免疫刺激组合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一组成型活性促炎半胱天冬酶，其包含洗牌的p10及p20结构域，用于一种刺激一个体的一免疫反应的方法的用途。本发明专利技术还涉及一免疫刺激组合物，其包含含有洗牌的p10及p20结构域的所述组成型活性促炎半胱天冬酶，与一药理学上可接受的赋形剂，以及其用于一种治疗一个体的方法的用途。一个体的方法的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫刺激组合物及其用途
[0001]
和
技术介绍

[0002]本专利技术一般涉及免疫刺激组合物，包含一焦亡细胞死亡的诱导剂，如包含交换的p10和p20结构域的一组成型活性促炎半胱天冬酶。
[0003]对抗癌症及病原体的有效免疫反应需要T细胞的激活特定针对蛋白质片段(抗原)，由恶性转化或感染的细胞选择性表达。在引流淋巴结激活后，这些激活的T细胞重新进入循环并侵入受影响的组织以清除异常但不健康的细胞。在第一次遇到抗原后，这些T细胞的扩展子集会持续存在并且更容易被激活。因此，这些记忆性T细胞降低了再次感染相同或相似病原体的易感性，并且可以类似地降低癌症复发的风险。抗原特异性和记忆力都是适应性免疫系统的特征。
[0004]为了防止感染，可以通过施用抗原制剂对个体赋予免疫，抗原制剂可以来源于感染性病原体本身，也可以肽、蛋白质、mRNA或DNA的形式合成产生。这种程序，也称为疫苗接种，也可能适用于癌症的预防和治疗。先天免疫系统激活是诱导适应性免疫反应的绝对必要条件。因此，疫苗效力的关键，特别是在合成疫苗的情况下，是包含能激活先天免疫系统的细胞的一佐剂(McKee and Marrack,2017.CurrOpin Immunol 47:44
‑
51)。
[0005]最常用的佐剂是明矾，由铝盐组成。最近开发的佐剂倾向于模仿病原体关联的分子模式(pathogen
‑
associated molecular patterns，PAMPS)以针对先天免疫细胞上的模式识别受体(pattern recognition receptors，PRR)(Kanzler et al.,2007.Nat Med 13:552
‑
9；Wu,2016.Immunology 148：315
‑
25；Vasou et al.,2017.Viruses 9:pii:E186)。这些佐剂通常适用于蛋白质和肽疫苗，但不适用于由RNA或DNA组成的基因疫苗(Li and Petrovsky,2016.Expert Rev Vaccines 15:313
‑
29)。
[0006]虽然第一种源自传染性病原体的疫苗是在18世纪制造的，但基因疫苗要年轻得多。第一种DNA疫苗是在20世纪末开发的，关于mRNA疫苗的第一份报告可追溯到2004年(Carralot等人，2004.Cell Mol Life Sci 61:2418
–
24)。尽管目前许多基因疫苗处于临床试验阶段，但还没有一种疫苗被批准用于人类。这个领域的一个主要挑战是发现有效的佐剂。这类佐剂通常与mRNA或DNA相结合并编码免疫刺激蛋白，例如细胞因子、趋化因子，以及最近的PRR信号通路的组成部分。在这些佐剂中，迄今为止只有两种在人体临床试验中显示出前景：细胞因子IL
‑
12和GM
‑
CSF(CSF2)(Li et al.,2017.Clin Vaccine Immunol 24:e00263
‑
17；Richie et al.,2012.Hum Vaccin Immunother 8:1564
‑
84)。
[0007]因此，需要提供先天免疫反应的有效诱导剂，可以作为基因疫苗的佐剂，即核酸基础的疫苗。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供一种组成型活性促炎半胱天冬酶(constitutively active pro
‑
inflammatory caspase)，用于一种刺激一个体的一免疫反应的方法，所述免疫反应优选是一T细胞介导的免疫反应，所述方法包含对所述个体施用所述组成型活性促炎半胱天冬酶。
[0009]被感染或转化的细胞可以通过它们死亡的方式提醒免疫系统。凋亡趋向于免疫沉
默，因为凋亡细胞不会发出炎症信号，并且会被巨噬细胞迅速清除。相比之下，经历炎症性细胞死亡的细胞会诱导免疫激活。焦亡(pyroptosis)和坏死性凋亡是最近发现的导致损伤关联分子模式释放的程序性坏死形式(DAMPS；Wall et al.,2016.Science 352:51
‑
58)。这些DAMPS包括在活细胞中执行非炎症功能的细胞内分子(例如ATP、高迁移率族框1(HMGB1))和细胞因子，例如IL
‑
1β、IL
‑
18和IL
‑
33。焦亡和坏死性DAMPS需要膜破坏才能释放到细胞外环境中，在那里它们可以结合模式识别受体(PRR)和/或细胞因子受体来激活先天免疫细胞。
[0010]已知经历坏死性凋亡的细胞会引发抗肿瘤免疫性。将坏死性细胞注射到小鼠中会激活IFN
‑
γ、TNF
‑
和IL
‑
2产生T细胞，这些T细胞对这些细胞中包含的肿瘤抗原具有特异性。这些T细胞具有细胞毒性，且可以有效清除肿瘤细胞(Yatim等人，2015.Science 350:328
‑
334；Aaes et al.,2016.Cell Rep 15:274
‑
278))。此外，在肿瘤细胞中一坏死性效应子分子的强制表达、混合谱系激酶结构域样(MLKL)会激活肿瘤特异性T细胞，这有助于清除肿瘤(van Hoecke et al.,2018.Nat Commun 9:3417)。受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)是这条通路中MLKL上游的一关键参与者，在肿瘤细胞中的表达经常降低，这一事实也强调了抗肿瘤免疫中坏死性凋亡的重要性。活性MLKL在细胞膜中形成孔，细胞因渗透作用在其上“爆炸”，导致大量DAMP释放。因此，坏死性凋亡可以通过触发以促炎细胞因子IFNγ和TNF为特征的一毒性反应来刺激抗肿瘤免疫性，这是一种典型的用于抗病毒免疫的免疫反应。
[0011]另一方面焦亡主要发生在暴露于沙门氏菌(Salmonella)等细菌、真菌和一些病毒的巨噬细胞中。焦亡特有的是促炎细胞因子IL18和IL1β的释放，以及细胞膜中gasdermin D(GSDMD)孔的形成(Amarante
‑
Mendes et al.,2018.Front Immunol 9:2379
‑
97)。GSDMD诱导一形态学上独特的细胞死亡类型，其特征是在没有渗透诱导的细胞膨胀和破裂的情况下形成焦亡体(Chen等人，2016.Cell Res 26:1007
‑
20)。细胞因子制造和细胞死亡都依赖于促炎半胱天冬酶的激活，尤其是半胱天冬酶
‑
1。此途径可能不利于对抗病毒感染，因为缺乏半胱天冬酶
‑
1的小鼠不太容易受到流感感染(Ren等人，2017.Sci Rep 7:7625)和对半胱天冬酶
‑
1的抑制延长小鼠感染狂病病毒后存活时间(Koraka et al.,2018.Vaccine 10.1016/j.vaccine.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组成型活性促炎半胱天冬酶，优选人类半胱天冬酶，其特征在于：所述组成型活性促炎半胱天冬酶包含交换的p10及p20结构域，任选地通过一蛋白酶可裂解位点连接。2.根据权利要求1所述的组成型活性促炎半胱天冬酶，其特征在于：所述组成型活性促炎半胱天冬酶是一组成型活性促炎半胱天冬酶
‑
1，优选为人类半胱天冬酶1。3.根据前述权利要求任一项所述的组成型活性促炎半胱天冬酶，其特征在于：所述组成型活性促炎半胱天冬酶缺少一半胱天冬酶
‑
募集结构域。4.根据前述权利要求任一项所述的组成型活性促炎半胱天冬酶，其特征在于：对应于SEQ ID NO:52的G403的一甘氨酸位于离对应于SEQ ID NO:52的C136的一半胱氨酸0至40个氨基酸残基的一距离处，优选位于0至10个氨基酸残基的一距离处。5.根据前述权利要求任一项所述的组成型活性促炎半胱天冬酶，其特征在于：所述组成型活性促炎半胱天冬酶缺少一p20至p10的域间连接子。6.一种将前述权利要求任一项所述的组成型活性促炎半胱天冬酶用于刺激一个体的一免疫反应的一方法的用途，优选为一T细胞介导的免疫反应，其特征在于：所述用途包含对所述个体施用所述组成型活性促炎半胱天冬酶。7.根据权利要求6的所述组成型活性促炎半胱天冬酶的用途，其特征在于：所述免疫反应直接针对存在于所述个体中的一肿瘤或感染。8.根据权利要求6至7任一项的所述的组成型活性促炎半胱天冬酶的用途，其特征在于：所述半胱天冬酶优选通过瘤内注射被施用于所述个...

【专利技术属性】
技术研发人员：尤伦，
申请(专利权)人：伊缪纯有限公司，
类型：发明
国别省市：