草莓镶脉病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种草莓镶脉病毒胶体金免疫试纸条及其制备方法与应用。该试纸条包括底板和放置在其上的样品垫、包被胶体金标记抗体金标垫、含有检测线T和质控线C的检测垫和吸收垫；所述胶体金标记抗体为胶体金标记由草莓镶脉病毒制备的多抗；所述检测线T由草莓镶脉病毒制备的多抗形成；所述质控线C由鼠抗兔IgG或鼠抗兔IgG溶液形成。本发明专利技术还具体公开了该草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条的制备方法。本发明专利技术的草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条检测快速且特异性强，便于对草莓种苗、脱毒苗等进行快速检测。脱毒苗等进行快速检测。

【技术实现步骤摘要】
草莓镶脉病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于胶体金免疫试纸条的制备
，具体涉及一种草莓镶脉病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]草莓产量在世界小浆果中居首位，属于蔷薇科草莓属多年生草本植物。无性繁殖植株一旦受到病毒侵染,病毒会随着无性繁殖材料传播扩散。经过几年的带毒栽培,引进品种的品质变劣、退化现象普遍发生,造成草莓严重减产,1年内可达30％
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80％,且危害逐年递增。
[0003]草莓镶脉病毒是一种对草莓危害较严重的潜隐性病毒,也是危害我国草莓生产的4种主要病毒之一。单独侵染一般不表现明显症状,复合侵染能引起草莓植株叶片扭曲,叶脉皱缩，植株极度矮化,匍匐茎大量减少等,甚至造成部分草莓地块绝产绝收。SVBV属花椰菜花叶病毒科花椰菜花叶病毒属病毒成员,目前,蚜虫是SVBV唯一的自然传播介体,以半持久性方式传播。可以嫁接传播,种子和花粉不能传播。种苗带毒已是生产中病毒传播的主要因素和草莓生产的限制因素之一。
[0004]草莓种苗中病毒的快速准确检测是防治草莓病毒病的重要措施。目前的草莓病毒检测方法有利用病毒指示植物的“小叶嫁接法”,酶联免疫吸附法、聚合酶链式反应、实时荧光定量PCR法。但是这种方法周期长、灵敏度较低、费时费工、需要特殊的仪器。

技术实现思路

[0005]本专利技术解决的技术问题是提供一种草莓镶脉病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用。
[0006]本专利技术提供的草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条，包括底板和放置在其上的样品垫、包被胶体金标记抗体金标垫、含有检测线T和质控线C的检测垫和吸收垫；
[0007]所述胶体金标记抗体为胶体金标记由草莓镶脉病毒制备的多抗；
[0008]所述检测线T由草莓镶脉病毒制备的多抗形成；
[0009]所述质控线C由鼠抗兔IgG或鼠抗兔IgG溶液形成。
[0010]上述草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条中，构成所述底板的材料为PVC板；
[0011]所述检测线和质控线之间的距离为5mm；
[0012]所述样品垫和所述包被胶体金标记抗体金标垫的叠压宽度为2mm；
[0013]所述包被胶体金标记抗体金标垫和所述检测垫的叠压宽度为2mm；
[0014]所述检测垫和所述吸收垫的叠压宽度为2mm。
[0015]所述胶体金标记抗体的包被浓度为10μg/ml；
[0016]所述检测线T的包被浓度为1.6mg/ml；
[0017]所述质控线C的包被浓度为1.0mg/ml。
[0018]上述草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条课按照下述方法制得：
[0019]1)制备草莓镶脉病毒的多抗，为将草莓镶脉病毒免疫动物，收集血清得到；
[0020]2)包被胶体金标记抗体金标垫的制备
[0021]用0.1mol/L K3CO4将胶体金溶液的pH值调整到7.4
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7.7(具体可为7.5)，加完后室温静置20min；加入Tris
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HC1缓冲液配制的5％BSA溶液至终浓度为1％混匀封闭，室温静置15min；将金标抗体复合物低速1500r/min低温4℃离心20min，弃掉底部聚合物杂质，用移液器轻轻吸取上清转移到另一离心管中，再以4℃10000r/min离心20
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30min；将得到的金标抗体产物用金标抗体复溶液以二分之一体积重悬；4℃避光保存备用；先将玻璃纤维素膜浸泡在结合垫处理液中10
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20min，置于37℃烘箱中过夜干燥，然后将金标抗体溶液均匀喷洒在玻璃纤维上，在37℃烘箱干燥1
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2h，得到包被胶体金标记抗体金标垫；
[0022]3)硝酸纤维素膜的制备
[0023]包被硝酸纤维素膜制备时检测线(T)草莓镶脉病毒多抗浓度为1.6mg/ml，1ul/cm划膜，并重复一次，质控线(C)鼠抗兔IgG浓度为1.0mg/ml，1ul/cm划膜。检测线和质控线相距5mm位于硝酸纤维素膜的中心，室温自然干燥，封装后于4℃保存备用；
[0024]4)试纸条的组装
[0025]将胶体金标记多肽P25表位抗体吸附于结合垫上得到金标抗体结合垫，再将样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫按次序保持2mm的重叠宽度后粘贴至PVC板构成的支撑层上，然后裁切为宽度为4mm的长条状试纸条，再将试纸条装入试纸卡中，放入烘烤箱中干燥保存备用。
[0026]另外，本专利技术还要求保护草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条在检测草莓镶脉病毒中的应用。
[0027]本专利技术与现有技术相比具有以下有益效果：采用胶体金标记的草莓镶脉病毒抗体成功制备了快速检测试纸条，该快速检测试纸条显示出较高的灵敏度和特异性，与其它病毒如草莓镶脉病毒和黄瓜花叶病毒无交叉反应性，并能能够在5
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10min内检测草莓镶脉病毒，而且不依赖于其它仪器和试剂，因此便于在现场快速检测草莓镶脉病毒。
附图说明
[0028]图1为本专利技术草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条的结构示意图；
[0029]图2为本专利技术草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条的检测示意图；
[0030]图3为本专利技术草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条灵敏性检测图；
[0031]图4为本专利技术草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条特异性检测图。
具体实施方式
[0032]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步阐述，但本专利技术并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。下述实施例所用草莓镶脉病毒北京分离物(BJJCX2)公开记载在下述网址https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/KX249738.1。
[0033]实施例1
[0034]如图1所示，草莓镶脉病毒病毒免疫胶体金快速检测试纸条，所述试纸条的底层为PVC板构成的支撑层，该支撑层上依次黏附有紧密相连的样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤
维素膜和吸收垫，其中金标抗体结合垫上吸附有胶体金标记的草莓镶脉病毒抗体，硝酸纤维素膜上喷涂有草莓镶脉病毒溶液印制的检测线和鼠抗兔IgG溶液印制的质控线，检测线和质控线之间的距离为5mm
[0035]草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条的制备方法为：
[0036](1)草莓镶脉病毒高效抗血清的制备
[0037]采集草莓镶脉病毒感染(RT
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PCR检测阳性)的草莓叶片，提取草莓叶片蛋白粗提液(每1g叶片中加入1ml提取液(10mM PB，pH 7.4)，用研钵充分挤压、碾碎，10℃，5000rpm，离心30min，所获得上清即为粗提液)，免疫新西兰大白兔，首次免疫三周后进行第二次免疫，以后每隔两周进行加强免疫，免疫四次之后停止免疫并采血(挑选健康的6周大小的新西兰大白兔(约2Kg)。
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条，包括底板和放置在其上的样品垫、包被胶体金标记抗体金标垫、含有检测线T和质控线C的检测垫和吸收垫；所述胶体金标记抗体为胶体金标记由草莓镶脉病毒制备的多抗；所述检测线T由草莓镶脉病毒制备的多抗形成；所述质控线C由鼠抗兔IgG或鼠抗兔IgG溶液形成。2.根据权利要求1所述的草莓镶脉病毒免疫胶体金快速检测试纸条，其特征在于：构成所述底板的材料为PVC板；所述检测线和质控线之间的距离为5mm；所述样品垫和所述包被胶体金标记抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔岩，李永强，赵磊，王步云，郑书恒，郭喜红，胡学军，徐景秀，侯海明，张保常，
申请(专利权)人：北京市植物保护站，
类型：发明
国别省市：