分泌鼠抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用制造技术

本发明专利技术属于生物学和体外诊断试剂技术领域，涉及一种分泌鼠抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用。所述分泌鼠抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为杂交瘤细胞株18A10，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2021184。该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体为鼠抗人IgG单克隆抗体，具有高效价、高亲和力和高特异性，在抗体稳定性方面，有很好的性能。该抗体可用于血清中人IgG抗体的检测，可用于一些体外诊断试剂盒中。盒中。

【技术实现步骤摘要】
分泌鼠抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用


[0001]本专利技术属于生物学和体外诊断试剂
，涉及一种分泌鼠抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用。

技术介绍

[0002]免疫球蛋白是血清中含量最丰富的蛋白之一，在成人血清中，IgG的含量最高，且在血清中的半衰期长，是人体免疫反应的基础物质。
[0003]抗人IgG抗体是免疫实验和体外诊断试剂盒中的常用原料之一，用人IgG免疫动物制成的抗血清，是多种抗体混合物，相对来说，这种抗体特异性比较差，效价低，批间差异大，在原料生产过程中，难以保证抗体质量的一致性。杂交瘤技术的问世，为生产高度特异性的单克隆抗体提供了一种有效的方法。
[0004]结核分枝杆菌是分枝杆菌的一种，能够通过空气和呼吸道传播，主要感染肺部。针对结核病的检测和诊断，主要有一下几个方面：一是细菌学检测，有痰涂片或是菌培养实验，该方法的检出率和敏感性都比较低，周期长；二是分子生物学诊断，该方法虽然快速且特异性好，但阴阳性结果不好区分，且诊断结果的临床意义不明确；三是免疫学方法，该方法特异性和敏感性很高，检测周期短，方法简单易操作，是目前应用比较广泛的检测方法。
[0005]相对于其他免疫方法，胶体金法的检测方法操作简单，检测周期短。通过对血清中结合抗体IgG的检测，提高了结核病诊断的灵敏度和特异性，实现结核病的早发现，早诊断，早治疗，并在结核病的治疗过程中，进行用药指导。因此，寻找能够稳定分泌抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并获得效价高，特异性好的抗人IgG单克隆抗体，具有重要的意义，是目前需要完善和解决的问题。

技术实现思路

[0006]针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种分泌鼠抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并用体内腹水法培养这株杂交瘤细胞，制备鼠抗人IgG单克隆抗体。通过此种方法制备出的鼠抗人IgG单克隆抗体可用于制备检测人血清、血浆或全血中IgG的试剂盒。
[0007]本专利技术的第一个目的在于，针对现有技术中存在的不足，提供一种分泌鼠抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0008]为达到上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术用纯化的人IgG作为抗原进行小鼠免疫，免疫雌性Balb/c小鼠，血清筛选后选取抗体效价较好的小鼠，取其脾脏的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合，经过亚克隆和筛选得到的该细胞株，命名为18A10，该细胞株能够稳定分泌鼠抗人IgG单克隆抗体。保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2021184。
[0009]本专利技术的第二个目的是，针对现有技术中存在的不足，提供了一种由鼠抗人IgG的杂交瘤细胞分泌的鼠抗人IgG的单克隆抗体。
[0010]为达到上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：选取Balb/c雌鼠，向小鼠腹腔注射液体石蜡，一周后腹腔注射鼠抗人IgG的杂交瘤细胞，待其腹部膨胀明显后，收集腹水，离心，收集上清液，纯化，得到鼠抗人IgG的单克隆抗体。
[0011]本专利技术提供的鼠抗人IgG单克隆抗体，亚型为IgG2a，效价高，稳定性好。
[0012]本专利技术提供的鼠抗人IgG单克隆抗体，不与人IgM、羊IgG、兔IgG反应，且与人IgG的Fc段有特异反应，特异性好。
[0013]本专利技术的第三个目的是，针对现有技术中存在的不足，提供了一种鼠抗人IgG单克隆抗体在体外诊断试剂盒胶体金法的应用。
[0014]具体是一种胶体金法试剂盒，本专利技术所述的鼠抗人IgG单克隆抗体在该试剂盒中作为标记抗体。
[0015]所述试剂盒，用于检测样品中的IgG蛋白。
[0016]所述样品为人血清、血浆或全血。
[0017]所述试剂盒，用于结核IgG抗体的检测和诊断。
[0018]本专利技术的有益效果：
[0019]本专利技术的杂交瘤细胞株为18A10及其传代细胞株能够稳定分泌抗人IgG单克隆抗体；分泌的抗体亚型为IgG2a，亚型单一，抗体效价高；该抗体能特异性结合人IgG的Fc段，特异性好；能够用于制备体外诊断胶体金法检测试剂盒。
[0020]生物保藏说明：
[0021]培养物名称：杂交瘤细胞株18A10，于2021年8月19日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2021184。
附图说明
[0022]图1是实施例1人IgG纯度检测结果；
[0023]图2是实施例1人IgG线性检测结果；
[0024]图3是实施例1小鼠免疫结果；
[0025]图4是实施例1杂交瘤细胞分泌抗体稳定性的检测结果；
[0026]图5是实施例3抗体效价、亲和力的检测结果；
[0027]图6是实施例3抗体亚型的检测结果；
[0028]图7是实施例3特异性的检测结果；
[0029]图8是实施例3抗体稳定性的检测结果。
具体实施方式
[0030]下面结合具体实施例及附图对本专利技术做进一步详细说明。
[0031]实施例1分泌抗人IgG抗体的杂交瘤细胞株的制备
[0032]1、抗原纯化
[0033]取30份阴性人血清，混合均匀，按照纯化规程，使用Pro
‑
A柱进行纯化，经过SDS
‑
PAGE验证，纯化的人IgG纯度在95以上，检测结果如图1所示；经过间接ELISA验证，该抗原的线性很好，检测结果如图2所示。通过不同样本的混合，保证抗原来源的广泛性，确保抗原结构的完整性。
[0034]2、小鼠免疫
[0035]用人IgG免疫6周龄的雌性Balb/c小鼠。蛋白按照100μg/只的剂量与等体积的弗氏完全佐剂混合，乳化完全，背部皮下多点免疫小鼠。三周后加强免疫，蛋白按照50μg/只的剂量与等体积的不完全弗氏佐剂混合，乳化完全，背部皮下多点免疫小鼠。1周后，对小鼠进行断尾采血，检测血清效价，检测结果如图3所示。选取血清效价达到10万以上的免疫小鼠，准备融合。融合前3天，对小鼠进行腹腔注射免疫，不加佐剂，免疫剂量为100μg/只。
[0036]3、细胞融合
[0037]本专利技术在进行杂交瘤制备过程中，通过调整胎牛血清的品质和使用量，选择优质骨髓瘤细胞和小鼠免疫淋巴细胞，增强细胞融合效率。
[0038]融合时，在无菌环境下，取免疫小鼠的脾脏，研磨分散细胞，离心后收集小鼠B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞sp2/0按照5
‑
10:1的比例进行混合，离心，用无血清DMEM培养基清洗细胞，确保混合细胞中无胎牛血清。在37℃水浴中，用1mLPEG进行细胞融合，在1min内边滴加PEG，边轻柔混合，静置30s，使PEG充分作用。
[0039]融合结束后，用20mL无血清DMEM终止融合，加入速度有慢到快，在8min内加完。终止结束后，将细胞放入二氧化碳培养箱中孵育20min，800rpm/min离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分泌鼠抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏编号为CCTCC NO：C2021184。2.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞，其特征在于，用天然人IgG免疫小鼠，取免疫小鼠脾脏的B淋巴细胞，和小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合，经过克隆筛选得到。3.一种鼠抗人IgG单克隆抗体，其特征在于，该单克隆抗体由权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，刘洋，李文，李林，吴姝青，杜金芳，刘万建，宋金玲，高文晓，
申请(专利权)人：青岛硕景生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：