一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺制造技术

本发明专利技术属于蛋白酶技术领域，尤其涉及一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，包括以下工艺步骤：将膜材溶于有机溶剂中，经减压蒸发去除有机溶剂，形成脂质薄膜；将蛋白酶溶解在溶剂中得到蛋白酶溶液；向脂质薄膜中加入蛋白酶溶液，溶解脂质薄膜，冰浴超声，得到脂质体

【技术实现步骤摘要】
一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺


[0001]本专利技术属于蛋白酶
，尤其涉及一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺。

技术介绍

[0002]蛋白酶是生物体内的一类酵素，是水解蛋白质肽键的一类酶的总称，它们能够有效分解蛋白质，分解方法是打断那些将氨基酸连结成多肽链的肽键。按其水解多肽的方式，可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。内肽酶将蛋白质分子内部切断，形成分子量较小的月示和胨。外肽酶从蛋白质分子的游离氨基或羧基的末端逐个将肽键水解，而游离出氨基酸，前者为氨基肽酶后者为羧基肽酶。按其活性中心和最适pH值，又可将蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。按其反应的最适pH值，分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。工业生产上应用的蛋白酶，主要是内肽酶。蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。
[0003]由于蛋白酶对环境条件敏感，容易氧化变质，造成应用上的缺陷。脂质体是由磷脂双分子层形成的内部包含水相的封闭囊泡，具有缓释性、细胞亲和性、组织相容性等优点，已成功应用于医药、化工、化妆品等领域中。因此，研究出一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，以提高蛋白酶的稳定性和生物利用性，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0004]为解决上述现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，包括以下工艺步骤：（1）将膜材溶于有机溶剂中，经减压蒸发去除有机溶剂，形成脂质薄膜；（2）将蛋白酶溶解在溶剂中得到蛋白酶溶液；（3）向脂质薄膜中加入蛋白酶溶液，溶解脂质薄膜，冰浴超声，得到脂质体
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蛋白酶溶液；（4）用微孔滤膜过滤，得到包裹蛋白酶的脂质体。
[0006]优选的，步骤（1）中，所述膜材包括胆固醇和卵磷脂，所述胆固醇和卵磷脂的重量比为1∶2～1∶6。
[0007]优选的，步骤（1）中，所述的有机溶剂中膜材浓度为4.0～5.5mg/mL；所述减压蒸发的温度为50～70℃。
[0008]优选的，步骤（1）中，所述有机溶剂包括无水乙醇、无水乙醚、乙醇和氯仿中的一种或多种的组合。
[0009]优选的，步骤（2）中，所述溶剂为磷酸盐缓冲溶液，PH值为6.0～7.0。
[0010]优选的，步骤（2）中，所述蛋白酶溶液中蛋白酶的浓度为0.5～1.5mg/ml。
[0011]优选的，步骤（4）中，所述脂质体的直径为50～200nm。
[0012]优选的，步骤（4）中，得到包裹蛋白酶的脂质体后，再用花色苷进行包覆，得到花色苷包覆的蛋白酶脂质体。
[0013]花色苷是花色素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物，广泛存在于植物的花、果实、茎、叶和根器官的细胞液中，研究证明花色苷具有清除体内自由基、增殖叶黄素、抗肿瘤、抗癌、抗炎、抑制脂质过氧化和血小板凝集、预防糖尿病、减肥、保护视力等功效。通过花色苷进行包覆，可以充分利用花色苷的特性，赋予蛋白酶脂质体新的功能。
[0014]优选的，在花色苷包覆的蛋白酶脂质体外再进行脂质体包覆，最终得到脂质体
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花色苷
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脂质体
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蛋白酶的四层包覆结构的脂质体。
[0015]由于含有大量极不稳定的酚羟基，花色苷的稳定性并不理想，其稳定性容易受到制备加工、贮藏过程中的一些理化因子的影响，如pH、温度、光、氧、酶、抗坏血酸、糖等，因此大大限制了花色苷在保健品领域中的应用。通过脂质体包覆，可以保证花色苷的活性。
[0016]有益效果本专利技术公开了一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，本专利技术利用脂质体包裹蛋白酶，将蛋白酶与外界环境隔开，保护其不受环境条件影响，防止其氧化变质，延长其活性时间，增加了蛋白酶的稳定性，且脂质体可通过胞吞或膜融合等方式将蛋白酶转入细胞内，能有效解决其作为生物大分子难以透过细胞膜的难题，可大大提高其作用效果和利用率。本专利技术所述蛋白酶脂质体的制备方法简单，制备原料容易获取，具有很好的应用前景。
具体实施方式
[0017]以下，将详细地描述本专利技术。在进行描述之前，应当理解的是，在本说明书和所附的权利要求书中使用的术语不应解释为限制于一般含义和字典含义，而应当在允许专利技术人适当定义术语以进行最佳解释的原则的基础上，根据与本专利技术的技术方面相应的含义和概念进行解释。因此，这里提出的描述仅仅是出于举例说明目的的优选实例，并非意图限制本专利技术的范围，从而应当理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围的情况下，可以由其获得其他等价方式或改进方式。
[0018]以下实施例仅是作为本专利技术的实施方案的例子列举，并不对本专利技术构成任何限制，本领域技术人员可以理解在不偏离本专利技术的实质和构思的范围内的修改均落入本专利技术的保护范围。除非特别说明，以下实施例中使用的试剂和仪器均为市售可得产品。
[0019]实施例1一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，包括以下工艺步骤：（1）将膜材溶于有机溶剂中，经减压蒸发去除有机溶剂，形成脂质薄膜；（2）将蛋白酶溶解在溶剂中得到蛋白酶溶液；（3）向脂质薄膜中加入蛋白酶溶液，溶解脂质薄膜，冰浴超声，得到脂质体
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蛋白酶溶液；（4）用微孔滤膜过滤，得到包裹蛋白酶的脂质体。
[0020]步骤（1）中，所述膜材包括胆固醇和卵磷脂，所述胆固醇和卵磷脂的重量比为1∶2。所述的有机溶剂中膜材浓度为4.0～5.5mg/mL；所述减压蒸发的温度为50℃。所述有机溶剂为乙醇和氯仿的组合。
[0021]步骤（2）中，所述溶剂为磷酸盐缓冲溶液，PH值为6.0～7.0。所述蛋白酶溶液中蛋白酶的浓度为0.5mg/ml。
[0022]步骤（4）中，所述脂质体的直径为50nm。
[0023]本专利技术利用脂质体包裹蛋白酶，将蛋白酶与外界环境隔开，保护其不受环境条件影响，防止其氧化变质，延长其活性时间，增加了蛋白酶的稳定性，且脂质体可通过胞吞或膜融合等方式将蛋白酶转入细胞内，能有效解决其作为生物大分子难以透过细胞膜的难题，可大大提高其作用效果和利用率。本专利技术所述蛋白酶脂质体的制备方法简单，制备原料容易获取，具有很好的应用前景。
[0024]实施例2一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，包括以下工艺步骤：（1）将膜材溶于有机溶剂中，经减压蒸发去除有机溶剂，形成脂质薄膜；（2）将蛋白酶溶解在溶剂中得到蛋白酶溶液；（3）向脂质薄膜中加入蛋白酶溶液，溶解脂质薄膜，冰浴超声，得到脂质体
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蛋白酶溶液；（4）用微孔滤膜过滤，得到包裹蛋白酶的脂质体。
[0025]步骤（1）中，所述膜材包括胆固醇和卵磷脂，所述胆固醇和卵磷脂的重量比为1∶6。所述的有机溶剂中膜材浓度为5.5mg/mL；所述减压蒸发的温度为70℃。所述有机溶剂包括无水乙醇、无水乙醚的组合。
[0026]步骤（2）中，所述溶剂为磷酸盐缓冲溶液，PH值为6.0～7.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，其特征在于，包括以下工艺步骤：（1）将膜材溶于有机溶剂中，经减压蒸发去除有机溶剂，形成脂质薄膜；（2）将蛋白酶溶解在溶剂中得到蛋白酶溶液；（3）向脂质薄膜中加入蛋白酶溶液，溶解脂质薄膜，冰浴超声，得到脂质体
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蛋白酶溶液；（4）用微孔滤膜过滤，得到包裹蛋白酶的脂质体。2.根据权利要求1所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，其特征在于，步骤（1）中，所述膜材包括胆固醇和卵磷脂，所述胆固醇和卵磷脂的重量比为1∶2～1∶6。3.根据权利要求1所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，其特征在于，步骤（1）中，所述的有机溶剂中膜材浓度为4.0～5.5mg/mL；所述减压蒸发的温度为50～70℃。4.根据权利要求3所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，其特征在于，步骤（1）中，所述有机溶剂包括无水乙醇、无水乙醚、乙醇和氯仿中的一种或多种的组合。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：孙波，
申请(专利权)人：山东源科生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：