猫冠状病毒重组抗原、其基因工程亚单位疫苗及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种猫冠状病毒重组抗原、其基因工程亚单位疫苗及应用。所述猫冠状病毒重组抗原包括具有SEQ ID NO：2所示序列或其增加或截短的序列的重组蛋白。所述疫苗包含所述重组蛋白以及医药学上可接受的载剂。本发明专利技术提供的猫冠状病毒重组抗原免疫原性高，能产生高浓度的中和抗体，不会产生ADE效应。同时，本发明专利技术通过采用杆状病毒昆虫细胞表达系统，并使用悬浮培养Sf9细胞的方式进行所述猫冠状病毒重组抗原的表达，不仅表达水平高，蛋白免疫原性好，而且由此制备的疫苗还具有质控容易、批次间稳定、生产成本低等优点。生产成本低等优点。生产成本低等优点。

【技术实现步骤摘要】
猫冠状病毒重组抗原、其基因工程亚单位疫苗及应用


[0001]本专利技术涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种猫冠状病毒重组抗原、其基因工程亚单位疫苗及应用，属于动物免疫药物


技术介绍

[0002]猫冠状病毒(Feline Coronavirus，FCoV)是猫科动物中常见的病原体，主要包括猫肠道冠状病毒(Feline Enteric Coronavirus，FECV)和猫传染性腹膜炎病毒(Feline Infectious Peritonitis Virus，FIPV)等。其中FECV的感染仅限于肠道内，具有高传染性，会引起猫的体温上升、食欲不振甚至脱水等症状，致死率较低。FIPV是FECV的高毒力突变株，其获得了在巨噬细胞内复制的能力，可以摆脱肠道的限制，从而引起更多器官被感染。FIPV的致病机制主要依赖于病毒感染后诱导机体产生的抗体依赖性增强作用(Antibody
‑
dependent enhancement，ADE)。FIPV的感染可分为腹腔中有积液(湿型)和没有积液(干型)，主要特征为腹膜炎、化脓性肉芽肿性血管炎、大量腹水积聚、高传染率及高致死率等。部分猫感染FcoV后会由原来的无症状或轻度肠道感染转变为腹膜炎症状，严重影响了猫养殖及其相关产业的发展。
[0003]FCoV属于冠状病毒科冠状病毒属，是一种有囊膜的不分节段单股正链RNA病毒，具有典型的冠状病毒基因组结构，其基因组编码病毒聚合酶(Pol)、4种结构蛋白(主要包括衣壳蛋白N、纤突糖蛋白S、膜蛋白M、次级跨膜蛋白E)和5种特异性附属蛋白(3a
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c、7a和7b)。其中S蛋白是I型跨膜蛋白，具有长的N端功能区和短的C端细胞质尾区，N端(S1区)负责受体结合区域(Receptor
‑
binding Domain，RBD)，是决定病毒抗原和诱导中和抗体的重要蛋白，针对冠状病毒RBD的特异性抗体能与S蛋白RBD结合，产生中和作用。C端(S2区)含有的融合肽是融合所必需的元件，可介导与靶细胞膜融合，对病毒入侵、复制和集体的免疫反应均起到重要作用。
[0004]随着人类对猫饲养数量的逐年增加，对于FcoV治疗预防制剂的临床需求越来越多。抗病毒药、免疫刺激药、抗炎药和干扰素等已被实验性用于FcoV的治疗，但少有成效。一些常规疫苗对该FcoV感染的防治效果也不佳，主要是因为FIPV存在ADE现象，先前在宿主体内存在的FCoV抗体在对抗表面蛋白质时会增强FIPV的感染，从而导致病情加重。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的在于提供一种猫冠状病毒重组抗原、其基因工程亚单位疫苗及应用，以克服现有技术中的不足。
[0006]为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：
[0007]本专利技术实施例提供了一种重组蛋白，其具有SEQ ID NO：2所示序列或者与SEQ ID NO：2的全长序列95％以上相同的序列。即，本专利技术实施例提供的所述重组蛋白的氨基酸序列可以是原始序列、增加或截短的序列。
[0008]本专利技术实施例还提供了用于编码所述重组蛋白的基因。
[0009]在一些实施方式中，所述的基因具有SEQ ID NO：1所示序列或者与SEQ ID NO：1的全长序列95％以上相同的序列。
[0010]本专利技术实施例还提供了一种猫冠状病毒重组抗原，其包括所述的重组蛋白。
[0011]本专利技术实施例还提供了包含所述重组蛋白的编码基因的重组载体。
[0012]在一些实施方式中，所述重组载体包括但不限于pFastBac1、pVL1393、pFastBac dual等，并优选采用pFastBac1。
[0013]本专利技术实施例还提供了包含所述重组蛋白的编码基因的宿主细胞。
[0014]在一些实施方式中，所述宿主细胞选自昆虫细胞，例如Sf9细胞系，优选的，所述Sf9细胞系包括但不限于Sf9、High Five或Sf21细胞，更优选为Sf9细胞。
[0015]本专利技术实施例还提供了一种免疫组合物，其特征在于包括：所述的重组蛋白或所述的猫冠状病毒重组抗原；以及，医药学上可接受的载剂。
[0016]在一些实施方式中，所述医药学上可接受的载剂包括但不限于MONTANIDE ISA 206VG、MONTANIDE ISA 201 VG、MONTANIDE GEL 01 ST、弗氏佐剂、氢氧化铝胶佐剂、植物油、细胞因子之中的一种或者两种以上的组合，并优选使用氢氧化铝胶佐剂。
[0017]本专利技术实施例还提供了所述重组蛋白的一种制备方法，其包括：在合适条件下培养所述的宿主细胞，之后从培养液和/或所述宿主细胞中分离获得所述的重组蛋白。
[0018]在一些实施方式中，所述的制备方法具体包括：
[0019]将所述重组蛋白的编码基因克隆到穿梭载体中，获得含有目的基因的重组穿梭载体；
[0020]将所述重组穿梭载体转化感受态细胞，并分离获得含有目的基因表达框的重组杆状病毒基因组质粒；
[0021]以所述重组杆状病毒基因组质粒转染昆虫细胞，并分离获得重组杆状病毒；
[0022]将所述重组杆状病毒接种昆虫细胞并进行培养，之后分离、纯化获得所述重组蛋白。
[0023]其中，可以采用本领域已知的多种方式将培养后的昆虫细胞进行裂解，再从其裂解液中分离、纯化获得所述重组蛋白。
[0024]其中，用于分离、纯化所述重组蛋白的方法包括但不限于层析、透析或本领域已知的其它方法。
[0025]在一些实施方式中，所述穿梭载体包括但不限于pFastBac 1、pVL1393、pFastBac dual等，优选采用pFastBac 1。
[0026]在一些实施方式中，所述昆虫细胞包括但不限于Sf9、High Five或Sf21细胞等，优选为Sf9细胞。
[0027]本专利技术实施例还提供了一种猫冠状病毒基因工程亚单位疫苗的制备方法，其包括：采用前述的任一种方法制备重组蛋白，并将所述重组蛋白与医药学上可接受的载剂混合。
[0028]本专利技术实施例还提供了所述重组蛋白或所述免疫组合物在制备猫冠状病毒检测试剂，在生产用于在受试动物中诱导针对猫冠状病毒抗原的免疫反应的药剂，或者，在生产用于预防动物受猫冠状病毒感染的药剂中的用途。
[0029]本专利技术实施例还提供了所述重组蛋白或所述免疫组合物在制备猫冠状病毒基因
工程亚单位疫苗中的用途。
[0030]本专利技术实施例提供了一种猫冠状病毒基因工程亚单位疫苗，其包含前述的任一种免疫组合物。进一步的，所述疫苗还可包含医药学上可接受的载剂。
[0031]本专利技术实施例还提供了包含所述重组蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于检测动物受猫冠状病毒感染的试剂的用途。
[0032]本专利技术实施例还提供了包含所述重组蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于在受试动物中诱导针对猫冠状病毒抗原的免疫反应的药剂的用途。
[0033]本专利技术实施例还本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猫冠状病毒重组抗原，其特征在于：所述重组抗原包括具有SEQ ID NO：2所示序列或其增加或截短的序列的重组蛋白。2.用于编码具有SEQ ID NO：2所示序列或其增加或截短的序列的重组蛋白的基因；优选的，所述基因具有SEQ ID NO：1所示序列或其增加或截短的序列。3.包含权利要求2所述基因的重组载体；优选的，所述重组载体包括pFastBac1、pVL1393或pFastBac dual，更优选为pFastBac1。4.包含权利要求2所述基因的宿主细胞；优选的，所述细胞包括Sf9、High Five或Sf21细胞，更优选为Sf9细胞。5.一种免疫组合物，其特征在于包括：具有SEQ ID NO：2所示序列或其增加或截短的序列的重组蛋白；以及，医药学上可接受的载剂。6.如权利要求5所述的免疫组合物，其特征在于：所述医药学上可接受的载剂包括MONTANIDE ISA 206VG、MONTANIDE ISA 201VG、MONTANIDE GEL 01 ST、弗氏佐剂、氢氧化铝胶佐剂、植物油、细胞因子之中的任意一种或者两种以上的组合；优选为氢氧化铝胶佐剂。7.一种猫冠状病毒重组抗原的制备方法，其特征在于包括：在合适条件下培养权利要求4所述的宿主细胞，之后从培养液和/或所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：方鹏飞，孔迪，曹文龙，滕小锘，张大鹤，
申请(专利权)人：苏州米迪生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：