适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒的驯化方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒的驯化方法与应用。所述驯化方法包括：将核型多角体病毒加水稀释10～20倍后施加于小叶黄杨枝叶上，获得含病毒饲料；先以苦参碱对黄杨绢野螟幼虫进行处理，之后以含病毒饲料来饲养饥饿的黄杨绢野螟幼虫，收集感毒虫或死亡虫，粉碎、过滤，将滤液离心后收集，除菌，获得驯化后的游离态核型多角体病毒；以其作为毒源，并重复前述步骤，增加驯化代次；对所获驯化后的游离态核型多角体病毒进行培养和扩增，获得核型多角体病毒。本发明专利技术的核型多角体病毒对黄杨绢野螟有较强的灭杀性，具有针对性强、防治时间长，且害虫难以产生抗药性的特点，并且本发明专利技术的方法驯化成功率高。

Domestication method and application of nuclear polyhedrosis virus adapted to filariasis chrysalis

【技术实现步骤摘要】
适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒的驯化方法与应用
本专利技术涉及一种核型多角体病毒的驯化与制备方法，尤其涉及一种适用于黄杨绢野螟的核型多角体病毒的驯化和工厂化生产方法及其应用，属于生物农药

技术介绍
黄杨绢野螟，Diaphaniaperspectalis(Walker)，属鳞翅目螟蛾科绢野螟属的一种昆虫，分布广泛。其主要危害黄杨科植物，如瓜子黄杨、雀舌黄杨、大叶黄杨、小叶黄杨、朝鲜黄杨以及冬青、卫矛等植物，其中又以瓜子黄杨和雀舌黄杨受害最重。以幼虫食害嫩芽和叶片，常吐丝缀合叶片，于其内取食，受害叶片枯焦，严重的街道被害株率50％以上，甚至可达90％，暴发时可将叶片吃光，造成黄杨成株枯死，影响市容，污染环境。化学药物防治仍是控制该虫的重要应急措施，防治药物主要为有机磷农药，也有阿维菌素、BT乳剂的应用，但普遍面临抗药性增加、天敌受害严重、污染环境等问题，特别是面临世代重叠，很难做到彻底防治。联合国粮农组织和世界卫生组织于1973年推荐昆虫杆状病毒用于农作物害虫的生物防治。昆虫病毒作为生物防治的重要手段之一，其优点在于特异性强、毒力高、稳定性好、安全无害，用后能引起害虫群体病毒疾病的流行传播，在相当长时间内可自然控制害虫消长，导致相继世代持续带毒，感染死亡。与其他化学农药和生物农药相比，昆虫病毒杀虫剂到目前未发现抗性问题，这为病毒杀虫剂的发展带来了良好的契机。目前广泛用于生物防治的主要是杆状病毒，尤其是核型多角体病毒。目前的昆虫病毒来源主要是野外发现并采集，但这种方法既昂贵成本高，费时效率低，又不能适应现代环境虫情暴发与防控的需要。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒的驯化方法及应用，以克服现有技术的不足。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：本专利技术实施例提供了一种适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒的驯化方法，其包括：1)提供核型多角体病毒，并加水稀释10～20倍并施加于小叶黄杨枝叶上，获得含病毒饲料；2)先以苦参碱对黄杨绢野螟幼虫进行处理，再以所述含病毒饲料来饲养饥饿的黄杨绢野螟幼虫，之后收集感毒虫或死亡虫，粉碎、过滤，将滤液离心后收集，除菌，获得驯化后的游离态核型多角体病毒；3)以所述驯化后的游离态核型多角体病毒作为毒源，并重复步骤1)～2)，增加驯化代次；4)对步骤3)所获驯化后的游离态核型多角体病毒进行虫体培养和扩增，之后提纯，最终获得适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒。进一步地，所述核型多角体病毒包括苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒、茶尺蠖核型多角体病毒、斜纹夜蛾核型多角体病毒或甜菜夜蛾核型多角体病毒等，但不限于此。进一步地，步骤3)中驯化代次为20～30代。本专利技术实施例还提供了由前述驯化方法制得的适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒。本专利技术实施例还提供了一种生物农药，其有效成分包含前述的适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒。进一步地，所述所述生物农药还包括乳化剂、分散剂、增稠剂、防冻剂、消泡剂，余量包括水。与现有技术相比，本专利技术的优点包括：1)本专利技术驯化后的核型多角体病毒对黄杨绢野螟有较强的灭杀性，杀虫率为90％以上，具有针对性强、分散性好、溶解均匀、吸收快、药效高且害虫难以产生抗药性的特点，有良好的使用效果；2)本专利技术在饲养之前，预先以亚致死剂量的化学药剂(本案用苦参碱)对幼虫进行处理，从而破坏幼虫的免疫系统，使病毒更容易感染；3)本专利技术是通过室内驯化的方法来定向培育所需病毒，与现有野外病毒采集制备和活体培养驯化相比，实用性强、驯化效率高，能大幅的节约时间、成本、人力和物力。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术效果验证例2中害虫危害状的照片。图2是本专利技术效果验证例2中用药5天后害虫死亡状的照片。图3是本专利技术效果验证例2中用药30天后小叶黄杨呈现恢复生长状的照片。图4是本专利技术效果验证例2中用药140天后小叶黄杨呈现健康生长状的照片。具体实施方式鉴于现有技术存在的技术问题，本案专利技术人经长期研究和大量实践，得以提出本专利技术的技术方案，其主要是适用于黄杨绢野螟的核型多角体病毒的室内驯化与制备方法，该方法制备的生物农药的剂型为悬浮剂，有效成分为核型多角体病毒。该方法具体包括病毒驯化，核型多角体病毒的收集与扩增和剂型配制等步骤。如下将对该技术方案、其实施过程及原理等作进一步的解释说明。本专利技术实施例的一个方面提供的一种适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒的驯化方法，其是通过昆虫室内培养来定向驯化和培育所需的核型多角体病毒，主要包括：1)提供核型多角体病毒，并加水稀释5～20倍并施加于小叶黄杨枝叶上，获得含病毒饲料；2)先以苦参碱生物农药低剂量3000-4000倍对黄杨绢野螟幼虫进行处理，破坏黄杨绢野螟的免疫，提高病毒的侵染力；3)再以所述含病毒饲料来饲养饥饿的黄杨绢野螟幼虫，之后收集感毒虫或死亡虫，粉碎、过滤，将滤液离心后收集，除菌，获得驯化后的游离态核型多角体病毒；4)以所述驯化后的游离态核型多角体病毒作为毒源，并重复步骤1)～3)，增加驯化代次；5)对步骤3)所获驯化后的游离态核型多角体病毒按上述步骤1)、3)进行虫体培养和扩增，之后提纯，最终获得适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒。在一些实施例中，步骤1)包括：将核型多角体病毒农药用无菌水稀释后浸泡小叶黄杨枝叶。进一步地，所述核型多角体病毒农药与无菌水的体积比为1：10～20。进一步地，所述核型多角体病毒包括苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒、茶尺蠖核型多角体病毒、斜纹夜蛾核型多角体病毒或甜菜夜蛾核型多角体病毒等，但不限于此。在一些实施例中，步骤2)包括：将黄杨绢野螟的卵置于气候培养箱中孵化并群体饲养，并挑选出3～4龄的黄杨绢野螟幼虫，其中，所述气候培养箱的培养条件包括：温度为25.5～26.5℃，湿度55～65％，光照时长与黑暗时长的比例为14～12：10～12。进一步地，步骤3)包括：将所述3～4龄的黄杨绢野螟幼虫以苦参碱生物农药低剂量稀释3000-4000倍处理，之后饥饿12～24小时，先喂食所述含病毒饲料，再喂食正常的小叶黄杨枝叶，之后观察，收集感毒虫或死亡虫。在一些实施例中，步骤4)中驯化代次为20～30代。在一些更为具体的实施案例之中，本专利技术应用于黄杨绢野螟防治的生物农药病毒的名称为核型多角体病毒，该病毒的驯化方法包括如下几个步骤：步骤一、病毒的初次侵染：室内大量饲养黄杨绢野螟幼虫，将市面上购得的核型多角体病毒农药用无菌水低倍(1：10-20，相当于正常使用浓度的50本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒的驯化方法，其特征在于包括：/n1)提供核型多角体病毒，并加水稀释10～20倍并施加于小叶黄杨枝叶上，获得含病毒饲料；/n2)先以苦参碱对黄杨绢野螟幼虫进行处理，再以所述含病毒饲料来饲养饥饿的黄杨绢野螟幼虫，之后收集感毒虫或死亡虫，粉碎、过滤，将滤液离心后收集，除菌，获得驯化后的游离态核型多角体病毒；/n3)以所述驯化后的游离态核型多角体病毒作为毒源，并重复步骤1)～2)，增加驯化代次；/n4)对步骤3)所获驯化后的游离态核型多角体病毒进行虫体培养和扩增，之后提纯，最终获得适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒。/n

【技术特征摘要】
1.一种适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒的驯化方法，其特征在于包括：
1)提供核型多角体病毒，并加水稀释10～20倍并施加于小叶黄杨枝叶上，获得含病毒饲料；
2)先以苦参碱对黄杨绢野螟幼虫进行处理，再以所述含病毒饲料来饲养饥饿的黄杨绢野螟幼虫，之后收集感毒虫或死亡虫，粉碎、过滤，将滤液离心后收集，除菌，获得驯化后的游离态核型多角体病毒；
3)以所述驯化后的游离态核型多角体病毒作为毒源，并重复步骤1)～2)，增加驯化代次；
4)对步骤3)所获驯化后的游离态核型多角体病毒进行虫体培养和扩增，之后提纯，最终获得适应于黄杨绢野螟的核型多角体病毒。


2.根据权利要求1所述的驯化方法，其特征在于，步骤1)包括：将核型多角体病毒农药用无菌水稀释后浸泡小叶黄杨枝叶。


3.根据权利要求2所述的驯化方法，其特征在于：所述核型多角体病毒农药与无菌水的体积比为1：10～20。


4.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙祥明，滕小锘，袁秀丽，金亮，
申请(专利权)人：苏州米迪生物技术有限公司，苏州市沃美生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32