提供了上述第二方面所述的蛋白酶复合酶在制备抑制病毒复制或抑制病毒感染的药物中的应用。
[0013]优选地，所述病毒包括冠状病毒(PEDV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、口蹄疫病毒(FMDV)。
[0014]优选地，所述蛋白酶复合酶加入药学上可接受的辅料或载体制成药学上可接受的任一剂型。
[0015]第四方面，本专利技术提供了上述第二方面所述的蛋白酶复合酶在制备动物饲料中的应用。
[0016]本专利技术的有益效果是：
[0017](1)本专利技术发现蛋白酶K对冠状病毒(PEDV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、口蹄疫病毒(FMDV)均具有一定的抑制和杀灭作用，能够显著降低病毒效价，可作为病毒抑制剂，用于制备治疗冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒感染的药物，也可用于制备动物饲料；
[0018](2)本专利技术发现由蛋白酶K和中性蛋白酶组成的复合酶对冠状病毒(PEDV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、口蹄疫病毒(FMDV)具有更显著的抑制和杀灭作用，能够显著降低病毒效价，且其效果显著优于同剂量的蛋白酶K及中性蛋白酶，可作为病毒抑制剂，用于制备治疗冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒感染的药物；也可用于制备动物饲料，具有广泛的应用前景。
具体实施方式
[0019]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。下述实施例中的实验方法若无特别说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买。
[0020]以下实施例所述中性蛋白酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述蛋白酶K的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0021]以下列实施例中所述的冠状病毒(PEDV CV777)、非洲猪瘟病毒(ASFV CN/GS/2018)、口蹄疫病毒(FMDV/O/17002)来源于来自国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)；所述实验均在国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)完成。
[0022]实施例1蛋白酶K及蛋白酶K与中性蛋白酶组成的复合酶对冠状病毒的抑制
[0023]1.蛋白酶K及蛋白酶K与中性蛋白酶组成的复合酶待测样品的配置
[0024]配制1000ml的病毒消毒液，分别按表1所示，称取蛋白酶K，中性蛋白酶，海藻糖和稳定剂，加去离子水室温搅拌溶解，用0.22μm的滤器在无菌的环境下过滤除菌，得待测样品。
[0025]表1待测样品的配置
[0026][0027]2.复合酶处理对冠状病毒的抑制作用
[0028](1)复合酶与病毒共孵育：用MEM培养基将复合酶稀释成不同浓度，将0.1mL PEDV原液(TCID
50
＝1
×
106/0.1mL)与等体积上述不同浓度待测样品混合，对照组为病毒和等体积的含10％FBS的MEM培养基混合液，于16℃分别作用1min、10min和30min后，再分别用含10％FBS的MEM稀释1000倍；
[0029](2)病毒接种细胞：然后将细胞培养板中培养液吸出，把上述稀释好的复合酶与病毒混合液按复合酶浓度大小分别依次加入相应96孔板孔中，每个浓度重复四孔，每孔0.2mL。对照组：阴性对照为含10％FBS的MEM；阳性对照分为同条件处理后的FMDV；病毒抑制剂对照为1000倍稀释的卫可消毒液(含10％FBS的MEM稀释)。对照组的每孔加入量为0.2ml。然后置37℃，5％CO2培养箱中培养48h。
[0030](3)病毒抑制作用检测：采用qPCR检测病毒RNA的CT值，采用药典标准方法检测病毒的TCID
50
。
[0031]3.结果
[0032]结果如下表2所示，未加上述待测样品前，冠状病毒悬液中病毒效价均为10
7.8
TCID50/g；加入上述待测样品处理后1h，冠状病毒悬液中病毒效价均降低，说明上述待测样品对冠状病毒具有一定的抑制作用。其中，中性蛋白酶处理后病毒效价仅降低至10
5.6
TCID50/g；而蛋白酶K处理后病毒效价降低至10
3.9
TCID50/g；不同组成的蛋白酶K与中性蛋白酶复合酶处理后病毒效价分别降低至10
2.9
TCID50/g、10
2.4
TCID50/g、10
3.5
TCID50/g、10
4.5
TCID50/g；其中相较于蛋白酶K，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.蛋白酶K在制备抑制病毒复制或抑制病毒感染的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病毒包括冠状病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述蛋白酶K加入药学上可接受的辅料或载体制成药学上可接受的任一剂型。4.一种蛋白酶复合酶，其特征在于，所述蛋白酶复合酶包括蛋白酶K和中性蛋白酶，所述蛋白酶K和中性蛋白酶的重量比为：2
‑
8：8
‑
2。5.如权利要求4所述的蛋白酶复合酶，其特征在于，所述蛋白酶K和中性蛋白酶的重量比为：6
‑
...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾敏一，冯俊杰，葛秀芹，张贵财，
申请(专利权)人：百川开泰生物技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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