多肽、三聚体、SARS-CoV-2中和抗体的检测试剂和检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种多肽、三聚体、SARS

【技术实现步骤摘要】
多肽、三聚体、SARS
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CoV
‑
2中和抗体的检测试剂和检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，特别是涉及一种多肽、三聚体、SARS
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CoV
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2中和抗体的检测试剂和检测试剂盒。

技术介绍

[0002]严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coro
‑
navirus 2，SARSCoV
‑
2)属于β属的新型冠状病毒，圆形或椭圆形，直径60～140nm，电镜下呈皇冠样形状。
[0003]SARS
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CoV
‑
2表面的棘突蛋白(spike protein，简称S蛋白)是冠状病毒表面重要的受体结合位点，其可与细胞表面病毒特异性受体结合、介导病毒外膜与细胞融合、病毒吸附及穿膜；冠状病毒S蛋白受体结合域(receptor binding domain，RBD)可使病毒与宿主细胞表面的血管紧张素转化酶2(angiotensin
‑
converting enzyme2，ACE2)结合，并使病毒进入宿主细胞。当SARS
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CoV
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2在侵入机体时，会刺激机体产生具有保护作用的中和抗体，专门阻止病原微生物进入细胞，防止感染。中和抗体是由适应性免疫应答细胞分泌的一种可溶性蛋白，具有识别病毒表面蛋白、阻断其与细胞表面特异性受体结合的功能，从而发挥抗病毒作用。中和抗体的多少是疫苗免疫保护效果的一项重要指标，是疫苗评估和质控的重要依据。
[0004]目前用于检测SARS
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CoV
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2中和抗体的试剂盒，多运用竞争法原理，利用重组S蛋白或S蛋白的RBD片段、和刺突蛋白受体来检测待测样本中的SARS
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CoV
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2中和抗体。然而，目前的重组S蛋白或S蛋白的RBD片段、和刺突蛋白受体的亲和力较差，从而使得目前检测SARS
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CoV
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2中和抗体的试剂盒的检测准确性较差。

技术实现思路

[0005]基于此，有必要提供一种与刺突蛋白受体的亲和力较好的多肽。
[0006]此外，还提供一种对刺突蛋白受体的亲和力好的上述多肽的三聚体、含有上述多肽和/或上述三聚体的SARS
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CoV
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2中和抗体的检测试剂和检测试剂盒。
[0007]一种多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0008]上述多肽通过选取S蛋白第331位氨基酸至第583位氨基酸的多肽，并进行Q498Y突变，使得该多肽片段不仅能与SARS
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CoV
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2刺突蛋白受体特异性结合，而且其与刺突蛋白的亲和力还高于天然RBD对刺突蛋白受体的亲和力。
[0009]一种三聚体，所述三聚体由三条权利要求1所述的多肽聚合而成。
[0010]在其中一个实施例中，所述多肽通过三官能团的交联剂聚合。
[0011]在其中一个实施例中，所述交联剂选自三
‑
(琥珀酰亚胺)氨基三乙酸酯、三
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(2
‑
马来酰亚胺基乙基)胺、硫代琥珀酰亚胺基[2
‑6‑
(生物素酰胺)
‑2‑
(p
‑
叠氮苯甲酰氨基)
‑
己烷酰胺]乙基
‑1‑3′‑
二硫丙酸酯及β
‑
[三(羟基甲基)膦基]丙酸中的至少一种。
[0012]一种SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体的检测试剂，包括上述多肽和/或上述三聚体。
[0013]在其中一个实施例中，所述三聚体与固相载体缀合。
[0014]一种SARS
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CoV
‑
2中和抗体的检测试剂盒，包括上述的三聚体、和能与所述三聚体特异性结合的竞争性物质，所述竞争性物质标记有信号物质。
[0015]在其中一个实施例中，所述竞争性物质为所述三聚体的抗体或SARS
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CoV
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2刺突蛋白受体。
[0016]在其中一个实施例中，所述竞争性物质包括人抗体Fc片段和连接在所述人抗体Fc片段上的两条氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的多肽片段。
[0017]在其中一个实施例中，所述信号物质选自发色团、地高辛标记探针、电子致密物质、胶体金及产生可检测信号的酶中的至少一种。
[0018]在其中一个实施例中，所述信号物质选自吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺及吖啶酯三氟甲基磺酰胺中的至少一种。
[0019]在其中一个实施例中，制备标记有所述信号物质的竞争性物质的步骤包括：在pH为8～10的条件下，将所述竞争性物质、所述信号物质和缓冲液混合反应，制备标记有所述信号物质的竞争性物质。
[0020]在其中一个实施例中，所述检测试剂盒还包括SARS
‑
CoV
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2中和抗体标准品、稀释用缓冲液、样本稀释液、洗脱液、保护蛋白溶液、发光底物溶液和反应杯中的至少一种。
[0021]在其中一个实施例中，所述检测试剂盒包括样本稀释液，所述样本稀释液包括柠檬酸缓冲液、NaCl、甘氨酸、封闭剂A、EDTA
‑
2Na、卵清蛋白、酪蛋白钠盐、SDS、CHAPS和异嗜性抗体阻断剂A。
[0022]在其中一个实施例中，所述三聚体与固相载体缀合。
附图说明
[0023]图1为实施例1的制备RBD
‑
mutat1三聚体的路线；图2为实施例1中RBD重组抗原交联前的电泳结果图；图3为实施例1中RBD重组抗原经交联形成三聚体后的电泳结果图；图4实施例1中ACE2
‑
Fc二聚体的平面结构示意图；图5实施例1中的各三聚体与ACE2
‑
Fc二聚体亲和力的结果。
具体实施方式
[0024]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本专利技术公开内容更加透彻全面。
[0025]此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。“CHAPS”是3
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[(3
‑
Cholamidopropyl)
‑
dimethyl
‑
ammonio]‑1‑
propane sulfonate；N,N
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Dimethyl
‑
N
‑
(3
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sulfopropyl)
‑3‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.一种三聚体，其特征在于，所述三聚体由三条权利要求1所述的多肽聚合而成。3.根据权利要求2所述的三聚体，其特征在于，所述多肽通过三官能团的交联剂聚合。4.根据权利要求3所述的三聚体，其特征在于，所述交联剂选自三
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(琥珀酰亚胺)氨基三乙酸酯、三
‑
(2
‑
马来酰亚胺基乙基)胺、硫代琥珀酰亚胺基[2
‑6‑
(生物素酰胺)
‑2‑
(p
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叠氮苯甲酰氨基)
‑
己烷酰胺]乙基
‑1‑3′‑
二硫丙酸酯及β
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[三(羟基甲基)膦基]丙酸中的至少一种。5.一种SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体的检测试剂，其特征在于，包括权利要求1所述的多肽和/或权利要求2～4任一项所述的三聚体。6.根据权利要求5所述的检测试剂，...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴力强，程方明，龚育清，林晓涛，钱纯亘，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：