一种FGFR抑制剂的筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种FGFR抑制剂的筛选方法：1)向FGFR1OP2蛋白表达量不同的细胞株分别施用待检测的FGFR抑制剂、测试所述待检测的FGFR抑制剂的药效；2)判断不同细胞株之间的药效与不同细胞株之间的FGFR1OP2蛋白表达量的相关性。本发明专利技术还公开了一种适用于特定FGFR抑制剂的细胞模型的筛选方法：1)检测待检测细胞模型中的FGFR1OP2蛋白表达量；2)判断所述FGFR1OP2蛋白表达量的高低。该方法具有灵敏度高、指示准确等优势，适合药物的推广及应用。适合药物的推广及应用。适合药物的推广及应用。

【技术实现步骤摘要】
一种FGFR抑制剂的筛选方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种FGFR抑制剂的筛选方法。

技术介绍

[0002]FGFR1OP2蛋白主要在细胞质中表达，目前为止FGFR1OP2的功能目前研究很少。目前报道的主要为FGFR1OP2
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FGFR1融合可能参与EMS(myeloproliferative syndrome)发生(Grand et al.,2004)以及FGFR1OP2
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FGFR1融合可诱发粒性白血病的发生(Qin et al.,2015)。FGFR1OP2可能参与了FGFR1信号通路。
[0003]FGFR1是一个跨膜蛋白，FGFR信号通路通过胞外段接受信号，自磷酸化激活TK结构域，络氨酸激酶影响下游重要的蛋白包括PTPN11，SOS，FRS2等参与JAK/STAT，PI3k/ATK/mTOR，RAS/RAF/MAPK等信号通路。(Brewer,et al.,2016.)JM为FGFR1蛋白重要的调控区域，一些其他TKI或GPCR通过adopter结合JM区域，参与调节FGFR1的自激活。靶向FGFRs的抑制剂具有治疗相关疾病的潜力，越来越多的研究机构和制药公司将其作为具有前景的治疗靶标，FGFRs抑制剂已成为靶向药物研究的热点之一。但FGFR抑制剂总体的响应率低，无明显好用的生物标志物来指示其药效和筛选合适的患者。目前效果好的生物标志物为FGFR2融合，而这些融合在肿瘤发生的比例低，不适合药物的推广和应用。
[0004]因此急需一种新的生物标志物用来指示FGFR药效或筛选合适的患者。

技术实现思路

[0005]为克服现有技术中存在的缺陷，本专利技术提供一种FGFR抑制剂的筛选方法。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]本专利技术技术方案之一为：提供一种FGFR抑制剂的筛选方法，其包含以下步骤：
[0008](1)向FGFR1OP2蛋白表达量不同的细胞株分别施用待检测的FGFR抑制剂、测试所述待检测的FGFR抑制剂的药效；
[0009](2)判断待检测FGFR抑制剂对不同细胞株的药效与不同细胞株的FGFR1OP2蛋白表达量之间的相关性。
[0010]其中，步骤(1)中所述不同的细胞株优选同种细胞株，以便于平行比较。例如：其他细胞状态均相同，仅FGFR1OP2蛋白表达量不同的KATOIII细胞株。
[0011]步骤(2)中：若药效与FGFR1OP2蛋白表达量呈正相关，则所述待检测的FGFR抑制剂为有效的FGFR抑制剂。
[0012]本专利技术中所述药效(即：抑制剂的功效)可为本领域常规，通常体现为IC50、EC50、ED50、pIC50、Ki、Kd和Score。具体解释如下。
[0013]EC50值：药物达到最大临床功效(可以是抑制或者刺激)50％时的浓度。这是一个药用术语。
[0014]ED50值：50％的个体表现出特定药效时药物的有效剂量(而非浓度)。
[0015]IC50值：达到50％抑制效果时抑制剂的浓度。
[0016]pIC50值：IC50值的10的负对数。
[0017]Ki值：检测到50％抑制效果时，抑制剂的浓度(采用Michaelis
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Menten动力学计算获得)。
[0018]Kd值：二个或更多生物分子组成的复合物分离成组分时的平衡常数；例如，抑制剂或底物从酶分离时的pIC50值。
[0019]Score值：指对接的打分，评价的是小分子与蛋白或者蛋白与蛋白的结合亲和力，S一般为负值，绝对值越大，表示结合亲和力越强，小分子或者蛋白的活性越高。
[0020]本专利技术优选使用IC50来表征所述待检测的FGFR抑制剂的药效。
[0021]较佳地，所述的细胞株来源于实体瘤患者或白血病患者的细胞系。
[0022]本专利技术着重研究FGFR1OP2蛋白表达量对抑制剂在细胞株中药效的影响，因此所述细胞株是指来源于已排除其他变量的细胞系。例如KATOIII、KG1、NCIH716、SKNO1、SKNO1、SUPB15、OPM2、BDCM、NCIH2009、HGC27、MFE296、NCIH1703、REH、G401、G292CLONEA141B1、NCIH1703、AN3CA、A375、HCT116、NCIH460、MFE280、DLD1、NCIH1975、LP1、A498、SNU423、NUGC3、HCC1954、BGC823、CAPAN1、CAMA1、SNU449、MKN7。
[0023]关于以上所述筛选方法的结果判断，在本专利技术一具体实施方案中：
[0024]当第一细胞株与第二细胞株相比，FGFR1OP2蛋白表达量较低，而IC50值较高时，说明所述待检测的FGFR抑制剂有效。
[0025]本专利技术技术方案之二为：提供一种适用于特定FGFR抑制剂的细胞模型的筛选方法，其包含以下步骤：
[0026](1)检测待检测细胞模型中的FGFR1OP2蛋白表达量；
[0027](2)判断所述FGFR1OP2蛋白表达量的高低(数值)。
[0028]在本专利技术一具体实施方案中，基于步骤(2)中对所述蛋白表达量的数值，选择其中FGFR1OP2蛋白表达量高于普遍水平的细胞模型用于特定FGFR抑制剂。
[0029]较佳地，所述细胞模型为来源于实体瘤患者或白血病患者的细胞系。
[0030]本专利技术中，所述检测方法可为本领域常规，例如为qPCR检测。当使用qPCR进行检测时，所用正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；或正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0031]本专利技术技术方案之三为：提供一种测定FGFR1OP2表达量的试剂在筛选FGFR抑制剂或筛选适用于特定FGFR抑制剂的细胞模型中的应用。
[0032]测定FGFR1OP2表达量的方法可为本领域常规，例如可以包括芯片(蛋白质芯片和微流控芯片等)、数字式单分子免疫阵列、ELISA、放射免疫测定法、免疫透射比浊法、免疫组织化学法、Western印迹等，以及其他可基于使用抗体的已知方法。
[0033]其中，以上技术方案中所述“细胞系”包含临床来源的细胞样本；所述“细胞模型”包含细胞株、细胞系、临床样本等所有来源的细胞，本专利技术中所述细胞模型主要指的是药物筛选细胞模型。
[0034]本专利技术的积极进步效果在于：
[0035]本专利技术将FGFR1OP2表达量作为生物标志物来指示的药效或筛选合适的患者，具有指示准确、灵敏度高、整体响应率好的优势，适合药物的推广和应用。
附图说明
[0036]图1为FGFR抑制剂对不同细胞系的药效与其FGFR1OP2表达量的关系。
[0037]图2为PDX模型中不同样本的FGFR1OP2表达量结果。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种FGFR抑制剂的筛选方法，其特征在于，其包含以下步骤：(1)向FGFR1OP2蛋白表达量不同的细胞株分别施用待检测的FGFR抑制剂、测试所述待检测的FGFR抑制剂的药效；(2)判断不同细胞株之间的药效与不同细胞株之间的FGFR1OP2蛋白表达量的相关性。2.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤(2)中：若药效与FGFR1OP2蛋白表达量呈正相关，则所述待检测的FGFR抑制剂为有效的FGFR抑制剂。3.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述的药效体现为所述待检测的FGFR抑制剂的IC50值；和/或，所述细胞株为KATOIII、KG1、NCIH716、SKNO1、SKNO1、SUPB15、OPM2、BDCM、NCIH2009、HGC27、MFE296、NCIH1703、REH、G401、G292CLONEA141B1、NCIH1703、AN3CA、A375、HCT116、NCIH460、MFE280、DLD1、NCIH1975、LP1、A498、SNU423、NUGC3、HCC1954、BGC823、CAPAN1、CAMA1、SNU449或者M...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉光，冯振华，王飞澜，张农，王静，肖雯娟，
申请(专利权)人：广州再极医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：