一种MERS-CoVS-RBD线性B细胞表位及其特异性识别单克隆抗体和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种MERS

【技术实现步骤摘要】
一种MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位及其特异性识别单克隆抗体和应用


[0001]本专利技术涉及一种MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位及其特异性识别单克隆抗体和应用，属于分子生物学和免疫学领域。

技术介绍

[0002]中东呼吸综合征(Middle East Respiratory Syndrome，MERS)是由中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus，MERS
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CoV)引起的一种传染性和高致死性的呼吸系统疾病，主要表现为非典型性肺炎和急性呼吸综合征，严重者可引发肾衰竭而死亡。中东呼吸综合征冠状病毒S蛋白(棘突糖蛋白，spike glycoprotein)是三聚体状态的I型跨膜糖蛋白，位于病毒膜表面，介导病毒附着宿主细胞及病毒
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细胞膜的融合，是细胞靶向性和发病机制的主要决定因子。S蛋白包含S1亚基和S2亚基两个功能子单元，其中S1亚基包含N端结构域(N
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terminal domain，NTD)和独立折叠的受体结合域(receptor
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binding domain，RBD)，RBD与细胞受体二肽激肽酶4(DPP4)结合，介导病毒颗粒附着于细胞。研究发现，全长S蛋白、S1以及RBD均可作为开发MERS
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CoV疫苗和治疗抗体的靶点。因此S
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RBD目前成为许多科研工作者的主要研究对象。然而，对于MERS
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CoV S
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RBD抗原表位鉴定及其免疫识别等问题尚有待全面解决。

技术实现思路

[0003]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位及其特异性识别单克隆抗体和应用。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0005]一种MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位肽，所述表位肽的氨基酸序列为：FTCSQIS。
[0006]一种单克隆抗体6E8，特异性识别含有所述的MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位序列肽或蛋白。
[0007]所述单克隆抗体6E8是由保藏编号为CCTCC NO:C2021159的杂交瘤细胞株6E8分泌，该杂交瘤细胞株6E8保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为武汉大学，保藏时间为2021年7月6日。
[0008]所述的MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位肽在制备MERS诊断试剂或药物中的应用。
[0009]编码所述MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位肽的核苷酸序列。
[0010]所述核苷酸序列为TTTACATGTAGCCAGATCTCT。
[0011]本专利技术有益效果：
[0012]本专利技术利用HEK 293F细胞表达系统表达MERS
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CoV S1重组蛋白，经镍填料亲和层析和凝胶过滤层析两步纯化步骤，获得了高纯度、具有生物学活性和免疫原性的目的蛋白。随后免疫BALB/c小鼠，获得单克隆抗体；利用酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其中一株单克隆抗体6E8可特异性识别RBD
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rFc蛋白；利用真核细胞HEK
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293T重组表达MERS
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CoV S
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RBD重
组蛋白不同片段，通过Dot
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blot鉴定获得的6E8单克隆抗体特异性识别MERS
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CoV S
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RBD N端区域，序列为TKLLSLFSVNDFTCSQISPAAI；利用酶联免疫吸附试验(enzyme
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linked immunosorbent assay，ELISA)进一步鉴定MERS
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CoV S
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RBD N端区域合成多肽，鉴定获得的6E8单克隆抗体特异性识别序列为FTCSQIS的线性B细胞表位。
[0013]本专利技术综合利用分子生物学和免疫学等技术，鉴定了一种MERS
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CoV S
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RBD的全新线性B细胞表位，利用本专利技术制备的6E8单克隆抗体对含有MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位的多肽、蛋白进行识别，表明该MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位可被特异性识别。
[0014]本专利技术鉴定的MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位丰富了MERS
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CoV S
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RBD免疫学功能，为后续研究S蛋白抗原漂移提供参考，可应用于抗病毒药物研发。
附图说明
[0015]图1是MERS
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CoV S1重组蛋白纯化结果。
[0016]图中，M：蛋白marker，1：MERS
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CoV S1蛋白。
[0017]图2是MERS
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CoV S
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RBD重组蛋白纯化结果。
[0018]图中，M：蛋白marker，1：MERS
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CoV S
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RBD蛋白。
[0019]图3是ELISA鉴定制备的MERS
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CoV S
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RBD单克隆抗体的结果。
[0020]图4是Dot
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blot鉴定制备的MERS
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CoV S
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RBD单克隆抗体识别的MERS
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CoV S
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RBD片段。
[0021]图中，A:MERS
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CoV S
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RBD截短片段示意图，B:Dot
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blot鉴定制备的MERS
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CoV S
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RBD单克隆抗体识别的截短体片段，C：Dot
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blot鉴定制备的MERS
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CoV S
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RBD单克隆抗体识别的N1截短体片段。
[0022]图5是ELISA鉴定制备的MERS
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CoV S
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RBD单克隆抗体识别的MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位的结果。
具体实施方式
[0023]以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。
[0024]实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位肽，其特征在于，所述表位肽的氨基酸序列为：FTCSQIS。2.一种单克隆抗体6E8，其特征在于，特异性识别含有权利要求1所述的MERS
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CoV S
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RBD线性B细胞表位序列肽或蛋白。3.如权利要求2所述单克隆抗体6E8，其特征在于，所述单克隆抗体6E8是由保藏编号为CCTCC NO:C2021159的杂交瘤细胞株6E8分泌，该杂交瘤细胞株6E8保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为武汉大学，...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏蔷，张改平，王爱萍，王攀，丁培阳，刘运超，冯华，尚延丽，李青梅，
申请(专利权)人：河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，
类型：发明
国别省市：