一种利用抑制剂A2ti-1抑制伪狂犬病毒体外复制增殖的方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种膜联蛋白A2/S100A10异源四聚体抑制剂A2ti

【技术实现步骤摘要】
一种利用抑制剂A2ti
‑
1抑制伪狂犬病毒体外复制增殖的方法及应用


[0001]本专利技术涉及一种膜联蛋白A2/S100A10异源四聚体(A2t)抑制剂A2ti
‑
1在体外抑制伪狂犬病毒复制增殖的方法及应用，属于细胞生物学、病毒学


技术介绍

[0002]伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)属于疱疹病毒科(Herpesviridae family)，疱疹病毒甲亚科(Alphaherpesvirinae subfamily)水痘病毒属(Varicellovirus genus)，病毒粒子表面被有囊膜，基因组为双股DNA病毒，大小约15万个碱基，包含72个开放阅读框(open reading frame，ORF)，编码70个不同的蛋白。PRV可以感染多种动物，如狗、猫、羊、牛、狐狸、貂和鼠等，致死率几乎为100％，猪感染伪狂犬病毒后，不同阶段的猪群表现症状也不同，母猪主要表现为繁殖障碍，如流产，产死胎、木乃伊、弱仔等；哺乳仔猪主要表现为神经症状、尖叫、口吐白沫，多在48～72h内死亡；保育猪感染后表现为神经症状和呼吸道症状；育肥猪感染后则主要表现为呼吸道症状，偶见神经症状，死亡率通常较低。
[0003]令人担心的是，近年来已经报道了多起PRV感染人的案例，可以确定的是，在特定条件下，PRV的确是可以跨种传播，引起人的感染，主要表现为病毒性脑炎的症状，且已报道的病例多数预后不良。更为重要的是，伪狂犬病毒变异毒株的出现，使得当前猪场使用的商品化疫苗的保护效力大为降低，申请人所在单位的实验室经多年的血清学监测数据显示，伪狂犬野毒在猪场的感染率依然很高，样品和猪场阳性率分别为40.0％和70.0％左右。鉴于当前还没有针对PRV的特异性的治疗药物，伪狂犬病毒的广泛流行对养猪行业的从业人员及其他与其密切接触人员均构成一定威胁。因此，有必要研发筛选针对伪狂犬病毒的潜在治疗药物。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种利用膜联蛋白A2/S100A10异源四聚体(A2t)抑制剂A2ti
‑
1在体外抑制伪狂犬病毒复制增殖中的应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0006]抑制剂A2ti
‑
1在抑制伪狂犬病毒体外复制增殖中的应用。
[0007]所述抑制剂A2ti
‑
1的使用浓度为31.25μmol/L～250μmol/L。
[0008]所述抑制剂A2ti
‑
1的使用浓度为62.5μmol/L～125μmol/L。
[0009]所述的抑制剂A2ti
‑
1在制备抗伪狂犬病毒感染的抗病毒药物中的应用。
[0010]本专利技术有益效果：
[0011]本专利技术综合利用细胞生物学和病毒学等技术，发现了膜联蛋白A2/S100A10异源四聚体(A2t)抑制剂A2ti
‑
1具有抑制PRV在体外复制增殖的作用。首先通过对商品化的A2ti
‑
1进行细胞毒性检测，确定了A2ti
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1的体外使用浓度。然后利用免疫荧光(IFA)、荧光定量PCR、病毒滴度测定(TCID50)和蛋白免疫印迹技术等评估A2ti
‑
1在体外抑制PRV感染的效
果，发现其可以显著抑制PRV的复制增殖。
[0012]利用本专利技术所述的方法能够显著抑制PRV在猪肾上皮细胞(PK
‑
15)上的复制增殖，当抑制剂的处理浓度为62.5μM或125μM时，与未加抑制剂的对照组相比，PRV的荧光强度、PRV基因组DNA的含量、病毒滴度和PRV结构蛋白的表达量均显著降低，证实A2ti
‑
1可以有效抑制PRV的复制增殖。
[0013]本专利技术提供的膜联蛋白A2/S100A10异源四聚体(A2t)抑制剂A2ti
‑
1可以应用于抗PRV感染的抗病毒药物的研发。
附图说明
[0014]图1.A2ti
‑
1对PK
‑
15细胞的细胞毒性检测结果；
[0015]图2.免疫荧光法检测A2ti
‑
1对PRV在PK
‑
15细胞上增殖的抑制作用；
[0016]其中，PRV
‑
GFP是绿色荧光，荧光强度越大，表明病毒增殖越多，可以看到，与0μM组相比，当抑制剂浓度为62.5μM和125μM时，PRV
‑
GFP的绿色荧光强度显著降低；
[0017]图3.A2ti
‑
1不同剂量对抑制PRV体外增殖的依赖性检测结果；
[0018]其中，A，PRV DNA含量；B，病毒滴度TCID
50
；
[0019]图4.A2ti
‑
1不同作用时间对PRV体外增殖的抑制作用；
[0020]其中，
“‑”
，对照组；“+”抑制剂处理组。
具体实施方式
[0021]以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。
[0022]本专利技术实施例中所用的主要实验材料及仪器设备：
[0023](1)主要实验材料
[0024]PK
‑
15细胞、PRV
‑
GFP毒株、PRV
‑
HeNLH/2017毒株由本实验室保存，PRV gE鼠源单克隆抗体、pEASY
‑
Blunt
‑
UL54标准质粒由本实验室制备保存。鼠源β
‑
tubulin单抗(货号：M20005，Abmart公司)；Alexa Fluor 488驴抗小鼠抗体(货号：A21202，Invitrogen公司)；DAPI(2
‑
(4
‑
Amidinophenyl)
‑6‑
indolecarbamidine dihydrochloride)(货号：D8200，Solarbio公司)；CellTiter 96 AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒(货号：G3582，Promega公司)；DMEM细胞培养基(Dulbecco
’
s modified Eagle
’
s Medium)(货号：12100，Solarbio公司)；蛋白Marker(货号：PR1930，Solarbio公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(货号：FSP500，ExCell Bio公司)；抑制剂A2ti
‑
1(货号：HY
‑
136465，MCE公司)；荧光定量试剂SYBR Green(货号：04913914001，Roche公司)；ECL超敏化学发光液(货号：P10300，新赛美公司)；病毒核酸提取试剂盒(货号：RC31本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制剂A2ti
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1在抑制伪狂犬病毒体外复制增殖中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制剂A2ti
‑
1的使用浓度为31.25μmol/L～250μmol/L。3.如权利要求2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭振华，张改平，翁茂洋，宋佳，姜瑶，乔松林，郭军庆，
申请(专利权)人：河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，
类型：发明
国别省市：